梁 勇，邵宛芳，黃業(yè)偉，李金玉，張冬英

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南昆明650201）

云南綠茶抗疲勞作用研究

梁 勇，邵宛芳，黃業(yè)偉，李金玉，張冬英*

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院，云南昆明650201）

研究了云南綠茶的抗疲勞作用。將昆明小鼠隨機分為5組，分別為空白對照組、陽性對照組、綠茶低、中、高劑量組，分別灌胃0.9%生理鹽水、0.5g/kg·bw紅景天、0.5、1.0、2.0g/kg·bw的綠茶茶湯。連續(xù)灌喂30d，測定小鼠力竭游泳時間。采血、分離血清并取組織樣，測定血乳酸（BLA）、乳酸脫氫酶（LDH）、肝糖元（LG）、肌糖元（MG）指標(biāo)。結(jié)果表明：與空白對照組相比，綠茶顯著延長小鼠游泳時間，降低運動后血乳酸含量，乳酸脫氫酶含量增加，肌糖元和肝糖元的儲備量增加達極顯著水平。因此，云南綠茶具有良好的抗疲勞作用，其中以中劑量組作用明顯。

云南，綠茶，抗疲勞

亞健康是現(xiàn)代人群中比較常見的現(xiàn)象之一，其最主要最常見的癥狀就是疲勞。隨著現(xiàn)代社會生活節(jié)奏的加快，慢性疲勞已成為困擾人類正常工作和生活的一種疾病現(xiàn)象。長期以來，眾多學(xué)者期望能尋找到一種安全、有效、無毒副作用的良方來有效地延緩疲勞的發(fā)生和加速疲勞的消除［1-2］。作為藥食同源的茶葉，其保健功效的研究一直是人們關(guān)注的熱點。眾多研究表明，茶具有調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善心血管疾病、抗癌、抗氧化等多重功效［3-5］。關(guān)于茶葉抗疲勞作用，本草綱目中有記載“茶苦味寒，最能降火，火為百病，火降則上清矣”。句中所提到的“火”，用現(xiàn)代語解釋就是一種包括身心疲勞的內(nèi)在心火。古人用“病從氣來”的中醫(yī)理論闡述了飲茶具有降心火、抗疲勞、壯精神的作用。現(xiàn)代研究也有茶葉抗疲勞作用的少量報道，如楊志博等比較詳細(xì)地綜述了烏龍茶抗疲勞作用［6］；龔加順等報道了普洱茶具有較好的抗疲勞作用［7］；而關(guān)于綠茶的抗疲勞作用報道資料甚少。云南是茶的起源地，云南綠茶以其豐富的內(nèi)含成分而深受消費者喜愛，而關(guān)于云南綠茶的抗疲勞作用研究甚少。本工作擬以云南綠茶為材料，通過動物小鼠模型探討其抗疲勞效果，一方面，可以為廣大茶葉消費者提供指導(dǎo)性參考；另一方面，可為深入研究云南綠茶的保健作用，充分利用云南綠茶資源提供實驗依據(jù)，以推動云南茶產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

綠茶茶湯 選用三個廠家（勐?？h云茶科技有限責(zé)任公司、云南龍潤茶業(yè)集團和云南省思茅茶樹良種場）生產(chǎn)的綠茶制備；健康昆明種小鼠 許可證號SCXK（滇）2005-0008，雌雄各半，體重25±4g，共100只，由昆明醫(yī)學(xué)院動物中心提供；血乳酸試劑盒、乳酸脫氫酶試劑盒、肌糖元試劑盒、肝糖元試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

40cm×60cm ×35cm 游泳箱（水深不低于30cm），離心機，電子天平，電熱恒溫水浴箱，752分光光度計。

1.2 實驗方法

1.2.1 茶湯制備 茶樣→沸水浸提（茶水比分別為1∶20、1∶20、1∶10；浸提時間分別為20、20、10min）→用抽濾機過濾→合并三次浸提茶湯→減壓濃縮（60℃）→茶湯濃縮液→裝瓶滅菌（120℃，20min）→其濃度相當(dāng)于1g茶/mL→低溫冷藏（4℃）

1.2.2 分組與處理 健康昆明種小鼠預(yù)飼7d后隨機分為5組：空白對照組、陽性對照組、綠茶低、中、高劑量組，每組20只小鼠，雌雄各半。低、中、高劑量組分別給予綠茶茶湯0.5、1.0、2.0g/kg·bw，相當(dāng)于人體推薦劑量5、10、20倍；空白對照組給予生理鹽水（0.9%），陽性對照組給予紅景天膠囊配制的溶液（劑量：0.5g/kg·bw）。每天早上（9：00～11：00）經(jīng)口灌胃給藥一次，連續(xù)給藥30d。

1.2.3 小鼠負(fù)重游泳實驗 每組隨機選取10只小鼠（雌雄各半），末次灌胃30min后，置小鼠在游泳箱中游泳。水深30cm，水溫30±1℃，距尾尖1cm處用細(xì)棉繩系5%體重的鉛皮。記錄小鼠自游泳開始至沉下水不再浮起的時間，作為小鼠的游泳時間（s）。

1.2.4 生化指標(biāo)測定 給藥30d的昆明種小鼠在末次灌胃前空腹12h，于末次給藥30min后，在不負(fù)重的情況下將小鼠置于溫度為 30±1℃水中游泳90min，休息60min后眼球采血，離心，制備血清，備用。同時，取肝臟和后腿部的肌肉，經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，保存，備用。按照試劑盒提供方法測定血乳酸（BLA）、乳酸脫氫酶（LDH）及肝糖元（LG）、肌糖元（MG）指標(biāo)。

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用spass11.5統(tǒng)計軟件進行處理，所有數(shù)據(jù)均以±s表示，并進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 云南綠茶對小鼠耐力的影響

小鼠負(fù)重游泳時間是抗疲勞作用的直接反應(yīng)，與抗疲勞效果呈正相關(guān)。由表1可知，灌胃中、低劑量的綠茶茶湯的力竭游泳時間長于空白對照組，說明綠茶能延長小鼠力竭游泳時間，尤以中劑量組小鼠力竭游泳時間增加的趨勢最為明顯，增加率為50.68%，與陽性對照效果（49.15%）相當(dāng)，這說明低、中劑量組的綠茶能顯著提高小鼠運動耐力。

表1 云南綠茶對小鼠負(fù)重游泳時間的影響（±s，n=10）

表1 云南綠茶對小鼠負(fù)重游泳時間的影響（±s，n=10）

注：與空白對照組比較：*P＜0.05；**P＜0.01；表2、表3同。

組別 負(fù)重游泳時間（s） 增加率（%）—49.15 32.88 50.68 9.93空白對照組陽性對照組綠茶低劑量組綠茶中劑量組綠茶高劑量組2366±416 3529±534** 3144±687* 3565±681** 2601±648

2.2 云南綠茶對小鼠血乳酸和乳酸脫氫酶的影響

劇烈運動后，動物體內(nèi)的乳酸脫氫酶會增加，以加快血乳酸的消除，從而降低運動動物機體的疲勞。由表2可知，與空白對照組相比，綠茶中、低劑量組小鼠運動后血清乳酸的含量顯著降低（P＜0.01），血清乳酸脫氫酶活力（LDH）明顯增高，這說明灌胃中、低劑量組的綠茶茶湯可以促進運動后動物體內(nèi)的乳酸脫氫酶的增加，減少體內(nèi)的血乳酸。

表2 云南綠茶對小鼠血乳酸和乳酸脫氫酶的影響（±s，n=10）

表2 云南綠茶對小鼠血乳酸和乳酸脫氫酶的影響（±s，n=10）

組別 BLA（mmol/L） LDH（U/L）4923.89±762.87空白對照組陽性對照組綠茶低劑量組綠茶中劑量組綠茶高劑量組10.80±2.45 7.92±1.89** 8.47±1.27** 8.68±1.49** 10.08±1.55 4810.56±672.29 6189.68±633.13** 5943.82±549.36** 5554.86±632.35*

2.3 云南綠茶對小鼠運動后肌糖元與肝糖元含量的影響

肝糖元（LG）和肌糖元（MG）的含量是反映疲勞程度的敏感指標(biāo)。從表3可知，與空白對照組相比，綠茶中、低劑量組肌糖元的含量均增加，呈極顯著差異（P＜0.01）。肝糖元的含量也高于空白對照組，其中以中劑量組最為明顯（P＜0.01）。這表明中、低劑量的綠茶能明顯提高小鼠運動后糖元的儲備量。

表3 云南綠茶對小鼠運動后肌糖元與肝糖元含量的影響（±s，n=10）

表3 云南綠茶對小鼠運動后肌糖元與肝糖元含量的影響（±s，n=10）

組別 MG（mg/g） LG（mg/g）空白對照組陽性對照組綠茶低劑量組綠茶中劑量組綠茶高劑量組0.73±0.14 0.92±0.17** 0.91±0.18** 0.91±0.14** 0.73±0.14 5.10±0.42 6.67±1.05** 5.90±0.74* 6.33±0.90** 5.33±1.29

3 討論

疲勞的產(chǎn)生與高強度或長時間運動或作業(yè)后體內(nèi)能量物質(zhì)如肝/肌糖元等減少、代謝產(chǎn)物如乳酸蓄積等因素有關(guān)。乳酸由無氧代謝產(chǎn)生，肌肉和血液中的乳酸堆積過多會直接或間接引起運動能力下降，是造成疲勞感的重要因素。疲勞的最直接和最客觀的表現(xiàn)是運動耐力的下降，而負(fù)重游泳時間一直以來被作為反映運動耐力的重要指標(biāo)［8］。實驗結(jié)果表明，中、低劑量的綠茶能顯著地延長小鼠負(fù)重游泳時間，其中以中劑量組最為明顯，比空白對照組小鼠的負(fù)重游泳時間延長了50.68%，而高劑量組與空白對照組相比差異不顯著，表明中、低劑量的綠茶可明顯提高小鼠的運動耐力。

長時間的劇烈運動將導(dǎo)致機體相對缺氧和糖酵解作用加快，進而產(chǎn)生大量的乳酸。乳酸濃度增加使肌肉H+和無機磷（Pi）堆積，導(dǎo)致肌肉組織內(nèi)的pH下降。而肌肉組織的pH降低是導(dǎo)致疲勞產(chǎn)生的一個主要因素。因此，血清乳酸水平也是反映機體的有氧代謝能力和疲勞程度的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，運動后綠茶低劑量組和中劑量組小鼠的血清乳酸水平均顯著低于空白對照組，說明中、低劑量的綠茶可以通過減少運動中乳酸的生成，達到延緩疲勞產(chǎn)生的效果，而高劑量組效果不明顯。LDH能催化乳酸生成丙酮酸進行進一步的代謝轉(zhuǎn)變，清除肌肉中過多的乳酸，可延緩和消除疲勞。動物體內(nèi)LDH活力越高，則抗疲勞能力越強。本研究結(jié)果表明，運動后低劑量組和中劑量組小鼠的LDH水平均顯著高于空白對照組，中、低劑量組之間差異不顯著，說明中、低劑量的綠茶可以通過提高運動中LDH水平，達到抗疲勞的效果，而高劑量組效果不明顯。

大量的研究表明，運動導(dǎo)致的體力衰竭總是和肌糖元的耗竭同時發(fā)生的。隨著肌糖元消耗的不斷增加，機體為維持血糖水平，將動用肝糖原而導(dǎo)致肝糖元減少。因此，肝糖元和肌糖元的含量是反映疲勞程度的敏感指標(biāo)。結(jié)果顯示，云南綠茶能夠維持運動后小鼠的肝糖元和肌糖元含量，從而為機體提供較好的能量儲備。但云南綠茶是通過增加肝、肌糖元儲備，還是通過減少運動時對肝、肌糖元的消耗，或者兩者兼有之，仍有待進一步研究。

據(jù)楊志博等人報道［6］，烏龍茶具有較為明顯的抗疲勞作用，烏龍茶中主要的抗疲勞成分為茶氨酸、咖啡因等，其中尤以L-茶氨酸具有較為明顯的抗疲勞作用，能對人腦電波產(chǎn)生影響，使人情緒放松，減少緊張。云南綠茶中也含有這些功能性成分，至于這些成分是否就是其抗疲勞的物質(zhì)基礎(chǔ)，是單一成分作用強還是協(xié)同作用強等等，尚有待于進一步研究。

根據(jù)《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法》中規(guī)定，若一項或一項以上的耐力運動實驗（負(fù)重游泳和爬桿）和兩項或兩項以上的生化指標(biāo)（血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原等）為陽性，即可判定受試物具有抗疲勞活性。因此可以認(rèn)為，在適宜的飲茶劑量下，云南綠茶有明顯的抗疲勞作用。

［1］LI X Y.Pharmacokinetic and absolute bioavailabilith study of totalpanax notoginsenoside，a typicalmultiple constituent traditional Chinese medicine（TCM）in Rats［J］.Biol Pharm Bull，2007，30（5）：847-851.

［2］LEUNG K W，YUNG K K，MAK N K，et al.Angiomodulatory and neurological effects of ginsenosides［J］.Curt Med Chem，2007，14（12）：1371-1380.

［3］Chen D，Milacic V，Chen MS，et al.Tea polyphenols，their biological effects and potential molecular targets［J］.Histol Histopathol，2008，23：487-496.

［4］Duh PD，Yen GC，Yen WJ，et al.Effects of Pu-erh tea on oxidative damage and nitric oxide scavenging［J］.J Agric Food Chem，2004，52：8169-8176.

［5］Hashimoto T，Goto M，Sakakibara H，et al.Yellow tea is more potent than other types of tea in suppressing liver toxicity induced by carbon tetrachloride in rats［J］.Phytother Res，2007，21：668-670.

［6］楊志博，松井陽吉，林智，等.烏龍茶抗疲勞作用［J］.福建茶葉，2000（4）：44-46.

［7］龔加順，陳文品，周紅杰，等.云南普洱茶特征成分的功能與毒理學(xué)評價［J］.茶葉科學(xué)，2007，27（3）：201-210.

［8］何來英，嚴(yán)衛(wèi)星，樓密密，等.保健食品抗疲勞作用實驗方法研究［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，1997，9（4）：1-2.

Study on anti-fatigue effect of Yunnan green tea

LIANG Yong，SHAO Wan-fang，HUANG Ye-wei，LI Jin-yu，ZHANG Dong-ying*
（College of Longrun Pu-erh Tea，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，China）

The anti-fatigue effect of Yunnan green tea was investigated.Kunming mice were selected and then divided into 5 groups：blank control group given 0.9%normal saline，positive control group given 0.5g/kg·bw Rhodiola Rosae P.E，low-dose group（0.5g/kg·bw）of green tea，middle-dose group（1.0g/kg·bw）of green tea and high-dose group（2.0g/kg·bw）of green tea.After 30d，ten mice from each group were selected for the weight-loaded swimming test.For other mice，the blood lactic acid（BLA），lactate dehydrogenase（LDH），muscle glycogen（MG）and liver glycogen（LG）were determined.The result was showed as follows：compared with blank control group，green tea could significantly prolong swimming time，reduce lactic-acid level，increase lactate dehydrogenase level and increase liver glycogen and muscle glycogen storage after swimming.So，green tea has the function of alleviate physical fatigue，and middle-dose of green tea has better effect.

Yunnan；green tea；anti-fatigue

TS272.5+1

A

1002-0306（2011）01-0271-03

2009-12-30 *通訊聯(lián)系人

梁勇（1987-），男，在讀本科，研究方向：茶葉保健功能。

國家科技支撐課題（2007BAD58B04）；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（茶葉）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項資金項目；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)本科生創(chuàng)新課題。