李華岑，劉素梅，臧合英，周紅霞，班付國

(河南省獸藥監(jiān)察所，鄭州 450008)

硫酸小檗堿注射液［1］是目前臨床上較為常用的抗菌藥，主要用于治療腸道細(xì)菌性感染。標(biāo)準(zhǔn)中硫酸小檗堿含量測定方法為滴定法，操作比較繁瑣、費(fèi)時(shí)。在原有研究的基礎(chǔ)上［2］，建立了高效液相色譜法測定硫酸小檗堿注射液含量的新方法。該法操作較簡單，用于測定硫酸小檗堿注射液，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 Waters 2695高效液相色譜儀(帶紫外檢測器);BP211D型電子分析天平(德國賽多利斯公司);鹽酸小檗堿對照品(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號Z220600);硫酸小檗堿(東北制藥總廠，20091017);硫酸小檗堿注射液(河南亞衛(wèi)動(dòng)物藥業(yè)有限公司，110103，10 mL:0.1 g);乙睛為色譜純;水為高純水;其他試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱 C18柱(Waters公司，X BridgeTM，4.6 ×150 mm，5.0 μm);流動(dòng)相為 0.1%磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.5±0.1)—乙腈(70∶30);流速為1.0 mL/min;檢測波長為229 nm;進(jìn)樣體積為10 μL。在此色譜條件下，對照品溶液和供試品溶液色譜圖見圖1。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品10.5mg，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖使溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

圖1 色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的確定 精密量取對照品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。另精密稱取硫酸小檗堿原料10.2 mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖使溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。以流動(dòng)相為空白，在200～500 nm范圍內(nèi)掃描約10 μg/mL的對照品溶液和硫酸小檗堿溶液的吸收光譜，見圖2。由圖2可知:對照品溶液和硫酸小檗堿溶液的吸收光譜幾乎完全重疊，兩者均在 229、265、347、424 nm 波長附近有最大吸收，其中229 nm附近吸收度最大，為提高測量的靈敏度，實(shí)驗(yàn)選擇229 nm作為檢測波長。

圖2 吸收光譜

2.2 供試品溶液的制備 精密量取硫酸小檗堿注射液1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系 分別精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20、25 μL，按 1.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積的積分值對鹽酸小檗堿質(zhì)量進(jìn)行回歸，線性圖見圖3。鹽酸小檗堿線性范圍為0.2～2.5 μg，回歸方程為 A=4 161 950 m+408 151(相關(guān)系數(shù)r=0.999 9)。說明色譜峰面積的積分值和鹽酸小檗堿質(zhì)量呈良好的線性關(guān)系。

圖3 線性圖

2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取對照品溶液10 μL，連續(xù)6次進(jìn)樣，鹽酸小檗堿峰面積積分值 RSD為0.2%。精密量取供試品溶液10 μL，連續(xù)6次進(jìn)樣，硫酸小檗堿峰面積積分值RSD為0.3%。

2.5 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液放置0、1、4、6、12、24 h 后，精密吸取10 μL 進(jìn)樣，硫酸小檗堿峰面積積分值RSD為1.0%。

2.6 加樣回收試驗(yàn) 分別取鹽酸小檗堿對照品約8、10、12 mg，精密稱定，置 200 mL 量瓶中，精密量取硫酸小檗堿注射液1 mL，置同一200 mL量瓶中，加流動(dòng)相50 mL，振搖使溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，記錄峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。由表1可知:鹽酸小檗堿平均加樣回收率為100.8%，RSD為2.2%。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 樣品測定 取2.2項(xiàng)下供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量，并將計(jì)算結(jié)果乘以轉(zhuǎn)換因子1.107。結(jié)果表明:硫酸小檗堿平均含量為10.7 mg/mL，RSD為0.5%(n=5)。比滴定法測定結(jié)果10.4 mg/mL，RSD 為0.7%(n=5)稍有偏高。

2.8 討論 由于目前暫時(shí)無法購得硫酸小檗堿對照品，所以本實(shí)驗(yàn)采用鹽酸小檗堿作為對照品對硫酸小檗堿注射液進(jìn)行含量測定。因?yàn)闊o論硫酸小檗堿還是鹽酸小檗堿其有效成分均為小檗堿，且分子中鹽酸分子和硫酸分子在溶解于溶劑后即和小檗堿分離，溶液中小檗堿以離子態(tài)存在，所以通過測定供試品溶液中鹽酸小檗堿的量再乘以轉(zhuǎn)換因子即可求得硫酸小檗堿的含量。

轉(zhuǎn)化因子的計(jì)算方法是基于以下的原理:直接以外標(biāo)法計(jì)算所得含量是供試品中鹽酸小檗堿的含量，先將其乘以鹽酸小檗堿分子中小檗堿所占的分?jǐn)?shù)(小檗堿分子量/鹽酸小檗堿分子量)轉(zhuǎn)化為小檗堿的含量，再將其除以硫酸小檗堿分子中小檗堿所占的分?jǐn)?shù)(小檗堿分子量×2/硫酸小檗堿分子量，一個(gè)硫酸小檗堿分子中有2個(gè)小檗堿分子故分子上需要乘以2)轉(zhuǎn)化為硫酸小檗堿的含量。所以轉(zhuǎn)換因子計(jì)算方法為:硫酸小檗堿分子量/(鹽酸小檗堿分子量 ×2)=822.84/(371.82 ×2)≈1.107。

高效液相色譜法測定硫酸小檗堿注射液含量時(shí)，由于實(shí)驗(yàn)室鹽酸小檗堿對照品量較少而未對其進(jìn)行水分測定。對照品標(biāo)簽上無含量，也無使用說明書可查閱，計(jì)算時(shí)對照品含量未折去水分而按100%計(jì)，故可能造成結(jié)果比滴定法偏高。對照品含量的準(zhǔn)確性是提高測量結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素。

鹽酸小檗堿溶液和硫酸小檗堿溶液吸收光譜幾乎完全相同，說明溶液的吸收光譜主要是由小檗堿的光學(xué)特性決定的。

［1］中國獸藥典委員會(huì).中華人民共和國獸藥規(guī)范一九九二年版一部［S］.

［2］李華岑，張閃爍，張躍京，等.高效液相色譜法同時(shí)測定諾氟沙星和鹽酸小檗堿的含量［J］.中國獸藥雜志，2011，45(1):14-15.