張連忠

（唐山師范學(xué)院 生命科學(xué)系，河北 唐山 063000）

鹽酸克林霉素化學(xué)名 6-(1-甲基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1-硫代-7(S)-氯-6,7,8-三脫氧-L-蘇式-a-D-半乳辛吡喃糖苷鹽酸鹽，屬林可霉素類抗生素，為林可霉素的衍生物，抗菌譜與林可霉素相同，抗菌活性較林可霉素強(qiáng)4~8倍。它對革蘭氏陽性需氧菌、鏈球菌、葡萄球菌具有抗菌活性，對多種厭氧菌、衣原體、支原體和鉤形蟲也具有抗菌活性[1,2]。它的作用機(jī)制是與細(xì)菌核糖體的50s亞基結(jié)合，通過抑制肽鏈的延長而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，通過去除細(xì)菌表面 A蛋白質(zhì)和絨毛狀外衣，使其易被吞噬和殺滅[3]；同時(shí)它對機(jī)體免疫系統(tǒng)有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)多型核白細(xì)胞的吞噬和殺菌功能，還可以改變細(xì)菌表面活性并能夠抑制細(xì)菌毒素的產(chǎn)生?？肆置顾卦诙嘈魏税准?xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi)積聚，使?jié)舛瘸^細(xì)胞外40倍，這也許是克林霉素具有較強(qiáng)殺滅細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌能力的原因?？肆置顾匾部捎行У臏p少或防止多糖—蛋白復(fù)合物的形成，使細(xì)菌不易粘附到骨組織，從而易被巨噬細(xì)胞和抗生素所殺滅[4]。本研究僅從抗氧劑、pH值范圍、活性炭脫色條件、活性炭用量以及滅菌條件五個(gè)方面對鹽酸克林霉素注射液進(jìn)行研究，以期獲得該注射液的最佳處方及比較優(yōu)化的相關(guān)生產(chǎn)工藝指標(biāo)。

1 材料和方法

1.1 儀器藥品

CLASS-VP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；pH-3C數(shù)字酸度計(jì)（杭州東星儀器設(shè)備廠）；VC（天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司）；活性炭（北京大力精細(xì)化工廠）。

1.2 鹽酸克林霉素注射液（0.75g/10mL）制法

在配制容器中加入配制用量50%的注射用水，稱取處方量鹽酸克林霉素加入到容器中溶解，另取處方量的氯化鈉、枸櫞酸鈉，加入至藥液中，攪拌至溶解，再加入2%的枸櫞酸溶液調(diào)節(jié)pH值，然后加入一定量的活性炭，攪拌15min，粗濾脫碳，最后加入注射用水至規(guī)定量，濾液經(jīng)0.22μm的過濾器過濾，灌裝機(jī)灌裝到安瓿瓶中并熔封，滅菌。

1.3 抗氧劑的選擇

為了提高注射液的穩(wěn)定性，采用了注射劑中常用的抗氧劑如VC、L-半胱氨酸、EDTA-2Na、Na2S2O5、Na2S2O3等，進(jìn)行篩選試驗(yàn)比較。取表1中處方量的原輔料加50mL水溶解，用2%的枸櫞酸溶液調(diào)節(jié)pH值為4.5時(shí)，加入100mL水定容，抽濾，分裝于安瓿瓶中并熔封，115℃流通蒸汽30min滅菌。采用加速試驗(yàn)方法（按市售包裝溫度40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件放置）考察樣品的穩(wěn)定性，在60℃條件下分別放置 5d、10d，采用高效液相色譜法[5]測定含量的變化（含量測定的方法如下），同時(shí)觀察澄明度的變化。

1.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨2.88 g，加水溶解成1 000mL，用80%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH=3.0）－甲醇（210: 300）為流動(dòng)相；檢測波長為214nm。理論塔板數(shù)按克林霉素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1 300。

1.3.2 測定法

精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取克林霉素對照品適量，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中C18H33ClN2O5S的含量。

1.4 pH值范圍的篩選

按鹽酸克林霉素注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求 pH值應(yīng)在 3.5~5.5，加入適量弱酸調(diào)節(jié)不同pH值。在加熱前檢測克林霉素的百分含量（方法見 1.3），并觀察注射液的外觀。100℃加熱2h后同樣記錄這兩項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果，與加熱前進(jìn)行對比，考察注射液的穩(wěn)定性。

1.5 活性炭脫色條件的選擇

為了減少雜質(zhì)對注射劑的影響，在工藝研究中選擇活性碳處理藥液。試驗(yàn)在不同pH值條件下，加入0.3%活性碳，分別置水浴 80℃加熱 10min，照含量測定方法測定相對含量，并觀察鹽酸克林霉素注射液的外觀顏色，以探索活性炭脫色的最佳條件。

1.6 活性炭用量的選擇

調(diào)節(jié)pH至4.0時(shí)，分別加入0.1%、0.2%、0.3%的活性炭，分別置沸水浴加熱10min，照含量測定方法測定相對含量，并觀察注射液的外觀，以期找到活性炭的最佳用量。

1.7 滅菌條件的選擇

采用流通蒸氣115℃ 30min、流通蒸氣115℃ 45min、熱壓121.5℃ 20min和熱壓115℃ 30min四種不同的滅菌方式。考察不同滅菌條件下，對鹽酸克林霉素注射液的顏色、含量、pH值、有關(guān)物質(zhì)的影響（有關(guān)物質(zhì)采用高效液相色譜法[5]測定。具體測定方法如下）。分別取同一批號樣品4份，在不同滅菌條件下進(jìn)行試驗(yàn)，選擇最佳滅菌條件。

1.7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水溶解成1000mL，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH=7.5）－乙腈（65: 35）為流動(dòng)相；檢測波長為214nm。理論塔板數(shù)按克林霉素峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 000。

1.7.2 測定方法

取本品，用流動(dòng)相制成每1 mL中含10.0mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋制成每 1mL中含0.4mg的溶液，作為對照品溶液。取對照溶液10μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度。使主成分峰的峰高約為記錄儀滿量程的10%；再精密量取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中，以克林霉素主峰相對保留時(shí)間為1計(jì)，林可霉素相對保留時(shí)間為0.17，克林霉素B相對保留時(shí)間為0.53；差向克林霉素的相對保留時(shí)間為0.72。林可霉素峰面積占總峰（除溶劑及輔料峰外）面積的百分含量不得過 5.0%；克林霉素B不得過2.0%，差向克林霉素不得過1.0%，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2.5倍（10.0%）。

2 結(jié)果和分析

2.1 抗氧劑的選擇結(jié)果

表1 處方中不同抗氧劑及用量的篩選

試驗(yàn)結(jié)果表明，選擇0.02g EDTA-2Na作為抗氧劑，克林霉素相對含量下降最小，并且鹽酸克林霉素注射液的外觀澄清無色，符合規(guī)定，因此制備工藝中可選用 EDTA-2Na作為抗氧劑，用量0.02g。

2.2 pH值范圍的篩選結(jié)果

由表2可見，pH>5.0時(shí)樣品含量下降較大，溶液出現(xiàn)沉淀，pH值低時(shí)樣品較穩(wěn)定，但 pH值過低時(shí)對肌體的刺激性較大，因此工藝中選擇pH值在4.0~4.5范圍內(nèi)。

表2 不同pH條件下樣品的熱穩(wěn)定性考察

2.3 活性炭脫色條件的選擇結(jié)果

表3 活性碳在不同pH值的注射液中對含量的影響

由表3可見，不同pH值對溶液顏色略有影響，pH為4.0時(shí)，含量下降最小，外觀符合規(guī)定，因此制備工藝中可選用pH值4.0時(shí)，加入活性碳脫色。

2.4 活性炭用量的選擇結(jié)果

表4 活性炭用量的篩選

由表4可見，活性炭用量為0.2%時(shí)，脫色后外觀無色澄清，含量下降不明顯，因此工藝中選擇活性炭用量為0.2%。

2.5 滅菌條件的選擇結(jié)果

表5 注射液滅菌條件的選擇

由表5可見，滅菌條件不同對樣品的含量和外觀影響很大，綜合比較四種不同的滅菌方式，流通蒸氣滅菌 115℃30min克林霉素相對含量及pH值下降最小，有關(guān)物質(zhì)量增加最少，因此選擇滅菌條件為流通蒸氣115℃ 30min。

3 討論

鹽酸克林霉素是一種半合成抗生素，其鹽酸鹽易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚，化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定。但其水溶液的穩(wěn)定性略差，結(jié)構(gòu)中的硫苷鍵在酸性或金屬作用下極易發(fā)生水解，從而影響藥液的穩(wěn)定性。因此注射劑中應(yīng)加入適量抗氧劑，以提高注射劑的穩(wěn)定性；加入氯化鈉調(diào)節(jié)藥液等滲，減少注射液對血管的刺激性；加入檸檬酸調(diào)節(jié)注射液的pH值，保證其長期放置的穩(wěn)定性。

在國家食品藥品監(jiān)督管理局制定的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中，鹽酸克林霉素注射液的性狀應(yīng)為無色或幾乎無色的澄清液體。另外，在對該藥品進(jìn)行各項(xiàng)研究時(shí)，都應(yīng)該保證使藥品當(dāng)中的克林霉素的相對含量不會下降太多。綜合以上兩點(diǎn)，在進(jìn)行抗氧劑篩選及相關(guān)指標(biāo)優(yōu)化時(shí)，主要從克林霉素相對含量下降情況和注射液外觀是否澄清無色兩個(gè)方面來考慮。在所進(jìn)行的五項(xiàng)試驗(yàn)當(dāng)中，最終選擇的結(jié)果都能保證注射液的澄清無色，克林霉素的相對含量下降最少。

4 結(jié)論

EDTA-2Na作為鹽酸克林霉素注射液的抗氧劑較好。pH4.0時(shí)加入0.2%活性炭進(jìn)行脫色；選擇流通蒸氣115℃進(jìn)行滅菌30min是比較優(yōu)化的生產(chǎn)工藝指標(biāo)。