李倚云，王 威，聞琍毓

(江蘇省揚州藥品檢驗所，揚州 225009)

洛美沙星屬中長效第三代喹諾酮類合成抗菌藥，臨床用于治療敏感細菌引起的呼吸道、泌尿生殖系統(tǒng)、胃腸道、皮膚軟組織等感染，其半衰期長，療效確切，得到廣泛應用。國內(nèi)現(xiàn)行鹽酸洛美沙星氯化鈉注射液標準為國家食品藥品監(jiān)督管理局單頁標準，且不同企業(yè)、不同規(guī)格標準不同。用高效液相色譜法測定含量的標準中存在流動相組成各不相同、比例各有不同且流動相含鹽量較高等問題，部分單頁標準在含量測定中仍采用專屬性不強的紫外分光光度法［1－4］。為完善和統(tǒng)一質量標準，筆者參照《中國藥典》2010年版鹽酸洛美沙星含量測定方法［5］，建立一種專屬性強且統(tǒng)一的HPLC含量測定方法，并用統(tǒng)計學方法對12批樣品進行了現(xiàn)方法和原標準方法含量測定結果的比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC－20AB HPLC色譜儀，SHIMADZU SPD－20A紫外檢測器，SHIMADZU LC solution色譜工作站。色譜柱:菲羅門Gemini－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Inertsil－ C18(150 mm × 4.6 mm，5 μm)、Waters Symmetry－ C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)。

1.2 試藥 洛美沙星對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號130452－200902，含量90.3%)，戊烷磺酸鈉(日本進口);磷酸二氫銨、磷酸、一水合檸檬酸(國藥集團化學試劑有限公司)為分析純;甲醇、乙腈(Dikma公司)為色譜純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 取洛美沙星對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1 ml中約含洛美沙星0.1 mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 精密量取本品適量，加流動相定量稀釋制成每1 ml中約含洛美沙星0.1 mg的溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液 按處方配比，取除洛美沙星外的其他組分，按“2.1.2”項下供試品溶液中的組分濃度制得陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5 g，磷酸二氫銨 3.5 g，加水 950 ml使溶解，用磷酸調節(jié)pH值至3.0，用水稀釋至1 000 ml)－甲醇(65∶35)為流動相，檢測波長為287 nm。取洛美沙星對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 ml中約含1.0 mg的溶液，水浴加熱60 min，冷卻，取此液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，與主成分峰相對保留時間分別約0.8和1.1處應能檢測到雜質峰，且洛美沙星峰與兩雜質峰的分離度均應符合要求。

取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進行分析，結果表明樣品中其他成分對洛美沙星的測定無干擾，見圖1。

圖1 對照品(A)供試品(B)及陰性樣品(C)HPLC色譜圖

2.3 線性范圍 取洛美沙星對照品適量，精密稱定55.23 mg置100 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，分別精密量取0.5、1、3、5、7、9 和10 ml置 25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度。分別精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以洛美沙星的峰面積A(×106)對其濃度C(μg/ml)進行線性回歸，回歸方程為 A=0.132 6 C+0.036 5(R2=1.000 0)，結果表明在10.0 ～199.5 μg/ml范圍內(nèi)，洛美沙星色譜峰峰面積與其濃度成良好線性關系。

2.4 精密度試驗 取同一批號樣品，按“2.1.2”項下方法制備溶液1份，在上述色譜條件下連續(xù)進樣5次，洛美沙星色譜峰峰面積的RSD為0.28%(n=5)。

2.5 重復性試驗 取同一批號樣品，按“2.1.2”項下方法制備溶液6份，在上述色譜條件下進行測定，結果洛美沙星平均含量為98.23%，RSD為1.0%(n=6)。結果表明方法的重復性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批號樣品，按“2.1.2”項下方法制備溶液1 份，室溫放置，分別于0、1、2、3、5、6、7、8、10和11 h，按上述色譜條件分析，洛美沙星峰面積的RSD為0.1%(n=10)。結果表明，供試品溶液室溫放置11 h內(nèi)測定穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 取洛美沙星對照品適量，精密稱定，按處方配比加流動相稀釋制成含洛美沙星約為0.08、0.10 和 0.12 mg/ml的溶液各 3 份，按上述色譜條件分析，計算回收率，結果平均回收率為100.11%，RSD 為0.51%，見表1。

表1 回收率試驗結果

2.8 樣品測定

2.8.1 不同企業(yè)不同規(guī)格樣品含量測定 取12批鹽酸洛美沙星氯化鈉注射液，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，精密量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取洛美沙星對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算出供試品中洛美沙星的含量，結果見表2。

2.8.2 新方法和原標準測定結果比較 分別采用新方法和原標準方法進行含量測定，測定結果用方差分析方法進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，F(xiàn)值為0.036 9，P值為0.849 5(自由度為23)，結果表明，兩種方法統(tǒng)計結果差異無顯著性意義，說明兩種含量測定方法無差異。結果見表2和表3。

表2 樣品含量測定結果

表2 新建立方法和原標準對含量測定結果的統(tǒng)計分析

表3 方差分析

3 討論

3.1 流動相的選擇 《中國藥典》2010年版二部收載了鹽酸洛美沙星原料和鹽酸洛美沙星片、鹽酸洛美沙星膠囊兩種劑型，其中含量測定采用高效液相色譜法，以戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5 g，磷酸二氫銨3.5 g，加水 950 ml使溶解，用磷酸調節(jié) pH 值至 3.0，用水稀釋至1 000 ml)－甲醇(65∶35)為流動相，洛美沙星色譜峰柱效高、峰型好。而原標準中A企業(yè)采用高效液相色譜法測定含量方法為0.05 mol/L枸櫞酸溶液(用三乙胺調節(jié)pH值至4.0)－乙腈(87∶13)為流動相，其中枸櫞酸比例高，易造成色譜柱堵塞并影響儀器壽命。B企業(yè)采用紫外分光光度法測定含量，專屬性差。本試驗參照《中國藥典》2010年版二部，選用了此流動相，以利于統(tǒng)一含量測定方法。同時還做了系統(tǒng)適用性實驗研究，保證洛美沙星峰與兩主要雜質峰的分離度符合要求，使得含量測定方法更加科學和完善。

3.2 方法耐用性 試驗中參照《中國藥典》2010年版二部，選取不同的色譜柱菲羅門 Gemini－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Inertsil－ C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)和 Waters Symmetry － C18(150 mm × 4.6 mm，5 μm)，取洛美沙星系統(tǒng)適用性條件測試溶液。結果表明:與洛美沙星峰相對保留時間分別約0.8和1.1處能檢測到雜質峰，且洛美沙星峰與兩雜質峰的分離度均符合要求。用統(tǒng)計學方法對12批樣品進行了兩種含量測定方法結果的比較，證明兩種方法統(tǒng)計結果差異無顯著性意義，說明兩種含量測定方法無差異。

1 中國藥典.二部.2010:758

2 谷杰，初文英，李鐵軍，等.高效液相色譜法測定鹽酸洛美沙星葡萄糖注射液的含量.中國藥學雜志，1997，32(4):234

3 王銀蘭，李曉玲，楊潔，等.反相高效液相色譜法分析注射用鹽酸洛美沙星.寧夏醫(yī)學院學報，2008，30(2):251

4 黃衛(wèi)平.RP－HPLC法測定鹽酸洛美沙星及其雜質的含量.西北藥學雜志，1998，13(2):51

5 楊青，郭炎榮.RP－HPLC法測定鹽酸洛美沙星滴眼液的含量.中國實驗方劑學雜志，2009，15(4):24