王 華，王 莉，馬金秋

(山東省秦皇島市第一醫(yī)院，山東 秦皇島 066000)

偏正顆粒的提取工藝優(yōu)選及其急性毒性試驗(yàn)

王 華，王 莉，馬金秋

(山東省秦皇島市第一醫(yī)院，山東 秦皇島 066000)

目的 優(yōu)選偏正顆粒的提取工藝并考察其醇沉工藝，觀察偏正顆粒的急性毒性反應(yīng)。方法 以歐前胡素含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選偏正顆粒的提取工藝;通過對(duì)小鼠灌胃給藥，觀察偏正顆粒對(duì)小鼠的毒性反應(yīng)。結(jié)果 優(yōu)化的提取工藝為加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h，并選用50%的乙醇沉淀;將因偏正顆粒的毒性反應(yīng)出現(xiàn)死亡的動(dòng)物解剖，未見明顯病理改變。結(jié)論 優(yōu)選的工藝合理、可行。偏正顆粒在規(guī)定劑量下使用安全。

偏正顆粒;正交試驗(yàn);歐前胡素;急性毒性試驗(yàn)

偏正顆粒是醫(yī)院自制的中藥制劑，批準(zhǔn)文號(hào)為秦藥劑字[2001]普－01－020號(hào)，處方系我院臨床應(yīng)用多年的協(xié)定處方，由白芷、川芎、細(xì)辛、蒼耳子、元胡、罌粟殼、天麻、菊花等藥材組方，具有除濕散寒、行氣活血的作用，用于治療風(fēng)濕或寒濕所致的偏頭痛及頭痛，效果比較理想。筆者對(duì)偏正顆粒的提取和醇沉工藝進(jìn)行了考察，以方中君藥白芷有效成分歐前胡素含量為指標(biāo)進(jìn)行L9(34)試驗(yàn)[1]，篩選了偏正顆粒的最佳提取純化工藝;又因方中制草烏為藥典中收錄的毒性藥材，故對(duì)其進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器、試藥與動(dòng)物

Agilent高效液相色譜儀;23200型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);124型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。歐前胡素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為826－9904);甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純;偏正顆粒(秦皇島市第一醫(yī)院制劑中心提供，規(guī)格為8 g/包)。昆明種小白鼠(河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為DK0412－0115)，實(shí)驗(yàn)室溫度為(22±2)℃，相對(duì)濕度60±2)%，試驗(yàn)觀察期間飼以該中心提供的固體飼料，自由飲水。

2 方法與結(jié)果

2.1 水提取工藝優(yōu)選

2.1.1 因素水平

為有效提取藥材，經(jīng)過初步考察，選取了對(duì)提取物收率影響較大的浸泡時(shí)間(因素A)、加水量(因素B)、提取時(shí)間(因素C)、提取次數(shù)(因素D)作為考察因素，藥材適當(dāng)粉碎，以歐前胡素含量為考察指標(biāo)，按表1水平以L9(34)表進(jìn)行試驗(yàn)。

表1 水提取工藝正交試驗(yàn)因素水平表

2.1.2 正交試驗(yàn)

提取液制備按處方比例稱取所有藥材111 g，共9份，適當(dāng)碎段，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，加水煎煮提取，提取液濃縮至約80 mL，移至100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

歐前胡素含量測(cè)定:精密吸取上述提取液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液;取歐前胡素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含15 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水(62∶38)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為310 nm，理論板數(shù)按歐前胡素峰計(jì)算不低于1 000。吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，分別用高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算歐前胡素含量。

正交試驗(yàn)結(jié)果:見表2及見表3?？梢姡詺W前胡素含量為考察指標(biāo)，因素影響大小依次為提取次數(shù)、加水量、提取時(shí)間、浸泡時(shí)間，最佳工藝為A2B2C2D1，即加入6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。

表2 水提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

2.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方稱取藥材3份，分別按選定的最佳工藝進(jìn)行提取，結(jié)果歐前胡素含量分別為 12.81，12.78，12.76 mg/g?？梢姡凑兆罴阉崛」に囘M(jìn)行提取，歐前胡素的含量最高。

表3 方差分析結(jié)果表

2.2 醇沉工藝考察

通過查閱資料并結(jié)合工作中的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)全方水提浸膏容易吸潮，且不容易制粒，必須加輔料以降低黏性和吸濕性，但會(huì)導(dǎo)致服用藥量較多，故應(yīng)對(duì)水提液進(jìn)行醇沉。按處方比例稱取所有藥材共412 g，酌情碎斷，按最佳水提工藝加水煎煮提取，提取液濃縮至相對(duì)密度1.04～1.05(70℃)，分成4等份，其中3份分別加95%乙醇至醇體積分?jǐn)?shù)40%，50%，60%，充分?jǐn)嚢?，?℃以下冰箱中24 h，過濾，濃縮至約450 mL，用水定容至500 mL量瓶中。按2.1.2項(xiàng)下歐前胡素測(cè)定含量。結(jié)果乙醇體積分?jǐn)?shù)為0，40%，50%，60% 時(shí)歐前胡素含量分別為 9.62，9.60，9.58，8.26 mg/g?？梢姡汲翆?duì)歐前胡素的含量有影響，但影響不是很大，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)歐前胡素含量降低較少，且溶液較澄清。故選用50%的乙醇沉淀，即于水提取液中加入2倍量95%乙醇。

2.3 急性毒性試驗(yàn)[2]

采用灌胃針給小鼠喂藥，給藥后立即計(jì)時(shí)，詳細(xì)觀察動(dòng)物給藥后反應(yīng)，記錄癥狀出現(xiàn)或死亡時(shí)間和出現(xiàn)反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)量。

取小鼠5只。取偏正顆粒35 g，加水研磨至50 mL，配成70%的混懸液，按每10 g體重0.4 mL給小鼠灌胃，間隔2 h再給藥1次，共給藥2次。第2次給藥后約40 min，有2只小鼠死亡，尸檢僅見胃腸充盈，余未見異常。觀察7 d，未再有小鼠死亡。給藥量為56 g/kg，約為人臨床劑量的207倍。

取小鼠20只，雌雄各半，體重18～22 g。取70%的偏正顆?；鞈乙?5 mL，加水稀釋至53 mL，配成59%混懸液，按每10 g體重0.4 mL給小鼠灌胃，間隔2 h再給藥1次，共給藥2次，觀察7 d。結(jié)果除見小鼠活動(dòng)減少外，小鼠飲食、大小便、行為活動(dòng)等未見異常，未見死亡發(fā)生。給藥前雄性小鼠體重(20.9±1.3)g，7 d后(28.1±1.7)g;給藥前雌性小鼠體重(19.7±1.2)g，7 d 后體重(26.9 ±2.0)g。給藥量為 47 g/kg，約為人臨床劑量的 174 倍。

3 討論

正交試驗(yàn)結(jié)果表明，偏正顆粒的最佳提取工藝為白芷、川芎、細(xì)辛等8味藥材加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。并對(duì)其水溶液選用50%的乙醇進(jìn)行沉淀后過濾。驗(yàn)證試驗(yàn)也表明，該工藝條件合理、有效成分含量較高，穩(wěn)定可行。

偏正顆粒的臨床給藥劑量為2次/d、每次8 g，即0.32 g/kg體重。小鼠急性毒性試驗(yàn)表明，小鼠的最大耐受量為47 g/kg，約為人臨床劑量的174倍。提示偏正顆粒在規(guī)定劑量下服用安全。

[1]楊宏建，肖美鳳，袁 麗，等.正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選三棵針中小檗堿的提取工藝[J].中國(guó)藥師，2005，8(12):673－675.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:203.

Study on Extraction Technology of Pianzheng Granules and Acute Toxicity Test

Wang Hua， Wang Li， Ma Jinqiu
(No.1 Hospital of Qinhuangdao City， Qinhuangdao， Hebei， China 066000)

Objective To optimize the extraction process and condition of Pianzheng Granules and to investigate the alcohol precipitation echnology and the acute toxic reactions of Pianzheng Granules.Methods The extracting technology for Pianzheng Granules was optimized by orthogonal design with the imperatorin content as index.Mice were given the drug by gavage and their acute toxic reactions were observed.Results The optimum extraction conditions were adding 6 times amount of water，soaking for 1 h and decocting twice，1 h for each ime and selecting 50% ethanol for precipitation.The obvious pathologic changes were not observed in the dead animal.Conclusion The optimized extracting technology of Pianzheng Granules is rational and feasible.Pianzheng Granules is safe and reliable in regulated doses.

Pianzheng Granules;orthogonal design;imperatorin;acute toxicity

TQ461;R285.5

A

1006－4931(2011)04－0045－02

2010－03－11;

2010－08－13)

王華，女，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作，(電話)0335－5908035(電子信箱)yyyf6285@sina.com。