邱 娟

(廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣州 510160)

沙利度胺(thalidomide)化學(xué)名為N－(2，6－二氧代－3－哌啶基)－鄰苯二甲酰亞胺，為谷氨酸衍生物，最早作為鎮(zhèn)靜藥和鎮(zhèn)痛藥，主要用于治療妊娠惡心、嘔吐，后因其嚴(yán)重的致畸和神經(jīng)毒性副作用而退出市場(chǎng)。隨后，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺與抗麻風(fēng)病藥同用可以減少麻風(fēng)反應(yīng)［1］，治療各型麻風(fēng)反應(yīng)，如結(jié)節(jié)性紅斑，并且對(duì)HIV感染、腫瘤引起的惡液質(zhì)、卡伯氏肉瘤、口腔潰瘍以及慢性移植物抗宿主反應(yīng)病等有療效［2，3］。國內(nèi)未見有文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)沙利度胺片含量的分析方法。本文建立了高效液相色譜法用于該藥片劑的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(tǒng)，2695型液相色譜泵，2996型DAD檢測(cè)器，Millennium工作站。沙利度胺對(duì)照品(中國藥品生物檢定所，批號(hào)100504－200501)。樣品沙利度胺片(常州制藥廠有限公司，批號(hào)分別為0710081、07122714、0710091)，空白輔料(常州制藥廠有限公司提供);乙腈(美國 Merck公司產(chǎn)品，色譜純);磷酸為分析純;水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為 Waters Nova－Pak C18柱(150 mm ×3.9 mm，4 μm);流動(dòng)相為水 －乙腈 －磷酸(85∶15∶0.1)，檢測(cè)波長:237 nm，流速 2.0 ml/min;柱溫 40 ℃，進(jìn)樣量 20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取沙利度胺對(duì)照品適量，精密稱定，用乙腈制成1 mg/ml的溶液，精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加入磷酸溶液(1→100)10 ml，加水定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取稱本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于沙利度胺0.1 g)，精密稱定，置100 ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml置100 ml量瓶中，加入磷酸溶液(1→100)10 ml，加水定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液的制備 取不含沙利度胺的空白輔料約 0.3 g，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備空白輔料溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液，分別進(jìn)樣20 μl，以“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，輔料對(duì)沙利度胺峰無干擾。見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取沙利度胺100 mg置100 ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，作為貯備液。分別精密吸取貯備液 1、5、8、10、12 和 15 ml置同一100 ml量瓶中，加10 ml磷酸溶液(1→100)，加水定容至刻度，作為線性溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取線性溶液20 μl進(jìn)行測(cè)定。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得沙利度胺回歸方程:A=4.70 ×104C －5.73 ×104(r=1.000)，線性范圍為 10.055 ～150.825 μg/ml。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)及空白輔料(C)HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.4”項(xiàng)下制備的貯備液10 ml置100 ml量瓶中，加10 ml磷酸溶液(1→100)，加水定容至刻度，作為對(duì)照品溶液。依“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取20 μl進(jìn)行測(cè)定，得沙利度胺峰面積的RSD為0.1%(n=6)，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(批號(hào)0710081)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液共6 份，依“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，取20 μl進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得沙利度胺平均含量為99.34%，RSD為0.3%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將供試品溶液分別在室溫分別間隔0、2、4、6、10、14、20 和24 h 測(cè)定，結(jié)果沙利度胺峰面積的 RSD為0.1%，表明沙利度胺在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 定量限和檢出限 按S/N=10計(jì)算沙利度胺的定量限為1.3 ng，按S/N=3計(jì)算沙利度胺的檢出限為0.4 ng。

2.9 回收率測(cè)定 精密稱取沙利度胺對(duì)照品與空白輔料按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制成 80%、100%、120%3個(gè)濃度水平各3份樣品，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.7%，RSD為0.3%，見表 1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 含量測(cè)定結(jié)果 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備3批樣品，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定樣品含量。結(jié)果分別為 99.6%、102.0%、102.3%。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究為2010年版《中國藥典》修訂工作。此前國外藥典未有收載沙利度胺片含量測(cè)定方法，僅國家藥品標(biāo)準(zhǔn)有所收載，采用的是氮測(cè)定法，方法繁瑣費(fèi)時(shí)，工作量較大。也有文獻(xiàn)報(bào)道采用水解法測(cè)定沙利度胺原料及膠囊的含量［4，5］。本實(shí)驗(yàn)比較了高效液相色譜法和氮測(cè)定法，3批樣品未有明顯差異，測(cè)定結(jié)果表明HPLC法是一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的分析方法，能夠有效控制沙利度胺片的質(zhì)量。

1 梁銳，田耀文.沙利度胺治療反復(fù)發(fā)生性麻風(fēng)結(jié)節(jié)性紅斑反應(yīng)的療效觀察.地方病通報(bào)，2009，24(6):117

2 徐浩翔.沙利度胺在皮膚科的應(yīng)用進(jìn)展.中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2009，25(11):829

3 陳金月.沙利度胺的藥理作用與研究進(jìn)展.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，23(3):177

4 陳新善，聶渝瓊，宋奕，等.不經(jīng)消化氮測(cè)定沙利度胺的含量.中國病案，2003，4(2):43

5 劉海英，陳新善，王秀琴.水解法測(cè)定沙利度胺膠囊的含量.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，19(6):475