天津市靜海縣藥品檢驗(yàn)所（301600）錢(qián)穎

清肺合劑是天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由黃芩、魚(yú)腥草、麻黃、桔梗、苦杏仁等12味中藥組成，具有清肺化痰，止咳平喘的功效。為了控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全有效，筆者對(duì)清肺合劑的質(zhì)量進(jìn)行了研究，黃芩為該方的君藥，其主要有效成分為黃芩苷。本文采用高效液相色譜法對(duì)黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－2010AHT（日本島津公司）UV－2401紫外分光光度計(jì)。黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所批號(hào)110715－200512）。

1.2 試藥 清肺合劑（天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，批號(hào)080212、080903、081103、080510），甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品11.71mg置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精取5ml至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 精密量取5ml置100ml容量瓶中，加甲醇超聲10分鐘，放置至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，精取3ml置50ml容量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 取對(duì)照品的甲醇溶液在251～320nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在314nm、311nm、277nm處分別有最大吸收，在277nm波長(zhǎng)處吸光度更靈敏，吸光值更大，故選277nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱DM C185μ 250×4.6mm，流動(dòng)相乙腈－0.25%磷酸（24:76），流速1ml/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量20ul。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于4000。

2.5 空白試驗(yàn) 按處方取除黃芩的各味藥材，制得樣品，按2.2供試品溶液的制備方法，制得陰性空白對(duì)照溶液。結(jié)果表明，空白樣品色譜中，在與黃芩苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸?。?.38mg黃芩苷對(duì)照品→甲醇100ml精取3ml→100ml）對(duì)照品溶液5μl、7μl、10μl、15μl、20μl，按2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積(A)與進(jìn)樣量(C)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣的對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程A=63438C-106（r=0.99999，n=5）表明黃芩苷進(jìn)樣量在0.0807μg～0.4035μg內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，見(jiàn)附表1。

2.7 精密度試驗(yàn)精密吸取2.1項(xiàng)下得對(duì)照品溶液20μl，按2.4項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得黃芩苷峰面積平均值為756638，峰面積RSD為0.3%，見(jiàn)附表2。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)精密吸取同一批號(hào)080212的樣品5份，按2.2方法制備，分別進(jìn)樣20μl。按2.4項(xiàng)下色譜條件分析。測(cè)定每份樣品中黃芩苷峰面積（見(jiàn)附表3）均值為611850，RSD為0.7%，重現(xiàn)性良好。

附表1 線(xiàn)性關(guān)系考察

附表2 精密度試驗(yàn)

附表3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(080212)樣品按2.2項(xiàng)下方法制備，按2.4項(xiàng)下色譜條件分析，分別在0、1、3、4、8、12、24小時(shí)，測(cè)定樣品中黃芩苷峰面積（見(jiàn)附表4）RSD為0.2%，供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品(080212)精密量取9份，每份3ml，分別加入一定量的黃芩苷對(duì)照品，再分別置50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

2.11 樣品測(cè)定 取4個(gè)批號(hào)的樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備，按2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定樣品中黃芩苷含量，批號(hào)080903、081103、080212、080510的含量依次為4.30、4.21、4.15、4.17mg/ml。

附表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

附表5 回收率試驗(yàn)

3 討論

本品采用甲醇－水－磷酸(47:53:0.2)，乙腈－0.1%磷酸(26:74)，乙腈－0.25%磷酸(24:76)流動(dòng)相進(jìn)行比較。結(jié)果認(rèn)為乙腈－0.25%磷酸(24:76)分離效果好，峰形對(duì)稱(chēng)，保留時(shí)間合適。以甲醇與50%甲醇超聲0'、10'、20'、30'結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇作為溶媒比50%甲醇作為溶媒，雜質(zhì)峰少。10'與20'、30'相比較，無(wú)太大區(qū)別，為節(jié)省時(shí)間，故選用甲醇超聲10'。本試驗(yàn)結(jié)果可靠，方法簡(jiǎn)單易行，可作為清肺合劑的質(zhì)量控制方法。