天津市安寧醫(yī)院(300300)率紅莉
天津醫(yī)科大學藥學院(300070)張慶偉
艾葉具有散寒止痛,溫經止血之功效,用于小腹冷痛、經寒不調、宮冷不孕、吐血、衄血、崩漏經多、妊娠下血等癥,外治皮膚瘙癢[1]?,F代研究證實:艾葉化學成分是其功效與毒性表達的物質基礎,與功效、毒性之間存在一定的量效關系、量毒關系[2]。因而,對艾葉的化學成分,尤其是單體化合物的研究成為艾葉現代研究的基礎和關鍵。
1.1 儀器 紫外分光光度儀:Hitachi U-3310 UV-VIS Spectrophotometer。旋轉蒸發(fā)器:SENCO R系列,上海申生科技有限公司。恒溫干燥箱:天津泰斯特儀器有限公司。單相交流感應電動機:上海申生科技有限公司。恒溫水浴鍋:上海申生科技有限公司。HC-TP-II型架盤天平:天津市天平實業(yè)有限公司。電子分析天平:FA2004N型,上海恒平科學儀器有限公司。循環(huán)水式多用真空泵。KQ-100超聲波清洗器。
1.2 試藥
1.2.1 植物來源:艾葉干燥葉,購自天津市藥材公司,由生藥及藥用植物學教研室侯丕勇博士鑒定。
1.2.2 標準品:蘆丁,由天津醫(yī)科大學藥學院儀器分析室提供
1.2.3 藥品和溶劑:乙醇(65%,75%,95%):分析純,天津市基準化學試劑有限公司。
2.1 試液的制備
2.1.1 供試品浸膏 將500g干燥的艾葉粉碎,以一定濃度的乙醇(65%,75%,95%)浸漬,每次4L,24h,共2次。合并濾液,抽濾。將藥渣棄去,所得濾液經旋轉蒸發(fā)減壓蒸餾,回收乙醇,制成浸膏。精密稱取預處理后的艾葉浸膏,即干浸膏100mg置于100ml容量瓶中,加95%乙醇適量,超聲20分鐘溶解后用95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
附表1 回收率實驗測定吸光度
附表2 精密度實驗測定吸光度
2.1.2 對照品溶液 精密稱取干燥蘆丁對照品10mg,置于100ml量瓶中,加95%乙醇適量,超聲20分鐘溶解后用95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.2 標準曲線的制備
2.2.1 對照品溶液 分別精密吸取蘆丁對照液(0.10 mg/ml)0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4. 00ml、5.00ml于10ml容量瓶中,分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加10%硝酸鋁溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml,用60%乙醇稀釋至刻度,搖勻,靜置12min,以試劑作空白參比液,于507 nm處測吸光度。
2.2.2 檢測波長的選擇 取樣品液2.00ml,在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下,經硝酸鋁顯色后,以試劑為空白參比液在420~700nm波長范圍測定絡合物的吸光度,絡合物于可見光區(qū)507nm波長處有最大吸收,故測定時選用此波長。
2.2.3 線性關系考察 在507nm處測定不同濃度對照品溶液吸光度,繪制標準曲線,回歸方程為: A = 0.0118C+0.0133,r = 0.9991。
2.3 加樣回收率試驗 精密量取樣品液2.00ml,制備6份。分別置于10ml量瓶中,加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加10%硝酸鋁溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml,用60%乙醇定容至10ml,搖勻,靜置12min。以溶劑的空白試劑作空白參比,于507nm處測吸光度。見附表1。
本實驗測定的平均回收率為96.34%,RSD=0.4653%,小于2%。平均回收率在中藥要求的95%到105%之間。因而本實驗符合方法學要求,可用于艾葉中總黃酮含量的測定。
附表3 不同濃度乙醇提取后艾葉中總黃酮的含量
2.4 精密度試驗 精密量取樣品液2.00 ml,置于10ml量瓶中,加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加10%硝酸鋁溶液0.30ml,搖勻,靜置6min;再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml,用60%乙醇定容至10ml,搖勻,靜置12min。以溶劑的空白試劑作空白參比,于507nm處測吸光度,連續(xù)測定6次。見附表2。
實驗結果:吸收度值(A)的RSD =0.0865%,小于2%。表明儀器精密度能夠滿足測定要求。
2.5 總黃酮含量的測定 利用不同濃度乙醇進行提取后,艾葉中總黃酮含量測定結果。見附表3。
從數據表中可知, 用95%乙醇提取獲得的艾葉浸膏的總黃酮含量最多,因而,使用95%的乙醇對艾葉中總黃酮成分進行提取為宜。
選用蘆丁作為對照品,繪制標準曲線,A= 0.0118C+0.0133, r=0.9991,在5.800~58.000μg/ml范圍內吸收度和對照品的質量濃度呈良好的線性關系。從而計算出艾葉樣品中總黃酮含量,95%乙醇提取的樣品中含有的總黃酮含量為10.06mg/g。經方法學檢驗,本實驗方法操作簡單,結果準確,重現性好,穩(wěn)定性強,適用于艾葉中總黃酮含量的測定。進而,利用此方法測定不同乙醇濃度(95%、75%、65%)對艾葉提取物中總黃酮含量的影響,以選擇適當的乙醇提取濃度, 確定使用95%的乙醇對艾葉的總黃酮成分進行提取最為適宜,為艾葉化學成分的進一步深入研究奠定基礎。