張世梅，楊 艷，陳 萍，馬麗軍，鄧詠銘，楊月娥

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

雞肉參中總?cè)坪康臏y定

張世梅，楊 艷，陳 萍，馬麗軍，鄧詠銘，楊月娥*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：采用紫外分光光度法對雞肉參中總?cè)瞥煞值暮窟M(jìn)行測定。方法：以齊墩果酸為對照品，以5%香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸為顯色系統(tǒng)，在480 nm波長處測定樣品吸光度。結(jié)果：齊墩果酸在0.04～0.24 mg/mL范圍內(nèi)吸光度與含量成良好的線性關(guān)系，其回歸方程為：A=0.001 5 C+0.002 3，r=0.999 9，平均回收率為99.37%，RSD=1.075%（n=6），所測雞肉參中總?cè)坪恳札R墩果酸計為1.41%。結(jié)論：該方法操作簡便、快速，靈敏度高和重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于雞肉參的質(zhì)量控制。

雞肉參；總?cè)?；紫外分光光度法；質(zhì)量控制

雞肉參為民族民間常用中藥，植物名為滇川角蒿Incarvillea maire（iH.Léveillé）Grierson，俗名土地黃、波羅花、紅花角蒿（麗江）、山洋參等〔1〕。云南主產(chǎn)滇西北及東部地區(qū)，生長在海拔2 400～3 655 m高山石礫堆、山坡路旁向陽處〔2〕。具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯功效，用于治療產(chǎn)后少乳、久病虛弱、頭暈、貧血等證〔3〕。目前，國內(nèi)對角蒿屬植物進(jìn)行了生藥學(xué)、化學(xué)成分及藥理活性的研究，其化學(xué)成分主要有單萜生物堿、大環(huán)精胺類生物堿、三萜類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類和甾醇類等〔4〕。萜類化合物是雞肉參的主要有效化學(xué)成分之一，具有抗感受傷害和抗炎鎮(zhèn)痛作用〔4〕。經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，未見對雞肉參中三萜類化合物含量測定的報道。為此，本實驗以雞肉參的根為原料，采用超聲波提取法提取三萜類化合物〔5〕，用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法測定雞肉參中總?cè)坪俊?-8〕。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器公司）；F120中藥粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；SSY4電熱恒溫水浴鍋（北京泰儀器有限公司）；DHG-9123A電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

1.2 試藥 甲醇、乙酸乙酯、高氯酸、冰醋酸、香草醛均為分析純；齊墩果酸對照品購買于中國藥品生物制品檢定所（批號：110709－200505）；雞肉參藥材采自大理蒼山花甸壩東山，準(zhǔn)確鑒定，其根自然干燥粉碎，過四號篩。

2 方法及結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對照品20 mg置100 mL量瓶中用甲醇定容，搖勻，即得對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取雞肉參粉末0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL，超聲處理90 min，濾過，放冷，濾液置50 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，精密量取0.5 mL至10 mL量瓶中，甲醇定容，即得供試品溶液。

2.3 波長的選擇 取齊墩果酸對照品溶液1.0 mL（空白對照為不加對照品溶液用乙酸乙酯稀釋至刻度的混合溶液），置具塞試管中，水浴揮干，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL，高氯酸1.6 mL，70℃水浴加熱15 min，冰水中冷卻后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，于紫外可見分光光度計上掃描。結(jié)果表明，對照品溶液在480 nm處有最大吸收峰，故確定測定波長為480 nm，（見圖1）。

圖1 齊墩果酸的吸收光譜圖

2.4 顯色劑的條件及用量選擇

2.4.1 5%香草醛-冰醋酸溶液用量的選擇 取齊墩果酸對照品溶液1.0 mL 5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，各加入高氯酸1.4 mL，70℃水浴加熱15 min，冰水中冷卻后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在480 nm波長處測定吸收值，結(jié)果見表1。實驗結(jié)果顯示，5%香草醛-冰醋酸用量為0.4 mL時最佳。

表1 5%香草醛-冰醋酸用量結(jié)果

2.4.2 高氯酸用量的選擇 取齊墩果酸對照品溶液1.0 mL 5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸0.4 mL，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL，70℃水浴加熱15 min，冰水中冷卻后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在480 nm波長處測定吸收值，結(jié)果見表2。實驗結(jié)果顯示，高氯酸用量為1.6 mL時最佳。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取齊墩果酸對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置具塞試管中，按“2.3”項下方法在480 nm波長處測定吸收值，以不加對照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL，高氯酸1.6 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度的混合溶液為空白對照，并以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.001 5 C+0.002 3，r=0.999 9，齊墩果酸在0.04～0.24 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 取雞肉參粉末0.5 g 5份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備，按“2.3”項下方法操作，測得吸光度的RSD=1.86%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取雞肉參粉末0.5 g 5份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備，按“2.3”項下方法操作，每隔0.5 h測定1次，共測6次，測得RSD為3.53%。結(jié)果說明顯色反應(yīng)在3 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取雞肉參粉末0.5 g 5份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備，各準(zhǔn)確移取1.0 mL，按“2.3”項下方法操作，計算含量，得供試品的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為1.62%。

2.9 回收率試驗 取雞肉參粉末0.25 g 6份，精密稱定，加入齊墩果酸對照品0.5 mg，按“2.2”項下方法制備，按“2.3”項下方法操作，在480 nm波長處測定吸收值，并計算回收率，所得平均回收率為99.37%，RSD=1.075%。結(jié)果見表3。

表3 回收率測定結(jié)果

2.10 樣品的含量測定 取雞肉參粉末0.5 g 5份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備，按“2.3”項下方法操作，在480 nm波長處測定吸收值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算含量。結(jié)果總?cè)祁惓煞制骄繛?.41%，RSD=1.62%（n=5）。

3 討論

本實驗采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法測定雞肉參中總?cè)祁惡浚瑴y定過程中影響因素較多，受反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、各種試劑用量等因素影響較為顯著。通過實驗探索了顯色劑使用量及反應(yīng)后的放置時間，結(jié)果表明以0.4 mL新配制的5%香草醛-冰醋酸，1.6 mL高氯酸的顯色劑配比為宜。顯色劑過多或過少會導(dǎo)致反應(yīng)不完全，在測定過程中不穩(wěn)定，或不在適宜的范圍內(nèi)，誤差比較大。反應(yīng)溫度為70℃，反應(yīng)時間以15 min為宜，反應(yīng)時間過長空白顏色加深，過短則反應(yīng)不完全，加大誤差。在操作過程中，恒溫水浴結(jié)束后應(yīng)立即放入冰水中，保證反應(yīng)及時終止。反應(yīng)后的放置時間在3 h內(nèi)基本穩(wěn)定。得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線性關(guān)系。該實驗方法操作簡便、快速，靈敏度高，測定結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為雞肉參中總?cè)瞥煞趾繙y定的有效方法，為雞肉參的質(zhì)量控制和進(jìn)一步開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

（志謝：本課題研究過程中，大理學(xué)院生藥教研室的全體老師給予了悉心指導(dǎo)，綜合實驗室的楊永壽老師給予大力支持和幫助，在此一并致謝。）

〔1〕楊月娥，段寶忠.白族藥雞肉參的生藥學(xué)研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2009，20（1）：181-182.

〔2〕中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物：（第10卷）〔M〕.青島：青島出版社，2004：433.

〔3〕江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典：（上冊）〔M〕.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1977：12050.

〔4〕吉騰飛，馮孝章.角篙屬植物化學(xué)成分和藥理活性〔J〕.國外醫(yī)藥·植物藥分冊，2003，18（4）：154-157.

〔5〕周俐斐，蘆柏震，侯桂蘭.中藥三萜類化合物的提取分離及測定方法研究進(jìn)展〔J〕.海峽藥學(xué)，2007，19（3）：62-64.

〔6〕薛璟，賈曉斌，譚曉斌，等.雷公藤制劑中雷公藤紅素及雷公藤總?cè)频臏y定〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（7）：1105-1108.

〔7〕侯敏娜，劉劍.靈芝三萜的提取分離及總?cè)频暮繙y定〔J〕.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2010，24（5）：70-71.

〔8〕季春，張融，胡晨，等.比色法測定南蛇藤中總?cè)祁惓煞值暮俊睯〕.時珍國醫(yī)國藥，2009，20（4）：909-910.

Determination of Triterpenoid in Incarvillea Mairei by Ultraviolet Spectrophotometry

ZHANG Shimei,YANG Yan,CHEN Ping,MA Lijun,DENG Yongming,YANG Yue'e*
（School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To establish a method for measurement of total triterpene in Jirousheng (Incarvillea mairei)by Ultraviolet spectrophotometry(UV).Methods:Using oleanolic acid as object,and 5%vanillin-glacial acetic acid solution and perchloric acid as color-developing agent,total triterpenes was measured by spectrophotometry at 480 nm wavelength.Results:The oleanolic acid content showed a good linear relationship with absorbance(r=0.999 9)in the range of 0.04-0.24 mg/mL,and the regression equation was A=0.001 5 C+0.002 3.The average recovery was 99.37%and RSD was 1.075%(n=6),Incarvillea mairei contained 1.41%of total triterpene according to the calculation of oleanolic acid content.Conclusion:The method was simple,rapid,high sensitivity,reproducible and reliable for the quality control of Incarvillea mairei.

Incarvillea mairei;total triterpene;ultraviolet spectrophotometry;quality control

R284.2［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號］1672-2345（2011）12-0021-03

大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項目（DXSKYY201019）

2011-06-01

2011-07-21

張世梅，2008級藥學(xué)專業(yè)本科生.

*通信作者：楊月娥，高級實驗師.

（責(zé)任編輯 毛本勇）