徐麗珊，章海文

(1.浙江師范大學化學與生命科學學院，浙江 金華 321004；2.樂清市疾病預防控制中心，浙江 樂清 325600)

松針提取液的抗氧化活性

徐麗珊1，章海文2

(1.浙江師范大學化學與生命科學學院，浙江 金華 321004；2.樂清市疾病預防控制中心，浙江 樂清 325600)

通過測定豬油的過氧化值(POV)、總抗氧化能力、羥自由基(·OH)以及超氧陰離子自由基(O2·)的清除能力檢測馬尾松、黑松和濕地松3種松針水提液和醇提液的抗氧化能力。結果表明：3種松針水提液的總抗氧化能力、抑制豬油的脂質過氧化都具有較好效果(P＜0.01)，但醇提液效果不及水提液；3種松針的醇提液和水提液(濕地松水提液除外)對·OH的清除效果極顯著(P＜0.01)，對O2·也有很強的清除作用，而且清除能力與質量濃度有一定的關系。結論：3種松針水提液及醇提液均具有一定的抗氧化能力。

松針；提取液；抗氧化活性

松針是一種分布廣泛、天然蓄積量大、可持續(xù)利用的天然再生資源。近年來，國內(nèi)對松針的化學成分及功能進行了大量的研究[1-3]，證明了松針有較強的抗氧化活性，如潘炘等[4-5]研究了馬尾松松針提取物對DPPH自由基的清除能力和對Fe3+的還原能力，張培等[6]研究了松針提取物清除·OH的效果，李慶明等[7]研究了老葉和嫩葉松針水提物對DPPH自由基、·OH、O2·的清除效果等，但對不同品種松針的不同提取液之間抗氧化效果的比較還缺乏報道。本實驗就浙江省常見的馬尾松、濕地松和黑松3種松針的水提液和醇提液對豬油的抗氧化、對Fe3+的還原能力以及對·OH、O2·的清除能力進行檢測，比較它們的抗氧化能力，為更好利用浙江省松樹資源、進一步開發(fā)松針源抗氧化劑提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

馬尾松(Pinus massoniana Lamb.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)和濕地松(Pinus elliottii Engelm.)松針均采自浙江師范大學校園，經(jīng)浙江師范大學植物學博士陳文榮老師鑒定。

豬油由市售新鮮板油熬制。碘化鉀、可溶性淀粉、硫代硫酸鈉、核黃素、甲硫氨酸(Met)、氯化硝基四氮唑藍(NBT)、乙二胺四乙酸(EDTA)、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸亞鐵、水楊酸鈉、抗壞血酸、無水乙醇、鹽酸、氯仿、冰乙酸、過氧化氫(H2O2)等均為分析純；重鉻酸鉀為基準試劑；Fe3+還原試劑盒南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 松針水提液的制備

工藝流程參考黃文等[8]的方法。取新鮮松針100g，剪成1～2cm長置于圓底燒瓶中，加自來水1200mL(液料比12:1)，加熱煮沸2.5h后，過濾，旋轉濃縮至50mL，即含量為2.00g/mL，得馬尾松水提液(MAE)、黑松水提液(TAE)、濕地松水提液(EAE)。每個處理設4個重復。

1.2.2 松針醇提液的制備

以液料比12:1的比例在索氏提取器中加入剪碎的新鮮松針及95%乙醇，然后置于恒溫水浴鍋中，90℃恒溫水浴回流浸提2.5h，浸提液經(jīng)過濾后旋轉濃縮至終質量濃度為2.00g/mL，得馬尾松醇提液(MEE)、黑松醇提液(TEE)、濕地松醇提液(EEE)。每個處理設4個重復。

1.2.3 抗氧化能力測定

1.2.3.1 提取物在豬油中抗氧化能力實驗

豬油由市售新鮮板油熬制。采用烘箱法[9]。加一定量VC或松針提取液(0.5mL/100mL豬油)，每隔一定時間測定豬油的過氧化值(POV值)。POV值的測定方法按GB 5538—85《植物油脂檢驗 油脂酸敗實驗及過氧化值測定法》[10]。

1.2.3.2 總抗氧化能力測定實驗

采用Fe3+還原試劑盒法，測定方法參照南京建成生物工程研究所生物總抗氧化能力(TAC)測試盒說明書。

1.2.3.3 羥自由基(·OH)清除實驗

參照Smirnoff等[11]方法。

參照Siddhurajua等[12]的方法。

2 結果與分析

2.1 松針提取液總抗氧化能力

VC(1.00mg/mL)及3種松針的兩種提取液(1.00g/mL)的TAC見表1。

從表1可看出，3種松針的兩種提取液及VC都有一定的總抗氧化能力，其中濕地松水提液、馬尾松水提液的總抗氧化能力極顯著高于VC，而VC的總抗氧化能力極顯著高于黑松水提液及3種松針的醇提取液。

2.2 松針提取液在豬油中的抗氧化能力

以VC(1.00mg/mL)為參照，以不加任何樣品的豬油(CK)為對照，3種松針的兩種提取液(1.00g/mL)，定時測定油脂的POV值，結果見表2。

表2 3種松針提取液及VC對豬油的抗氧化能力(POV)Table 2 Protective effects of six extracts and VC against lipid peroxidation in lard

由表2可知，實驗溫度為60℃，所有實驗用豬油的POV值隨時間的延長呈現(xiàn)上升趨勢，CK組的POV值在3d后差異就極顯著(P＜0.01)。3種松針的兩種不同提取液及VC在豬油中均具有一定的抗氧化作用，而且隨著豬油放置時間的延長，這種作用越來越明顯。VC在第7天顯示出較明顯的抗氧化效果(P＜0.05)。黑松水提液和馬尾松水提液在第3天顯示出較明顯的抗氧化效果(P＜0.05)，在第5天及第7天效果極其顯著(P＜0.01)。濕地松水提液則在第3天就顯示了極其顯著的效果(P＜0.01)。黑松醇提液在第7天顯示了顯著性效果(P＜0.05)。馬尾松醇提液在本實驗中沒有效果。濕地松醇提液在第5天效果顯著(P＜0.05)，到第7天效果極顯著(P＜0.01)。

2.3 松針提取液對·OH清除能力

圖1 3種松針水提液清除羥自由基能力Fig.1 Scavenging abilities of three aqueous extracts against hydroxyl radicals

由圖1可知，與CK(水)相比，2.00g/mL以下的3種松針水提液對·OH均沒有清除作用；質量濃度為2.00g/mL時，黑松水提液和馬尾松水提液均具有極顯著的清除·OH能力(P＜0.01)，清除率分別為20.40%和29.15%，同質量濃度濕地松水提液對·OH的清除作用不顯著。

由圖2可知，與CK(95%乙醇)相比，0.125g/mL及0.25g/mL的3種松針醇提液均具有極顯著的清除·OH能力(P＜0.01)，且清除能力隨提取液質量濃度的增加而增加。

表1 3種松針提取液及VC的TACTable 1 TAC activities of six extracts and VC

圖2 3種松針醇提液清除羥自由基能力Fig.2 Scavenging abilities of three ethanol extracts against radicals hydroxyl radicals

表3 不同質量濃度3種松針提取物對O·的清除能力Table 3 Scavenging abilities of six extracts at various concentrations against superoxide anion radicals

表3 不同質量濃度3種松針提取物對O·的清除能力Table 3 Scavenging abilities of six extracts at various concentrations against superoxide anion radicals

質量濃度/ 清除率/% (g/mL)MAEMEEEAEEEETAETEE 0.016 75.02±0.01 43.70±0.01 90.00±0.01 85.66±0.01 85.25±0.01 54.53±0.02 0.063 89.59±0.01 70.07±0.02 88.02±0.01 88.44±0.01 91.03±0.01 71.96±0.01 0.125 91.50±0.01 55.23±0.01 79.84±0.01 79.81±0.01 96.84±0.01 73.63±0.01 0.25 85.66±0.01 45.44±0.01 52.16±0.02 65.53±0.02 81.54±0.01 68.41±0.02 0.50 80.95±0.01 33.67±0.01 42.47±0.01 33.10±0.01 73.59±0.01 52.68±0.01

3 結論與討論

馬尾松、黑松和濕地松松針水提液的總抗氧化能力高于VC，其中濕地松松針水提液的總抗氧化能力最高，而3種松針醇提液的總抗氧化能力低于VC，這與展銳等[13]對火絨草提取物的研究不同。馬尾松、黑松和濕地松松針水提液和醇提液都具有阻斷豬油脂質過氧化的作用，3種松針醇提液在豬油中的抗氧化效果與VC相近，而3種松針水提液在豬油中的抗氧化效果明顯優(yōu)于相應醇提液的抗氧化效果。這與張嘉岷等[14]對宜苔的研究結果相似。

馬尾松、黑松和濕地松松針兩種提取液對·OH和O2·的清除實驗表明：除濕地松水提液對·OH清除效果不明顯外，其余提取液對·OH和O2·都有清除效果。清除·OH時，3種松針醇提液的效果優(yōu)于水提液。清除·時，除濕地松兩種提取液清除能力基本接近外，其他兩種松針水提液的清除效果明顯比其醇提液好(P＜0.01)，在醇提液方面，濕地松、黑松的清除效果則比馬尾松好；說明同一溶劑提取物對不同自由基的清除能力不同；不同溶劑提取物對同一自由基的清除能力差別較大，這與莫正昌等[15]對鹿蹄草提取物的研究結果相似。3種松針兩種提取液對·OH和·的清除實驗表明其清除率與質量濃度有一定的關系。清除·O H時，效果隨質量濃度增加而增加，但清除·時，效果隨提取液種類不同而不同，質量濃度高，清除效果呈下降趨勢，其原因可能是由于實驗所用的提取液都是粗提液，成分復雜，可能含有反應體系中自由基引發(fā)劑等作用。Zhou等[16]的研究表明：在提取液濃度增高時，其多糖濃度也增高，部分多糖分子本身也被誘導產(chǎn)生了自由基，故高濃度表現(xiàn)為低抗氧化活性。

3種松針兩種提取液的抗氧化性能差異的原因，可能是由于松針中存在多種抗氧化性物質，它們在水及乙醇中的溶解度不同，因而導致不同溶劑對不同抗氧化物質提取程度不同。已經(jīng)表明松針中含有豐富的有機酸、多糖、黃酮類等化學成分[1-2]。因而，在水提液中，可能含有較多的有機酸、VC、黃酮類及糖類等水溶性成分，而醇提物中可能含有較多的脂溶性成分，如VE、色素等。在本實驗中，采用的是松針的粗提液而沒有進行分離純化，因此，具體是松針中的哪一類或哪幾類物質起了抗氧化作用，還需要進行進一步研究。

[1]田建華. 松針的組成成分及其主要生理功能[J]. 山西林業(yè)科技, 2006 (2): 5-7.

[2]鄭曉珂, 馮衛(wèi)生, 王彥志, 等. 松針的化學成分研究[J]. 中國藥學雜志, 2004, 39(11): 820-821.

[3]徐麗珊, 張萍華, 張敏歡. 松針提取液的抑菌作用初探[J]. 食品科學, 2009, 30(1): 38-41.

[4]潘炘, 劉亞群, 陳順偉, 等. 馬尾松松針提取物抗氧化能力研究[J].浙江林業(yè)科技, 2009, 29(1): 44-46.

[5]潘炘, 陳順偉, 莊曉偉. 不同提取方式馬尾松松針抗氧化能力研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2009, 30(8): 108-110.

[6]張培, 鄭鴻雁, 昌友權, 等. 松針黃酮的體外抗氧化作用研究[J]. 食品科學, 2005, 26(9): 506-508.

[7]李慶明, 莫開菊. 幾種松針水提液抗氧化活性的比較研究[J]. 湖北民族學院學報: 自然科學版, 2008, 26(2): 212-216.

[8]黃文, 王益, 胡筱波, 等. 竹葉提取物抑菌特性的研究[J]. 林產(chǎn)化學與工業(yè), 2002, 22(1): 68-70.

[9]鐘立人, 蔣家新, 竺尚武. 食品科學與工業(yè)原理[M]. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 1999: 124.

[10]GB 5538—1985植物油脂檢驗 油脂酸敗試驗及過氧化值測定法[S].北京: 中國標準出版社, 1985.

[11]SMIRNOFF N, CURBES Q J. Hydroxyl radical scavenging activity of compatiblesolutes[J]. Fhytochemistry, 1989, 28(4): 1057-1060.

[12]SIDDHURAJUA P, MOHANB P S, BECKERA K. Studies on the antioxidant activity of Indian Laburnum(Cassia fistula L.): a preliminary assessment of crude extracts from stem bark, leaves, flowers and fruit pulp[J]. Food Chemistry, 2002, 79(1): 61-67.

[13]展銳, 庫爾班, 茍萍, 等. 火絨草提取物抗氧化活性的研究[J]. 食品科學, 2010, 31(3): 153-159.

[14]張嘉岷, 仇鑫, 黃平源, 等. 宜苔對油脂的抗氧化研究[J]. 中國海洋藥物, 2002(2): 28-30.

[15]莫正昌, 鄧靖, 汲廣全, 等. 鹿蹄草提取物體外抗氧化活性評價[J].食品科學, 2010, 31(3): 19-21.

[16]ZHOU Zhigang, LIU Zhili, LIU Xuexian. Study on the isolation, purification and antioxidation properties of polysaccharides from Spirulina maxima[J]. Acta Bot Sin, 1997, 39(1): 77-81.

Antioxidant Activity of Extracts from Pine Needles

XU Li-shan1，ZHANG Hai-wen2
(1.College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, China；2. Yueqing Center for Disease Control and Prevention, Yueqing 325600, China)

The antioxidant activities of aqueous and ethanol extracts from three species pine needles (Pinus massoniana Lamb., Pinus thunbergii Parl. and Piuns elliottii Engelm.) were studied in terms of their total antioxidant capacity (TAC), protective effect against oxidation in lard (expressed as peroxide value) and abilities to scavenge hydroxyl and superoxide anion free radicals. Water extracts from three species pine needles were found to have excellent TAC and anti-lard lipid peroxidation activities (P＜0.01) and to be better than ethanol extracts. Except the aqueous extract from Pinus elliottii Engelm. needles, other five extracts had a significant scavenging effect against hydroxyl free radicals (P＜0.01), but all the six extracts exhibited a strong ability to scavenge superoxide free radicals in a dose-dependent manner.

pine needles；extracts；antioxidation

S789.4

A

1002-6630(2011)07-0097-03

2010-08-11

浙江省科技廳科技計劃項目(2010C34002)；金華市科學技術局科技計劃項目(2009-2-059)

徐麗珊(1966—)，女，副教授，碩士，研究方向為生理生化和食品營養(yǎng)。E-mail：xls@zjnu.cn