周永梅陳明城 賴?yán)m(xù)文 張福田

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東 510010)

快速石蠟切片在小塊活檢組織中的應(yīng)用

周永梅＊陳明城 賴?yán)m(xù)文 張福田

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東 510010)

快速石蠟切片; 小塊活檢組織

目前,病理科普遍開展的常規(guī)石蠟技術(shù),制片程序時間較長,三個工作日才能發(fā)出病理診斷報告;而有時在某些特殊情況下,送檢組織已固定,不能行冰凍切片檢查時,就必須在很短的時間內(nèi)制好片。目前冰凍切片作為一種最快速制片方法,廣泛用于術(shù)中病理診斷,但由于冰凍切片容易出現(xiàn)冰晶、細胞腫脹變形等現(xiàn)象,常導(dǎo)致診斷困難。為此我科開展了小組織快速石蠟切片技術(shù),程序只需要3個半小時就能制出較好的切片,切片 HE染色核質(zhì)分明,免疫組化質(zhì)量近似于常規(guī)石蠟切片,現(xiàn)介紹如下。

材料和方法

1 材料

1.1 組織來源于我院手術(shù)的活檢標(biāo)本,涉及的組織部位有肺、胃、腸等組織,組織直徑為0.1cm-0.5cm。

1.2 儀器和設(shè)備:德國Leica Peloris快速組織脫水機,國產(chǎn)塑料包埋盒,不銹鋼脫水籃。

2 方法 新鮮組織取材后,分為常規(guī)石蠟處理組(對照組)和快速石蠟處理組(實驗組),兩組標(biāo)本及組織塊大小基本一致。對照組:運行時間為10個小時,處理過程:(1)10%福爾馬林固定150分鐘,35℃;(2)70%乙醇80分鐘,常溫;(3)80%乙醇 60分鐘,常溫;(4)95%乙醇 Ⅰ50分鐘,常溫;(5)95%乙醇Ⅱ40分鐘,常溫;(6)95%乙醇Ⅲ40分鐘,常溫;(7)無水乙醇Ⅰ30分鐘,常溫;(8)無水乙醇Ⅱ30分鐘,常溫;(9)二甲苯Ⅰ30分鐘,常溫;(10)二甲苯Ⅱ30分鐘,常溫;(11)石蠟 Ⅰ30分鐘,62℃;(2)石蠟Ⅱ30分鐘,62℃;(3)石蠟Ⅲ30分鐘,62℃。

實驗組:運行時間為3小時27分,處理過程:(1)10%福爾馬林固定15分鐘,55℃;(2)70%乙醇8分鐘,55℃;(3)80%乙醇8分鐘,55℃;(4)95%乙醇Ⅰ15分鐘,65℃;(5)95%乙醇Ⅱ15分鐘,65℃;(6)95%乙醇Ⅲ15分鐘,65℃;(7)無水乙醇Ⅰ15分鐘,60℃;(8)無水乙醇Ⅱ15分鐘,60℃;(9)二甲苯Ⅰ15分鐘,65℃;(10)二甲苯Ⅱ15分鐘,65℃;(11)石蠟Ⅰ15分鐘,70℃;(2)石蠟Ⅱ15分鐘,70℃;(3)石蠟Ⅲ15分鐘,70℃。兩組組織均進行石蠟包埋和切片,兩種方法所做切片同時進行 HE染色和免疫組化染色。

結(jié) 果

兩組 HE染色結(jié)果:實驗組切片組織完整,組織細胞結(jié)構(gòu)清晰,細胞核與細胞漿對比染色好(如圖1)。對照組制片均達到優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn),組織結(jié)構(gòu)清晰,細胞收縮少,無皺紋(如圖2)。兩組免疫組化染色結(jié)果均無脫片現(xiàn)象,陽性與陰性對比明顯,陽性物質(zhì)定位準(zhǔn)確,背景干凈清晰,無非特異性著色,染色結(jié)果穩(wěn)定可靠(如圖3,4)。完全達到診斷要求,大大提高了工作效率。

討 論

1 我們對臨床常送檢的小塊活檢組織用上述的實驗方法處理,時間明顯縮短,組織脫水、透明、和浸蠟效果良好,標(biāo)本處理適當(dāng),組織結(jié)構(gòu)完整,細胞輪廓清晰且境界清楚,更接近常規(guī)石蠟 HE切片,可避免冰凍切片造成的組織學(xué)假象而誤診[1]。提高了工作效率,提供了準(zhǔn)確的病理診斷依據(jù),快速石蠟切片不失為一種簡便、快捷的好方法。

2 脫水機的程序設(shè)定與制片質(zhì)量的優(yōu)劣密切相關(guān),不僅涉及常規(guī)切片的制作和診斷,對于免疫組化及分子生物學(xué)技術(shù)等幾乎所有與之相關(guān)的病理學(xué)項目均產(chǎn)生重要的影響。磁力攪拌器是由電機帶動磁鋼利用電磁產(chǎn)生的旋力磁場而使燒杯內(nèi)的鐵質(zhì)攪拌子轉(zhuǎn)動,并依照轉(zhuǎn)速大小在溶液中形成一種龍卷風(fēng)樣震波,組織在高溫和經(jīng)強化轉(zhuǎn)動的高濃度脫水液作用下,內(nèi)部產(chǎn)生震波來加速分子間的熱運動,兼之離心效果組織內(nèi)的水分在比重與滲透壓等因素的影響下,較快地被置換和析出而達到脫水之目的。

我們使用Leica Peloris脫水機設(shè)定的快速石蠟程序,充分利用了磁力攪拌器的先進技術(shù),在適宜的溫度和壓力條件下,加速溶液分子運動,以促進脫水溶液與組織內(nèi)水分交換及透明時對組織的滲透力,縮短透明浸蠟時間,加強組織的處理效果,從而使組織達到加速固定、脫水、透明浸蠟作用[2],有利于制作切片。

[1]孟奎,李博,石群立,等.提高快速石蠟切片質(zhì)量的廣法和經(jīng)驗體會.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2001,17(4):362-363

[2]泮黎明.介紹小組織活檢標(biāo)本快速石蠟切片方法.診斷病理學(xué)雜志,1998,5(2):109

圖 版 說 明

圖1 同一直腸癌組織,快速石蠟制片顯示切片組織細胞結(jié)構(gòu)清晰,細胞核與細胞漿染色對比好?！?00

圖2 常規(guī)法處理的直腸癌組織。×200

圖3 同一食管癌組織,快速石蠟切片后免疫組化染色染色結(jié)果與常規(guī)處理組織無明顯差異,Ki67陽性定位準(zhǔn)確、背景清晰。EnVision法?！?00

圖4 常規(guī)法處理的食管癌組織,Ki-67陽性表達于細胞核。EnVision法?！?00

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The same rectal cancer tissue treated by rapid paraffin methed shows clear structure and obvious contrast of nuclei to cytoplasm.×200

Fig.2 Rectal cancer tissue treated by routine method ×200

Fig.3 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of the same esophageal carcinoma tissue treated by rapid paraffin methed.There is no obvious difference of stain result compared with the routine method.×100

Fig.4 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of esophageal carcinoma tissue treated by routine method.×100

R466

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.022

2010-10-10

2010-11-01

周永梅,女(1978年),漢族,技師

＊通訊作者(To whom correspondence should be addressed)