趙強(qiáng)強(qiáng)，韓麗*，潘媛，王淼，楊明,2*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 611137；2.江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330004)

國家科技重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2009ZX09103-307)

*韓麗，E-mailhanliyx@163.com；*楊明，E-mailyangming16@126.com

黃芪中黃芪多糖含量的測定△

趙強(qiáng)強(qiáng)1，韓麗1*，潘媛1，王淼1，楊明1,2*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都611137；2.江西中醫(yī)學(xué)院現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌330004)

目的建立黃芪中黃芪多糖的含量測定方法。方法采用比色法測定黃芪多糖的含量。結(jié)果測定波長為489nm，葡萄糖在2.0～14.0μg·mL-1線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.84%,RSD=3.71%(n=6)。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于黃芪中黃芪多糖的含量測定。

黃芪多糖APS；苯酚-硫酸法；含量測定

黃芪為常用中藥，是豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具有補(bǔ)氣升陽，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌的功能[1]。黃芪中含有皂苷、黃酮、多糖、氨基酸及微量元素等多種成分[2]，其中黃芪多糖(Astragalus polysaccharides，APS)是黃芪主要活性成分之一?，F(xiàn)代研究表明，APS具有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)[3]、抗腫瘤[4]、抗病毒、抗輻射、抗衰老等多種生物活性。本實(shí)驗(yàn)采用比色法對黃芪中多糖進(jìn)行含量測定。

1 材料與方法

1.1儀器

UV-1700紫外分光光度計(jì)(SHIMADZUCORPORATION)，F(xiàn)A1104電子分析天平(HANGPING)。

1.2試藥

河北黃芪(四川利民中藥飲片有限責(zé)任公司)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室裴瑾副教授鑒定為膜莢黃芪；D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503,供含量測定用)；苯酚、濃硫酸等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液制備

精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖100mg，加水溶解并定溶于100mL量瓶中，搖勻即得。

2.2供試品溶液制備

精密稱取黃芪粗粉5.0g，加堿水50mL回流提取2次，每次1h，放冷加溶劑補(bǔ)足重量，過濾，精密吸取濾液0.2mL，蒸餾水定容至100mL量瓶中，搖勻即得。

2.3測定方法

精密吸取對照品、供試品溶液各2mL于具塞試管中，分別加入5%苯酚溶液1.0mL，搖勻，迅速加入5.0mL濃硫酸，振搖2min，置沸水浴中加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，隨行以蒸餾水為空白對照，在489nm處測定吸光度。

2.4線性范圍考察[5-6]

精密吸取葡萄糖對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。精密吸取上述各溶液2 mL于具塞試管中，按照2.3測定方法分別加入5 %苯酚溶液1.0 mL,在489 nm處測定吸光度。以吸光度對濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=69.679C+0.025 3,r=0.996 2。結(jié)果表明，葡萄糖在2.0～14.0 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)

精密吸取葡萄糖對照品溶液6份，依法顯色后測定吸光度，計(jì)算RSD=1.62%，說明儀器精密度良好。

2.6顯色后穩(wěn)定性試驗(yàn)

取黃芪多糖樣品溶液2mL，依法顯色后放置，分別在0,15,30,45,60min測定吸光度，計(jì)算RSD=2.26%，表明樣品溶液顯色后1h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

對同一批黃芪多糖樣品進(jìn)行6次獨(dú)立測定吸光度，結(jié)果RSD=3.58%。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

取6份已知含量的黃芪粗粉2.5g，精密稱定，精密加入適量葡萄糖對照品，按正文擬定的方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2mL于具塞試管中，按2.3測定方法分別加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm處測定吸光度，計(jì)算結(jié)果見表1。

表1 黃芪多糖加樣回收率試驗(yàn)

2.9樣品測定

取3批黃芪樣品粗粉5.0g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液2mL于具塞試管中，按2.3方法分別加入5 %苯酚溶液1.0mL，在489nm處測定吸光度，計(jì)算結(jié)果見表2。

表2 黃芪中黃芪多糖含量測定 /mg·g-1

3 討論

3.1提取溶劑的選擇

參照文獻(xiàn)[7]可知堿水提取多糖收率比水提取要高。這主要是由于堿溶液對植物細(xì)胞起到破壁作用[8]，但由于本實(shí)驗(yàn)將黃芪樣品全部粉碎用粗粉進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，堿水提取黃芪多糖含量215.89mg·g-1，水提取黃芪多糖含量197.54mg·g-1，故差別不是很明顯。

3.2測定波長的選擇

分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液各2mL于具塞試管中，加5%苯酚試液1mL，混勻，迅速加入5mL濃硫酸，振搖2min，置沸水浴加熱15min，取出置冷水中冷卻，隨行以蒸餾水為空白，于UV-1700上從400～600nm進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)對照品和樣品溶液在489nm均有最大吸收，故波長確定為489nm。

3.3溶劑用量考察

精密稱取5.0g黃芪粗粉3份，分別加入堿水40,50,60mL回流提取1h，放冷加溶劑補(bǔ)足重量，過濾，精密吸取濾液0.2mL，蒸餾水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液各2mL于具塞試管中。按2.3測定方法分別加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm處測定吸光度，結(jié)果表明黃芪藥材采用50mL溶劑提取黃芪多糖含量較高。

3.4提取時間考察

精密稱取5.0g黃芪粗粉3份，加入堿水50mL，分別回流提取60，90，120min，放冷加溶劑補(bǔ)足重量，過濾，精密吸取濾液0.2mL，蒸餾水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液各2mL于具塞試管中。按2.3測定方法分別加入5 %苯酚溶液1.0mL，在489nm處測定吸光度，結(jié)果表明黃芪藥材采用60min提取黃芪多糖含量較高。

3.5提取次數(shù)考察

精密稱取5.0g黃芪粗粉3份，加入堿水50mL回流提取，分別提取1、2、3次，每次1h，放冷加溶劑補(bǔ)足重量，過濾，精密吸取濾液0.2mL，蒸餾水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液2mL于具塞試管中。按2.3測定方法分別加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm處測定吸光度，結(jié)果表明提取2次黃芪多糖含量較高。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：283-284.

[2] 肖培根,楊世林,趙永華,等.黃芪[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社,2001：123-124.

[3] 翁玲,劉彥,劉學(xué)英,等.黃芪多糖粉針劑對小鼠免疫功能的影響[J].免疫學(xué)雜志, 2003,19(3)：243-244.

[4] 李宏全,段縣平,馬海利,等.黃芪多糖提高雞抗氧化作用對免疫功能的影響[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,22(1)：78-81.

[5] 張宇,趙玉梅,佟麗華,等.黃芪地下和地上部分有效成分比較[J].中草藥,1997,28(11)：651-653.

[6] 朱立文,郁瑞昌.黃芪多糖含量測定方法的探討與比較[J].中成藥研究,1987,(6)：11-12.

[7] 李紅民,黃仁泉,王亞洲.提高黃芪多糖提取收率的工藝研究[J].西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2000,30(6)：509-510.

[8] 向東,賴鳳英,梁平.堿法提取南瓜多糖的研究[J].食品工業(yè)科技,2004,25(11)：120-122.

DeterminationofAstragalusPolysaccharidesinAstragalus

ZHAO Qiang-qiang1, HAN Li1, PAN Yuan1, WANG Miao1, YANG Ming1,2

(1.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,MinistryofEducationKeyLaboratoryofStandardizationofChineseHerbalMedicines,Chengdu611137,China; 2.KeyLabforModernPreparationofTCM,MinistryofEducationofChina;JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China)

Objective: To establish a method for determining astragalus polysaccharides in Astragalus.MethodsDetermined the content of astragalus polysaccharides with colorimetry.ResultsThe wavelength of determination is 489 nm, The linear relationship of glucose was the range of 2.0～14.0 μg·mL-1.The average recovery was 99.84 % and RSD was 3.71 % (n=6).ConclusionThe method is convenient, accurate，good reproducibility and suitable for the quality control of astragalus polysaccharides in Astragalus.

Astragalus polysaccharidesAPS; Phenol-sulfuricacid method; Determination

2011-03-31)