任江劍，俞旭平，張斌，王志安

(1.浙江省中藥研究所，浙江 杭州 310023；2.正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310023)

不同種源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比較△

任江劍1*，俞旭平1，張斌2，王志安1

(1.浙江省中藥研究所，浙江 杭州 310023；2.正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310023)

目的：比較21個(gè)不同種源薏苡仁中甘油三油酸酯含量。方法：采用HPLC-ELSD法，色譜柱為Discovery C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-二氯甲烷(66∶34)，流速為0.7 mL·min-1，柱溫為30 ℃；采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度為45 ℃；氮?dú)饬魉贋?.5 L·min-1。結(jié)果：21個(gè)不同種源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量都符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)，含量最高是種子來(lái)自福建三明寧化的粳性薏苡仁，為0.793 %；含量最低是種子來(lái)自浙江縉云的薏苡仁，為0.561 %。結(jié)論：21個(gè)不同種源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差異，種子來(lái)自同一地區(qū)的薏苡仁中甘油三油酸酯含量也有一些差異。

薏苡仁；甘油三油酸酯；種源；HPLC-ELSD法

薏苡仁為禾本科植物薏苡Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟種仁，具有利水滲濕，健脾止瀉，除痹，排膿，解毒散結(jié)。常用于水腫，腳氣，小便不利，脾虛泄瀉，濕痹拘攣，肺癰，腸癰，贅疣，癌腫[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，薏苡仁油具有抗腫瘤和提高機(jī)體免疫力的作用，據(jù)研究表明，薏苡仁的中性油脂顯示抗腫瘤活性，薏苡仁中性油酯以三酰甘油為主要成分[2]?！吨袊?guó)藥典》(一部)2010年版中薏苡仁含量測(cè)定采用高效液相法，以蒸發(fā)光散射儀為檢測(cè)器，甘油三油酸酯作為指標(biāo)來(lái)控制薏苡仁質(zhì)量。我國(guó)的薏苡資源極為豐富多樣，栽培歷史悠久，廣泛分布于南北各省，很多地區(qū)也有種植。本文共收集了21個(gè)不同地方的薏苡種子，其中浙江省9個(gè)，福建省7個(gè)，貴州省2個(gè)，湖北省1個(gè)，廣西省1個(gè)，四川省1個(gè)，在浙江種植，采用相同的種植方法，薏苡采收后脫殼，采用高效液相法測(cè)定了收獲的不同種源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量。

1 材料與儀器

1.1 材料

甘油三油酸酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111692-200501)，21個(gè)不同地方薏苡種子，其中浙江省9個(gè)，福建省7個(gè)，貴州省2個(gè)，湖北省1個(gè)，廣西省1個(gè)，四川省1個(gè)，具體見(jiàn)表1，經(jīng)浙江省中藥研究所俞旭平教授級(jí)高級(jí)工程師鑒定為薏苡Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟種仁，21個(gè)不同地方薏苡種子于2008年5月統(tǒng)一種植在浙江省泰順縣仕陽(yáng)鎮(zhèn)，采用相同的種植方法，2008年底待薏苡成熟時(shí)收獲，曬干后脫殼，得薏苡仁，備用。

表1 21份薏苡種子來(lái)源

1.2 儀器

Agilent 1100系列高效液相色譜儀及Agilent化學(xué)工作站，美國(guó)Alltech 3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀，KQ-100DB型數(shù)控超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn))。

1.3 試劑

高效液相檢測(cè)用乙腈、二氯甲烷為色譜純，提取用乙腈和二氯甲烷為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：美國(guó)Supelco Discovery C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-二氯甲烷(66∶34)；流速：0.7 mL·min-1；檢測(cè)器：Alltech 3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)儀器；柱溫：30 ℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度45 ℃，氮?dú)饬魉?.5 L·min-1。進(jìn)樣量：10 μL。甘油三油酸酯對(duì)照品和薏苡仁色譜圖見(jiàn)圖1、2。

1.甘油三油酸酯峰圖1 甘油三油酸酯對(duì)照品HPLC圖

1.甘油三油酸酯峰圖2 薏苡仁HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取甘油三油酸酯對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成0.142 2 mg·mL-1的對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.3 供試品溶液制備

取樣品粉末約0.6 g(過(guò)三號(hào)篩)，精密稱定，精密加入流動(dòng)相50 mL，稱定重量，浸泡2 h，超聲處理30 min，取出，放冷，稱定重量，加流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取上述對(duì)照品溶液3，5，7，10，15，20，25 μL，分別注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程Y=1 263.17X-561.56，r=0.993 5。結(jié)果表明甘油三油酸酯在0.426 6～3.55 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果平均峰面積為1 106.12，RSD=0.78 %(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，依上述色譜條件，分別于0，3，5，7，28 h各進(jìn)樣10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果峰面積RSD=1.86 %(n=5)，表明供試品溶液在室溫下28 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別取同一批薏苡仁樣品(浙江泰順劉宅村)6份，每份約0.6 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，照上述色譜條件各進(jìn)樣10 μL測(cè)定，結(jié)果薏苡仁中甘油三油酸酯平均含量為0.595 %，RSD=1.24 %(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取6份已知含量的供試品約300 mg，精密稱定，分別添加甘油三油酸酯對(duì)照品2.301 mg，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進(jìn)行，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 薏苡仁中甘油三油酸酯回收率試驗(yàn)

注：甘油三油酸酯對(duì)照品加入量均為2.301 mg

2.9 樣品含量測(cè)定

將21個(gè)不同種源的薏苡仁樣品，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，21個(gè)樣品中甘油三油酸酯含量都符合《中國(guó)藥典》2010年版(一部)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差異，含量最高是種子來(lái)自福建三明寧化的粳性薏苡仁，達(dá)到0.793 %，含量最低是種子來(lái)自浙江縉云的薏苡仁，為0.561 %。

表2 不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量 /%

注：n=2

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

參照陳勇等研究結(jié)果[3]，主要考察了乙腈-二氯甲烷流動(dòng)相的不同比例和流速，當(dāng)乙腈-二氯甲烷比例為(65∶35),流速為1 mL·min-1時(shí)，流速快導(dǎo)致基線噪音比較大；流動(dòng)相比例調(diào)整為(59∶41),流速為0.5 mL·min-1時(shí)，基線噪音變小，但出峰比較遲。綜合考慮基線噪音、出峰時(shí)間和分離效果等因素，調(diào)整流動(dòng)相比例為乙腈-二氯甲烷(66∶34)、流速為0.7 mL·min-1時(shí)取得了較好的分離效果，見(jiàn)圖1。

3.2 不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量比較

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：353-354.

[2] 李大鵬，黃潔敏，蘇維埃，等.薏苡仁油脂的化學(xué)成分分析[J].中藥新藥與臨床藥理，1999，10(2)：99-101.

[3] 陳勇，陳碧蓮，何云珍，等.高效液相色譜法測(cè)定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2005，22(3)：246-247.

ComparingofGlycerolTrioleateinSemenCoicisofDifferentProvenances

REN Jiang-jian1，YU Xu-ping1，ZHANG Bin2，WANG Zhi-an1

(1.ZhejiangResearchInstituteofTraditionalChineseMedicine,Hangzhou310023,China；2.ChiataiQingchunbaoPharmaceuticalCo.,LTD,Hangzhou310023,China)

Objective:To compare the content of glycerol trioleate in 21 Semen Coicis of different provenances.Methods: The Discovery C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with mobile phase of acetonitrile-dichloromethanol(66∶34).The mobile phase flow rate was 0.7 mL·min-1. The column temperature was controlled at 30 ℃.The ELSD was used.The tube temperature was 45 ℃, and the flow rate of nitrogen was 1.5 L·min-1.Results: The content of glycerol trioleate in 21 semen coicis of different provenances were in line with Chinese pharmacopeia, and the highest content was japonica Semen Coicis which seeds from Ninghua, Sanming and Fujiang, which was 0.793 %; the lowest content was the sample which seeds from Jinyun and Zhejiang, which was 0.561 %.Conclusion: The content of glycerol trioleate in 21 Semen Coicis of dirrerent provenances is different，and the content of glycerol trioleate in Semen Coicis which seeds from the same area is also different.

Semen Coicis; Glycerol trioleate; Germplasm; Provenances; HPLC-ELSD

國(guó)家科技攻關(guān)計(jì)劃(2004BA721A21)，國(guó)家科技重大專項(xiàng)(2009ZX09308-002)，國(guó)家科技支撐計(jì)劃(201107011)

*任江劍， E-mail：jjren@163.com

2010-09-14)