王際亮，唐玉蓉

(勝利油田中心醫(yī)院，山東 東營(yíng) 257034)

近年來(lái)，通過(guò)檢測(cè)體液中真菌菌體成分或代謝產(chǎn)物來(lái)診斷侵襲性真菌感染的研究較多，其中應(yīng)用較廣泛的是血漿葡聚糖檢測(cè)［1］。2010年5～11月，我們使用鱟試驗(yàn)動(dòng)態(tài)比濁法對(duì)62例確診及疑似侵襲性真菌感染患者血漿葡聚糖進(jìn)行檢測(cè)并分析，以探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期在我院綜合ICU、呼吸內(nèi)科、血液科、腫瘤科住院患者62例(觀察組)，男43例、女19例，年齡13～83歲、平均65歲。經(jīng)培養(yǎng)確診或臨床診斷侵襲性真菌感染32例，其中血液念珠菌感染8例，肺念珠菌感染13例，泌尿道念珠菌感染6例，肺曲霉菌感染5例;疑似感染30例。另取我院健康體檢各項(xiàng)檢查指標(biāo)均正常人員20例為對(duì)照組，男11例、女9例，年齡25～55歲、平均46歲，其性別、年齡與觀察組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法 (1，3)-β-D葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)液、多黏菌素B購(gòu)自Sigma公司，鱟試劑盒購(gòu)自湛江博康海洋生物有限公司，BET-24細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定儀為天津天大天發(fā)科技有限公司產(chǎn)品。血漿葡聚糖檢測(cè)使用鱟試驗(yàn)動(dòng)態(tài)比濁法:①采集1 ml靜脈血加入含有1 ml的Ⅰ號(hào)處理液的無(wú)熱源帶帽試管內(nèi)，3200 r/min離心6 min。②?、僦猩锨逡?.5 ml加0.5 ml的Ⅱ號(hào)處理液混勻，90℃加熱6 min，然后4200 r/min離心6 min。③取0.5 ml②中上清液加同體積的0.1 mg/ml多黏菌素B混勻，37℃水浴15 min。④取0.2 ml③中液體加入0.1 ml鱟試劑，混勻后插入內(nèi)毒素測(cè)定儀進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)測(cè)定管的吸光度值通過(guò)所設(shè)定的閾值(OD=0.02)后，終止反應(yīng)。儀器根據(jù)預(yù)先制做好的標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算出樣本中葡聚糖含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件;計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或t’檢驗(yàn);陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各類感染患者及對(duì)照組血漿葡聚糖含量 血液念珠菌感染、肺念珠菌感染、泌尿道念珠菌感染、肺曲霉菌感染、疑似感染患者及對(duì)照組血漿葡聚糖含量分別為(227.2 ± 129.4)、(160.4 ± 77.8)、(127.8 ±68.1)、(166.4 ±94.1)、(61.2 ±51.1)、(13.2 ±7.8)ng/L。各類感染患者葡聚糖水平均明顯高于對(duì)照組(P均＜0.01)。確診或臨床診斷患者與疑似患者比較差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.01)。

2.2 血漿葡聚糖含量檢測(cè)與真菌培養(yǎng)真菌感染陽(yáng)性率比較 真菌培養(yǎng)及血漿葡聚糖含量測(cè)定(含量大于60 ng/L判為陽(yáng)性)真菌感染陽(yáng)性檢出率比較見(jiàn)表1。顯示兩種方法診斷侵襲性真菌感染的陽(yáng)性率有差異(χ2=4.08，P ＜0.05)，血漿葡聚糖測(cè)定陽(yáng)性率顯著高于真菌培養(yǎng)法。

表1 血漿葡聚糖含量檢測(cè)與真菌培養(yǎng)真菌感染陽(yáng)性率比較(例)

3 討論

真菌細(xì)胞壁由葡聚糖、甘露糖和幾丁質(zhì)等成分組成。其中葡聚糖廣泛存在于除接合菌、隱球菌之外的真菌細(xì)胞壁中，占細(xì)胞壁干重的80% ～90%。其形式以(1，3)-β-D糖苷鍵連接的葡聚糖殘基骨架作為主鏈，分支狀(1，6)-β-D葡聚糖殘基作為側(cè)鏈。細(xì)菌、病毒以及動(dòng)物、人體細(xì)胞中均不含葡聚糖成分。當(dāng)真菌細(xì)胞侵入人體的深部組織后，葡聚糖分解成(1，3)-β-D 葡聚糖和(1，6)-β-D 葡聚糖等代謝產(chǎn)物而釋放進(jìn)入血液和其他體液。葡聚糖可特異性地激活鱟變形細(xì)胞溶解產(chǎn)物中的G因子(一種絲氨酸蛋白酶原)，從而旁路激活鱟試驗(yàn)。國(guó)外學(xué)者基于此法發(fā)現(xiàn)，血清中(1，3)-β-D-葡聚糖的檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染的診斷有重要價(jià)值［2］，為早期快速確診侵襲性真菌感染提供了有力證據(jù)。呂沛華等［3］通過(guò)感染動(dòng)物模型的制作研究表明，淺表真菌感染或真菌定植時(shí)血漿葡聚糖水平通常不會(huì)升高。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究也表明，血漿葡聚糖的檢測(cè)用于侵襲性真菌感染的早期診斷明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和血清學(xué)診斷試驗(yàn)［4，5］。本研究結(jié)果顯示，各類感染者葡聚糖水平明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.01)，確診和臨床診斷各組也高于疑似患者(P＜0.01)。因此血漿葡聚糖的檢測(cè)可做為診斷侵襲性真菌感染的一個(gè)有意義的指標(biāo)。

在疑似患者培養(yǎng)陰性的30例標(biāo)本中有10例葡聚糖陽(yáng)性。在觀察的所有患者中，真菌培養(yǎng)法陽(yáng)性率為51.6%，葡聚糖陽(yáng)性率為64.5%，后者明顯高于前者。真菌培養(yǎng)法一般需要幾天才能發(fā)出報(bào)告，而血漿葡聚糖檢測(cè)只需1 h左右就能得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提高診斷效率、及時(shí)觀察病情和評(píng)價(jià)抗真菌藥物的治療效果［6］。然而，盡管臨床研究已顯示血漿葡聚糖檢測(cè)是診斷侵襲性真菌感染的有效指標(biāo)，但是目前有很多研究也證實(shí)在某些物質(zhì)中存在葡聚糖類似物，可造成檢測(cè)的假陽(yáng)性結(jié)果［7］。因此，葡聚糖的檢測(cè)結(jié)果需結(jié)合患者的情況綜合判斷以提高診斷的準(zhǔn)確性。

［1］李軍，席麗艷.深部真菌抗原成分及代謝產(chǎn)物在系統(tǒng)性深部真菌感染診斷方面的應(yīng)用進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué):皮膚性病學(xué)分冊(cè)，2004，30(4):253-255.

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