周立偉，張贊

(哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司，黑龍江 哈爾濱 150069)

*周立偉，E-mail460255301@qq.com

HPLC測(cè)定益母草片中鹽酸水蘇堿含量

周立偉*，張贊

(哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司，黑龍江 哈爾濱150069)

目的建立益母草片中鹽酸水蘇堿含量的測(cè)定方法。方法運(yùn)用HPLC對(duì)鹽酸水蘇堿含量進(jìn)行測(cè)定，色譜柱：強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換色譜柱 (200mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3,檢測(cè)波長(zhǎng)：192nm，流速1.0mL·min-1,柱溫：室溫。結(jié)果鹽酸水蘇堿的量在25～300μg·mL-1濃度同峰面積呈良好的線性關(guān)系。平均加樣回收率為100.92%，RSD=0.43%。結(jié)論所建立的方法可靠，可用于益母草片的質(zhì)量控制。

益母草片；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜法

益母草片是哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司生產(chǎn)的活血調(diào)經(jīng)的中藥制劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鹽酸水蘇堿含量測(cè)定為沉淀稱重法[1],但該法操作繁瑣、測(cè)定周期長(zhǎng)，誤差較大，通過(guò)檢索對(duì)其他含益母草的藥品檢測(cè)方法的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，鹽酸水蘇堿含量測(cè)定方法較為常見(jiàn)的有薄層色譜法[2]、高效液相色譜法[2,3]、HPLC-ELSD法[5]，本文應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定益母草片中鹽酸水蘇堿含量并對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果表明該法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。

1 儀器和試藥

島津2550紫外分光光度計(jì)、島津LC20A高效液相色譜儀(DGU-20A5脫氣機(jī)，LC-20AT高效泵，SPD-20A檢測(cè)器，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器)Lc-solution工作站軟件，梅特勒電子分析天平。

三乙胺(分析純，天津科密歐)，磷酸二氫鉀(分析純，天津科密歐)，磷酸(天津科密歐)，0.45μm微孔濾膜(津騰)，溶劑過(guò)濾器。益母草片(哈藥集團(tuán)三精黑河藥業(yè)，批號(hào)：100804,100805,100901,100902,101001)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換色譜柱(200mm×4.6mm,5μm)，填充劑為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。流動(dòng)相：0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3,檢測(cè)波長(zhǎng)：192nm，柱溫：室溫。

2.2對(duì)照品溶液制備

取經(jīng)105℃烘干至恒重的鹽酸水蘇堿對(duì)照品，精密稱定，加70%乙醇溶解轉(zhuǎn)容后，制成25μg·mL-1的鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取同一批益母草片(含量為14.8mg/片、基片重0.25g)去糖衣，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻、濾過(guò)，取續(xù)濾液2mL，加70%乙醇定容至100mL，即得。

2.4線性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

分別吸取1，2，4，6，8，10，12μL對(duì)照品溶液，以峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=426.821X-25.5，r=0.9998，鹽酸水蘇堿的量在25～300μg·mL-1濃度同峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取鹽酸水蘇堿對(duì)照品加70%乙醇溶解制成25μg·mL-1的溶液，精密量取10μL注入色譜儀，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算鹽酸水蘇堿峰面積積分值的RSD=0.38%，說(shuō)明儀器精密度較高。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批益母草片供試品溶液，分別在1，4，8，12，24h進(jìn)樣，計(jì)算鹽酸水蘇堿峰面積積分值的RSD=0.51%，結(jié)果表明樣品在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批益母草片供試品溶液，制備6份供試液，按上述色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算鹽酸水蘇堿含量的RSD=1.57%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性好。

2.8回收率試驗(yàn)

取5份益母草基片約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻、濾過(guò)，取續(xù)濾液2mL，加70%乙醇定容至100mL，取5mL并同時(shí)加入鹽酸水蘇堿對(duì)照品0.5752mg，置50mL量瓶，加甲醇至刻度，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收率試驗(yàn)

2.9樣品含量測(cè)定

取5批益母草片用沉淀稱重法及HPLC兩種方法同時(shí)測(cè)定鹽酸水蘇堿含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 益母草片中鹽酸水蘇堿含量測(cè)定 mg/片

對(duì)比分析表明HPLC較沉淀稱重法測(cè)定的鹽酸水蘇堿含量準(zhǔn)確度有所提高，耗時(shí)大大縮短。

3 討論

3.1實(shí)驗(yàn)方法選擇

文獻(xiàn)中鹽酸水蘇堿的含量測(cè)定方法較多，考慮高效液相色譜法應(yīng)用的普遍性及其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，分別采用了大連伊利特，Dikma，Diamonsil3個(gè)廠家的強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換色譜柱(200mm×4.6mm，5μm)，進(jìn)行試驗(yàn)，并參考《中國(guó)藥典》2010年版一部“益母丸”含量測(cè)定項(xiàng)下要求，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，且方法簡(jiǎn)便，耗時(shí)短。

3.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取鹽酸水蘇堿對(duì)照品乙醇溶液，置島津2100紫外分光光度計(jì)上，在波長(zhǎng)范圍160～270nm測(cè)定，結(jié)果其最大吸收波長(zhǎng)為192nm，與2010年版《中國(guó)藥典》中益母丸中含量項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)相符，故選擇192nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3流動(dòng)相選擇

益母草片采用益母草為原料，流動(dòng)相選擇時(shí)參考《中國(guó)藥典》益母丸及其他文獻(xiàn)[4]中鹽酸水蘇堿的流動(dòng)相，均為磷酸二氫鉀溶液(含0.04%三乙胺和0.15%磷酸),本品按此流動(dòng)相分離效果不理想，后調(diào)整為0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3作流動(dòng)相后，分離完全，故選擇0.1%三乙胺的0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液,用磷酸調(diào)節(jié)pH值2.3作流動(dòng)相。

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第13冊(cè).1997：175.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1024-1026，272-273.

[3] 馮旭.杜成智.梁臣艷，等.HPLC-ELSD測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿的含量[J].廣西中醫(yī)藥，2007，30(6)：53-54.

[4] 鄒華,吳云波,王金萍，等.HPLC法測(cè)定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，8(6)：147.

DeterminationofStachydrineHydrochlorideofYimucaoPianbyHPLC

ZHOU Li-wei，ZHANG Zan

(HarbinPharm.GroupSanjingPharmaceuticalShareholdingCo.Ltd,Harbin150069,China)

Objective: Established method for determination of Stachydrine hydrochloride of Yimucao Pian.MethodsUsing high performance liquid chromatography (HPLC) were determined on Stachydrine hydrochloride, column: Actalyst of cation exchange chromatographic column (200mm×4.6mm,5μm), mobile phase:0.05mol·L-1KH2PO4of0.1% triethylamine (TEA, adjusted with phosphoric acid pH=2.3), detection wavelength:210nm, flow rate1.0mL·min-1, column temperature: room temperature.ResultsEphedrine hydrochloride concentration demonstrated good linear relationship in the range of25～300μg·L-1.The average recovery was100.92%, and RSD was0.43%.ConclusionThe method is reliable and can be used for quality control of Yimucao Pian.

Yimucao Pian; Stachydrine hydrochloride; HPLC

2011-01-05)