高 鯤，張紅城，董 捷*

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093)

復(fù)合蛋白酶酶解油菜蜂花粉及其表征

高 鯤，張紅城，董 捷*

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093)

蜂花粉營(yíng)養(yǎng)成分豐富，并多存在于花粉粒內(nèi)部，花粉壁的存在限制了蜂花粉的開(kāi)發(fā)和利用。結(jié)果表明：采用復(fù)合蛋白酶處理花粉，獲得最佳破壁效果時(shí)的條件為：pH8、48℃、時(shí)間48h。并在此條件下利用比表面積、粒度分析、Zeta電位、掃描電鏡、透射電鏡對(duì)蜂花粉破壁進(jìn)行表征評(píng)定，從不同角度反映酶法在改善花粉細(xì)胞通透性上起到的作用。

蜂花粉；復(fù)合蛋白酶；破壁；表征評(píng)定

蜂花粉是蜜蜂從蜜源植物花蕊內(nèi)采集的花粉粒，經(jīng)過(guò)蜜蜂向其內(nèi)部加入了花蜜和分泌物，混合成不規(guī)則扁圓形、上面帶有蜜蜂后肢嵌挾痕跡的團(tuán)狀物[1]。花粉中包括蛋白質(zhì)、碳水化合物、不飽和脂肪酸、維生素、礦物成分等多種功能營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[2-4]，因此有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，被人們稱為“全能營(yíng)養(yǎng)庫(kù)”[5]，延緩衰老、抗疲勞、美容、防治心腦血管疾病、增強(qiáng)胃腸功能等作用[6]。

蜂花粉的內(nèi)容物被耐酸、耐堿、耐腐蝕的堅(jiān)硬外壁以及內(nèi)壁包裹著[7]，外壁主要由孢粉素和纖維素構(gòu)成，內(nèi)壁主要含有纖維素和果膠[8]?；ǚ郾诘拇嬖谧璧K了人體對(duì)蜂花粉內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)成分吸收利用，因此需要對(duì)蜂花粉進(jìn)行破壁處理，以提高人們食用花粉時(shí)對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分的吸收利用率，另外，當(dāng)蜂花粉被添加到化妝品、口服液、保健酒等高新產(chǎn)品中，由于皮膚沒(méi)有消化吸收功能，液態(tài)產(chǎn)品又不能帶有花粉壁，則必須對(duì)花粉進(jìn)行合適的破壁處理。

現(xiàn)在使用的花粉破壁方法主要分為物理方法、化學(xué)方法、生化方法[9]，并常用“破壁率”這一單一指標(biāo)對(duì)破壁效果做出評(píng)價(jià)。目前，缺乏科學(xué)有效的評(píng)定蜂花粉破壁情況的表征方法。本實(shí)驗(yàn)采用處理?xiàng)l件溫和的酶解方法，并首次采用比表面積、粒度分析、Zeta電位、掃描電鏡、透射電鏡等指標(biāo)對(duì)花粉破壁情況進(jìn)行科學(xué)全面的表征評(píng)定，完善蜂花粉破壁方法和破壁評(píng)價(jià)體系，有利于揭示破壁前后蜂花粉生理功能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

花粉 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所；復(fù)合蛋白酶諾維信公司；蒸餾水；硫酸鉀、硫酸銅、碳酸鈉等均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

ASAP 2010比表面積分析儀 天津市達(dá)因儀器廠；QUANTA 200掃描電鏡 美國(guó)FEI公司；H-T7650透射電鏡 日本Hitachi公司；MASTERSIZER 2000激光粒度分析儀 英國(guó)馬爾文公司；DelsaNano C Zate電位儀 美國(guó)貝克曼公司；LGJ-18S冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱 太合市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；Kjeltec 2200半自動(dòng)凱氏定氮儀 丹麥FOSS公司

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理[10]

將油菜蜂花粉研磨均勻，準(zhǔn)確稱取1.0g左右蜂花粉放入100mL三角瓶，然后向瓶中加入約20mL蒸餾水。試驗(yàn)中的每個(gè)水平做4個(gè)樣，兩個(gè)空白樣品，兩個(gè)加酶樣品。

1.3.2 酶解

根據(jù)均勻設(shè)計(jì)表中設(shè)計(jì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，調(diào)節(jié)各三角瓶中花粉液至相應(yīng)pH值，分別為5.5、6、6.5、7、7.5、8，再加入0.1g左右的復(fù)合蛋白酶后移至搖床中，分別在45、50、55℃條件酶解24h或48h 。

1.3.3 均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)[11]

試驗(yàn)中的pH值、溫度和時(shí)間等因素都對(duì)改善蜂花粉細(xì)胞通透性有影響，為了分析這3個(gè)因素以及各因素間的相互作用對(duì)酶解的影響，利用DPS軟件設(shè)計(jì)了均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)表1。

表1 均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表Table 1 Factors and their coded levels in uniform design

1.3.4 蛋白溶解指數(shù)的測(cè)定[12]

將處理好的花粉液以2500r/min離心20min，棄除上清液，收集沉淀，并放入真空干燥箱中干燥。準(zhǔn)確稱量0.1g左右干燥后的樣品進(jìn)行凱氏定氮，用于蛋白溶解指數(shù)測(cè)定。

1.3.5 比表面積測(cè)定

破壁后花粉粒的比表面積測(cè)定采用BET法[13]。將處理好的花粉液以2500r/min離心20min，棄除上清液，收集沉淀，放入真空冷凍干燥箱中干燥。準(zhǔn)確稱量一定量的樣品加入到比表面積儀的稱量管中，經(jīng)ASAP 2010軟件分析得出比表面積值。

1.3.6 粒度測(cè)定[14]

將5mL處理后的花粉液以2500r/min離心10min，去除上清液，用10mL蒸餾水溶解沉淀，重新離心去上清，再次溶解沉淀。將復(fù)溶的懸濁液加入激光粒度分析儀測(cè)定液中，利用低功率氦-氖激光器測(cè)定液體中花粉的粒度。

1.3.7 Zeta電位的測(cè)定[15]

經(jīng)過(guò)處理后的花粉液以2500r/min離心10min，取上清液加入電位儀樣品池，根據(jù)DelsaNano軟件操作得出相應(yīng)的Zeta電位值。

1.3.8 掃描電鏡觀察

處理后花粉液經(jīng)2500r/min離心20min，取沉淀干燥成粉末狀后，取少量均勻固定于樣品臺(tái)的膠帶上，再放入離子測(cè)射裝置鍍金90s，將制備好的樣品送入掃描電鏡中抽真空，后將電鏡調(diào)至適當(dāng)倍數(shù)后觀察。

1.3.9 透射電鏡觀察

將酶解后的花粉進(jìn)行包埋處理，之后將包埋好的樣品進(jìn)行超薄切片，用眉毛筆把切片撈至銅網(wǎng)上，將銅網(wǎng)放至濾紙上干燥備用，干燥好后放入透射電鏡的樣品室觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶法對(duì)蜂花粉蛋白溶解指數(shù)的影響

表2 均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Uniform design and corresponding experimental results

如表2所示，利用DPS軟件進(jìn)行多元逐步回歸方差分析，軟件將根據(jù)輸入的數(shù)據(jù)生成一個(gè)多元二次方程，方程如下：Y1＝73.6967246－19.714835466X1＋2.4019897367X2＋1.0990100000X12－0.028048100001X22－0.012 2 9 0 6 5 0 1 2 9X32＋0.0 2 7 3 8 9 8 0 6 4 4 9X1X2＋0.026101666667X1X3＋0.012287865741X2X3，其相關(guān)系數(shù)R2＝0.8602，調(diào)整決定系數(shù)R2Adj＝0.9639，F(xiàn)＝4.9135，P＝0.1089，方差分析結(jié)果表明，建立的回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

DPS軟件同時(shí)生成最高指標(biāo)時(shí)各因素的條件組合，即當(dāng)酶解pH8、酶解溫度49℃、酶解時(shí)間48h時(shí)能夠得到最大的蛋白溶解指數(shù)，為65.4758%。蛋白溶解指數(shù)反應(yīng)的是花粉經(jīng)酶解后溶出的蛋白質(zhì)與不加酶時(shí)比較，所得到的增加量，也就是說(shuō)在最佳酶解條件下，溶出的內(nèi)容物占花粉總內(nèi)容物的比例。

從本試驗(yàn)可以看出，均勻設(shè)計(jì)適用于花粉破壁的研究，在考察影響花粉破壁的多因素多水平試驗(yàn)中，與以往的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)相比，均勻設(shè)計(jì)的試驗(yàn)點(diǎn)分散均勻，且試驗(yàn)次數(shù)減少，大大提高了試驗(yàn)的效率和準(zhǔn)確度。

2.2 酶解對(duì)蜂花粉比表面積的影響

將試驗(yàn)得到的比表面積的數(shù)據(jù)添加至DPS軟件的數(shù)據(jù)欄中，如表2所示，利用DPS軟件進(jìn)行二元逐步回歸方差分析，軟件將根據(jù)輸入的數(shù)據(jù)生成一個(gè)二元方程如下：

Y2＝－122.11058－18.280596953X1＋7.356035932X2＋0.6489000000X12－0.07625800000X22－0.006245024911X32＋0.12175741935X1X2＋0.03649629630X1X3＋0.003590231481X2X3，其相關(guān)系數(shù)R2＝0.9105，調(diào)整決定系數(shù)R2Adj＝0.6107，F(xiàn)＝1.8176，P＝0.03379，方差分析結(jié)果表明，建立的回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

比表面積是指1g固體物質(zhì)的總表面積，即物質(zhì)內(nèi)部的內(nèi)表面積和外部的外表面積之和[12]。比表面積值越大，說(shuō)明在相同體積條件下同種物質(zhì)的總表面積越大，因此可以在一定程度上反應(yīng)花粉粒的破壁情況和內(nèi)容物的溶出情況，若蛋白酶實(shí)現(xiàn)了酶解作用，花粉壁上的蛋白物質(zhì)會(huì)被降解，這樣就會(huì)露出外壁的細(xì)微結(jié)構(gòu)，萌發(fā)孔也會(huì)打開(kāi)并露出部分內(nèi)表面，同時(shí)內(nèi)容物溶出，比表面積則會(huì)變大。DPS軟件根據(jù)以上多元方程進(jìn)行分析，結(jié)果表明獲得最大比表積時(shí)的酶解pH8、酶解溫度47℃、酶解時(shí)間48h，最大比表面積為12.6996m2/g。

2.3 最佳酶解條件的確定

比較蛋白溶解指數(shù)和比表面積的測(cè)定結(jié)果，兩者獲得最優(yōu)解時(shí)的條件非常接近。綜合兩者的數(shù)據(jù)，得到最佳的破壁條件為酶解pH8、酶解溫度48℃、酶解時(shí)間48h。

2.4 油菜蜂花粉在最佳酶解條件下的表征評(píng)定

2.4.1 比表面積

依照2.3節(jié)中獲得的最佳酶解條件處理花粉，并做空白對(duì)照，得到空白樣品的比表面積值為5.2013m2/g，經(jīng)酶解處理樣品的比表面積值為12.7688m2/g，油菜蜂花粉經(jīng)處理后比表面積增加了145.49%，可見(jiàn)比表面積明顯增加。說(shuō)明在合適條件下經(jīng)酶處理后，花粉液中的小粒徑顆粒增多，一方面可能是因?yàn)榛ǚ壑械膬?nèi)容物溶出，增加了小粒徑物質(zhì)的數(shù)量，另一方面可能是因?yàn)榛ǚ郾谏系牡鞍踪|(zhì)被破壞，內(nèi)壁外露，花粉粒的表面積相對(duì)增加，因此說(shuō)明酶解后花粉實(shí)現(xiàn)了破壁，并促進(jìn)了內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的溶出。

2.4.2 粒度分析

圖1 蜂花粉的粒度分析Fig.1 Particle size distribution of rape bee pollen with and without protamex treatment

由圖1可見(jiàn)，空白和加酶樣品的粒度分布有明顯的不同，同時(shí)分析軟件給出的數(shù)據(jù)包括，空白樣品50%顆粒粒徑小于25.648μm，90%顆粒粒徑小于51.837μm，花粉粒的平均粒徑為31.138μm；加酶樣品中50%顆粒的粒徑小于23.039μm，90%顆粒粒徑小于31.329μm，花粉粒的平均粒徑為23.747μm。以上數(shù)據(jù)都說(shuō)明加酶后樣品中許多花粉粒的粒徑明顯減小，總體分布上向小粒徑方向移動(dòng)，該結(jié)果可能是由于經(jīng)酶處理的花粉表面覆蓋物被去除，細(xì)胞壁變薄，萌發(fā)孔打開(kāi)所造成的，這樣也必然利于花粉內(nèi)容物的溶出。

利用激光粒度分析儀測(cè)定粒度，主要是從花粉壁破碎角度進(jìn)行評(píng)定。與以往利用顯微鏡照片進(jìn)行粒度分析的方法相比，采用此方法進(jìn)行分析所得出的結(jié)果更加接近真實(shí)數(shù)據(jù)，且具有說(shuō)明力，因?yàn)樗鶞y(cè)定的對(duì)象是整個(gè)體系中的所有花粉粒，從而避免了因取樣量有限帶來(lái)的結(jié)果偏差。

2.4.3 Zeta電位

Zeta電位是反映懸浮物穩(wěn)定性的重要指標(biāo)，Zeta電位絕對(duì)值越大，說(shuō)明體系中顆粒間排斥勢(shì)壘越高，則粒子間越穩(wěn)定。當(dāng)液體中顆粒少時(shí)，相互間的斥力可視為零，顆粒會(huì)不停的做布朗運(yùn)動(dòng)，增加碰撞的可能性，體系不穩(wěn)定；顆粒增多后，相互間會(huì)因距離減小而斥力增大，這就抵消了液體分子對(duì)其的部分作用力，體系變得穩(wěn)定。從圖2可知，空白樣品Zeta電位絕對(duì)值為11.89mV，而加酶樣品Zeta電位絕對(duì)值為24.49mV，酶解后的樣品電位比空白樣品高12.60mV，加酶樣品液更穩(wěn)定。這說(shuō)明加酶蜂花粉細(xì)胞壁的通透性有所改善，內(nèi)容物從花粉內(nèi)部釋放到外界，因溶液中內(nèi)容物顆粒數(shù)量增多，且均勻分散，所以顆粒間距離會(huì)減小，又因?yàn)閮?nèi)容物顆粒表面帶有相同的電荷，而產(chǎn)生高靜電排斥，所以體系穩(wěn)定。

圖2 蜂花粉的Zeta電位Fig.2 Zeta potential of rape bee pollen with and without protamex treatment

Zeta電位大小反應(yīng)了花粉內(nèi)容物的溶出情況，是從溶液穩(wěn)定性的角度進(jìn)行表征評(píng)定。該方法從一個(gè)全新的視角用宏觀的電位值來(lái)反應(yīng)微觀世界發(fā)生的物質(zhì)變化，具有一定說(shuō)明力。

2.4.4 掃描電鏡

成熟蜂花粉的花粉壁可以明顯地區(qū)分為兩層，即外壁和內(nèi)壁，外壁主要由孢粉素和纖維素構(gòu)成，內(nèi)壁主要由纖維素和果膠構(gòu)成，并且油菜蜂花粉的壁上等距離分布著3個(gè)萌發(fā)孔，萌發(fā)孔處只有內(nèi)壁而缺少外壁，它是花粉最易受環(huán)境影響的部位，因此要在此處破壞花粉壁的結(jié)構(gòu)以達(dá)到破壁的目的。在通常情況下，花粉粒的外表面有覆蓋物，它附著在花粉表面，當(dāng)花粉釋放后起著保護(hù)花粉免受損傷和侵染的作用，從另一角度來(lái)說(shuō)也就限制了萌發(fā)孔的打開(kāi)和內(nèi)容物的溶出。從圖3酶解前后油菜蜂花粉的對(duì)比照片可見(jiàn)，空白樣品中的花粉粒基本成球形，萌發(fā)孔沒(méi)有顯露出來(lái)，并且花粉壁表面附著著大量的覆蓋物，阻礙了其內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的溶出釋放。而加酶處理后的花粉粒，其表面的覆蓋物已完全去除，可以清晰的觀察到花粉外壁光滑多孔的結(jié)構(gòu)，而且花粉粒的3個(gè)萌發(fā)孔都已經(jīng)打開(kāi)并向外擴(kuò)張，花粉粒基本成類扁球形，花粉的內(nèi)容物則通過(guò)萌發(fā)孔處向外溶出。由此可以判定，酶解改善了蜂花粉細(xì)胞壁的通透性，并使其內(nèi)容物溶出。

圖3 蜂花粉的掃描電鏡照片F(xiàn)ig.3 SEM micrograph of rape bee pollen with and without protamex treatment

2.4.5 透射電鏡

從圖4空白樣品的超薄切片照片可清楚的看到蜂花粉內(nèi)部結(jié)構(gòu)，由外到內(nèi)依次是外壁、內(nèi)壁和內(nèi)容物，外壁又分為外壁外層和外壁內(nèi)層，外壁外層結(jié)構(gòu)的空隙內(nèi)充滿著覆蓋物，花粉壁上沒(méi)有外壁只有內(nèi)壁的部位稱為萌發(fā)孔，內(nèi)壁像一層彈性膜一樣包裹著內(nèi)容物?？瞻讟悠返幕ǚ郾诮Y(jié)構(gòu)完整，花粉粒中充滿了內(nèi)容物，沒(méi)有發(fā)生外溢。而經(jīng)過(guò)酶解的樣品，花粉的形態(tài)有了明顯改變，花粉外壁不再連續(xù)完整，3個(gè)萌發(fā)孔處的內(nèi)壁都有不同程度的外突，內(nèi)部物質(zhì)成團(tuán)聚狀外溢，有些花粉粒的內(nèi)容物在此剖面上已完全溢出。因此，可以認(rèn)為加酶處理能夠明顯改善花粉壁的通透性，且促使內(nèi)溶物溶出。

圖4 蜂花粉的透射電鏡照片F(xiàn)ig.4 TEM micrograph of rape bee pollen with and without protamex treatment

本實(shí)驗(yàn)嘗試?yán)萌碌臋z測(cè)技術(shù)從不同角度對(duì)蜂花粉破壁、內(nèi)容物溶出情況進(jìn)行表征評(píng)定。比表面積、激光粒度分析和Zeta電位測(cè)定是利用物理指標(biāo)對(duì)酶解蜂花粉進(jìn)行評(píng)定，電鏡的使用直觀呈現(xiàn)了花粉酶解前后的形態(tài)改變，照片比光鏡更清晰，也比單純的數(shù)據(jù)結(jié)果更有說(shuō)力。各表征評(píng)定結(jié)果相互吻合，共同驗(yàn)證了酶處理花粉，能夠使其細(xì)胞壁通透性改善、內(nèi)容物溶出這一假設(shè)。

3 結(jié) 論

3.1 利用復(fù)合蛋白酶酶解油菜蜂花粉得到的最佳酶解條件為pH8、溫度48℃、時(shí)間48h，表征結(jié)果說(shuō)明蛋白酶作用花粉效果顯著，是一種理想的破壁方法。

3.2 在最佳酶解條件下測(cè)定的粒度結(jié)果顯示，酶解后花粉粒徑減小，總體在向小粒徑方向移動(dòng)，這表明花粉的細(xì)胞壁完整性被破壞。

3.3 Zeta電位結(jié)果反應(yīng)了在最佳酶解條件下內(nèi)容物的變化，說(shuō)明酶解后的花粉壁通透性改善，溶解在溶液中的內(nèi)容物明顯增加。

3.4 掃描電鏡和透射電鏡的表征結(jié)果印證了粒度分析和Zeta電位的結(jié)論，直觀的呈現(xiàn)了酶解前后花粉粒內(nèi)外的變化，外部花粉壁不再完整，萌發(fā)孔打開(kāi)，內(nèi)部?jī)?nèi)容物溶出，含量減少。

綜上所述，用復(fù)合蛋白酶酶解油菜蜂花粉，并首次應(yīng)用比表面積、激光粒度、Zeta電位、電鏡等新方法對(duì)其進(jìn)行表征評(píng)定，揭示了花粉破壁的本質(zhì)，各表征評(píng)定指標(biāo)都能驗(yàn)證酶解促進(jìn)花粉破壁、內(nèi)容物溶出這一結(jié)論，它們共同建立起了科學(xué)可靠的花粉破壁表征評(píng)定體系。

[1] 吳素芳, 曹煒, 姚亞萍. 油菜蜂花粉提取物對(duì)羥基自由基介導(dǎo)2-脫氧核糖損傷的抑制作用[J]. 食品科學(xué), 2006, 27(10): 544-548.

[2] 蘇壽祁. 蜂花粉的化學(xué)組成[J]. 中國(guó)養(yǎng)蜂, 2005, 56(9): 42-43.

[3] AUCLAIR J L, JAMIESON C A. A quantitative analysis of amino acids in pollen collected by bees[J]. Science, 1948, 108: 357-361 .

[4] ROULSTON T H, GANE J H. Pollen nutritional content and digestibility for animals[J]. Plant Systematics and Evolution, 2000, 222(4):187-209.

[5] HESLOP-HARRION J. Pollen germination and pollen-tube growth[J].Plant Physiology, 1987, 107: 1-78.

[6] LINSKENS H F, JORDE W. Pollen and medicine 2 areview[J]. Economic Botany, 1997, 51(1): 78-87.

[7] ECHLIN P. Pollen[J]. Scientific American, 1968, 218: 80-90.

[8] 楊月琴, 胡鳳祖, 盧挺. 青海油菜蜂花粉酶解破壁前后營(yíng)養(yǎng)成分的比較[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2007, 16(1): 100-102.

[9] 唐維, 張星海. 花粉破壁方法的研究進(jìn)展[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2003,29(12): 86-91.

[10] 任向楠, 張紅城, 董捷, 等. 木瓜蛋白酶對(duì)油菜花粉細(xì)胞壁通透性改善的研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(23): 246-251.

[11] 金汝城, 周術(shù)濤. 均勻設(shè)計(jì)和正交設(shè)計(jì)在黃芪活性成份提取中的應(yīng)用比較[J]. 生物數(shù)學(xué)學(xué)報(bào), 2009, 24(3): 518-522.

[12] 劉桂賓, 張璐, 李元, 等. 豆粕蛋白溶解度測(cè)定方法的研究[J]. 檢驗(yàn)檢疫科學(xué), 2007, 17(12): 36-39.

[13] 白峰, 馬鴻文. 13X沸石分子篩的比表面積和孔分布[J]. 現(xiàn)代地質(zhì),2008, 22(5): 838-844.

[14] 周春華, 劉威, 張書香, 等. Fe3O4/P(NaUA-St-BA)核-殼納米磁性復(fù)合粒子的合成與表征[J]. 高分子學(xué)報(bào), 2005, 8(4): 606-610.

[15] 張立永, 賈樹(shù)妍, 肖光輝, 等. 應(yīng)用Zeta電位研究液態(tài)奶的穩(wěn)定機(jī)制[J]. 中國(guó)乳品工業(yè), 2007, 35(12): 38-41.

Protamex Hydrolysis and Cell Wall of Rape Bee Pollen

GAO Kun，ZHANG Hong-cheng，DONG Jie*
(Institute of Agicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China)

Bee pollen is rich in nutrients, most of which are present inside the cells. The development and exploitation of bee pollen is restricted by the existing cell wall. An investigation to cell wall disruption of rape bee pollen by means of protamex hydrolysis was carried out in this study. The optimal cell wall disruption conditions were found to be: pH 8, 48 ℃ and 48 h hydrolysis. Rape bee pollen with protamex treatment under these conditions was observed under SEM (scan electron microscope)and TEM (transmission electron microscope), and the specific surface area, particle size and Zeta potential were characterized.The results obtained collectively indicate the role of protamex hydrolysis in improving the permeability of rape bee pollen cells from different perspectives.

bee pollen；protamex；cell wall disruption；cell permeability

S896

A

1002-6630(2011)20-0099-05

2011-01-05

國(guó)家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(nyhyzx07-041)；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(蜂)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(200808)

高鯤(1986—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)榉洚a(chǎn)品化學(xué)。E-mail：gaokunkun2008@163.com

*通信作者：董捷(1966—)，女，研究員，碩士，研究方向?yàn)楣δ苁称放c生物活性物質(zhì)。E-mail：jiedon@126.com