戰(zhàn)桂娟 邊疆

HG-原子熒光光譜法測定糧食中的總硒

戰(zhàn)桂娟 邊疆

微量元素硒在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著十分重要的生物學(xué)意義，人體攝入硒的不足或過量會導(dǎo)致疾病的發(fā)生，據(jù)文獻(xiàn)克山病和大骨節(jié)病的發(fā)生同低硒有密切關(guān)系，所以微量硒的準(zhǔn)確測定為醫(yī)學(xué)界所重視［1-2］。一般常用的測定硒的方法有分子熒光法、原子吸收分光光度法等［3］。氫化物原子熒光法(HGAFS)是利用特征輻射源激發(fā)待測元素原子并測量其熒光強度的新型分析技術(shù)。近幾年來，在衛(wèi)生理化檢驗領(lǐng)域開始采用其分析技術(shù)。本文利用該方法測定糧食中的硒，其方法簡便、快速、準(zhǔn)確取得了較滿意的結(jié)果。

1 實驗方法

1.1 原理 樣品經(jīng)消化后，與硼氫化鉀和酸所產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成硒的氫化物，由氫氣載氣導(dǎo)入石英爐原子化器，使其原子化。在硒特種空心陰極燈激發(fā)下，產(chǎn)生原子熒光，測定其熒光強度并與標(biāo)準(zhǔn)系列比較而測出樣品中硒含量。

2 結(jié)果與討論

通過試驗，確定儀器最佳測試條件如下:燈電流，80 mA;負(fù)高壓，300 V;原子化溫度，200℃;原子化器高度，8.0 mm;載氣流速，400 ml/min;屏蔽氣流速，1000 m1/min;讀數(shù)時間，11 s;延遲時間，0 s;測定方式，標(biāo)準(zhǔn)曲線法，讀數(shù)方式;峰面積。

2.1 還原劑濃度的確定 經(jīng)實驗表明:當(dāng)硼氫化鉀濃度小于0.5%時，熒光強度較低;當(dāng)硼氫化鉀的濃度達(dá)到0.5%時，熒光強度迅速增加;硼氫化鉀濃度＞0.7%時，熒光強度增加趨于平緩;硼氫化鉀濃度達(dá)到1.0%時，熒光強度最大，且其變化相對最小;如再繼續(xù)增加硼氫化鉀濃度，則將產(chǎn)生大量剩余氣體，沖淡了硒氫化物的濃度，降低了氣態(tài)原子的密度，熒光強度緩慢降低。因此確定還原劑硼氫化鉀濃度為1.0%。

2.2 酸度的確定 氫化物的形成與兩個因素有關(guān)，一是被測元素與新生態(tài)氫的化合速度;另外是硼氫化鉀在酸性溶液中分解時產(chǎn)生新生態(tài)氫的速度。硼氫化鉀在酸性介質(zhì)中的反應(yīng)當(dāng)硼氫化鉀溶液濃度一定時，硼氫化鉀的分解速度與氫離子的濃度有關(guān)，即與硼氫化鉀所處的酸性介質(zhì)有關(guān)。當(dāng)氫離子的濃度較小時，硼氫化鉀的分解速度隨著氫離子濃度的增加而加快，熒光強度迅速提高;當(dāng)氫離子的濃度達(dá)到25%時，熒光強度達(dá)最大值，但隨著氫離子濃度的進(jìn)一步加大，所產(chǎn)生的氫氣沖淡了硒氫化合物濃度，反而導(dǎo)致熒光強度下降。為保持其穩(wěn)定，本實驗確定酸度為25%。

2.3 線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線及最低檢出限 在本實驗條件下，針對樣品中硒含量水平，選擇了1.00～10.0 ng/ml范圍內(nèi)進(jìn)行測定，其標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為:Y=494.8ρ+1.68;相關(guān)系數(shù)為0.999 7;最低檢出限為0.06 ng/ml。

2.4 回收率試驗 在糧食中分別添加25、100、400 ng硒標(biāo)準(zhǔn)，按本法進(jìn)行三濃度水平三平行回收率試驗，回收率在94.5%～101.2%之間。結(jié)果見表1。

表1 三濃度水平下回收率試驗

2.5 精密度試驗 取3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列水平進(jìn)行試驗，每一濃度取6份平行樣品進(jìn)行測定，其標(biāo)準(zhǔn)差及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，如表2所示。

表2 精密度試驗結(jié)果(ng/ml)

2.6 干擾實驗 測定過程中，Cu，Ni等元素的存在對硒的熒光信號有干擾，當(dāng)加入一定量的鐵氰化鉀時即可消除。本文選用10%的鐵氰化鉀溶液作為基體改進(jìn)劑。

［1］于敬紅，李環(huán)，楊丹妮，等.微量元素硒與健康.中國地方病防治雜志，2009，24(4):265-266.

［2］李景巖.硒與大骨節(jié)病.中國地方病防治雜志，2008，23(6): 435-437.

［3］楊慧芬，李明元，沈文.食品衛(wèi)生理化檢驗標(biāo)準(zhǔn)手冊.中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1997:171-175.

130062 吉林省長春市綠園區(qū)疾病預(yù)防控制中心(戰(zhàn)桂娟);吉林省疾病預(yù)防控制中心(邊疆)

1.2 試劑與儀器

1.2.1 儀器 AFS-230E型雙道原子熒光光譜儀(北京海光儀器公司);硒特種空心陰極燈(北京有色金屬研究院)。

1.2.2 試劑 1%硼氫化鉀溶液(1 g硼氫化鉀溶于100 ml 0.5%氫氧化鉀溶液中，用時現(xiàn)配);硝酸(GR);硒儲備溶液(1 mg/ml)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心;硒標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 mg/ml)由硒儲備溶液配制而成;鹽酸(GR);過氧化氫(AR)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制 在10 ml比色管中分別加入0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 ml硒標(biāo)準(zhǔn)液(100 ng/ml)。用少量去離子水稀釋后，加入濃鹽酸2.00 ml，用水稀釋至刻度，搖勻，備用，其濃度分別為1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和10.0 ng/ml。

1.4 樣品處理 稱取0.25 g左右樣品于聚四氟乙烯內(nèi)管中，加入2.50 ml濃硝酸，搖勻浸泡過夜。再加入過氧化氫1 ml。蓋好內(nèi)蓋，旋緊不銹鋼外套，放入恒溫干燥箱，140℃保持4 h，在箱內(nèi)自然冷卻至室溫。取出后放入燒杯中，再加入5 ml 6 mol/L鹽酸，置于電熱板上加熱，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)闊o色透明并伴有白煙出現(xiàn)，以完全將六價硒還原四價硒。冷卻，轉(zhuǎn)移10 ml比色管中，同時做空白試驗。

1.5 測定 按本方法所確定的儀器最佳測試條件，將標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度及樣品參數(shù)等輸入計算機程序后，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液及未知樣品的測定。