孫智勇

（附屬菏澤市立醫(yī)院，山東 菏澤 274031）

在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，血管的生成起著重要的作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種公認(rèn)的最重要和最強(qiáng)的促血管生成因子，在多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。而腫瘤微血管密度（microvessel density，MVD）作為腫瘤微血管形成的標(biāo)志，可直接反映腫瘤血管生成的程度。為此，我們采用免疫組織化學(xué)法研究膽管癌中VEGF和MVD的表達(dá)情況，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取膽管癌根治切除術(shù)后存檔蠟塊51例，均經(jīng)病理檢查證實(shí)為膽管癌。其中男37例，女14例；年齡35～74歲，平均56.1歲。按組織分化程度分類，高分化10例，中分化25例，低分化16例；按癌組織類型分類，膽管腺癌48例，黏液腺癌1例，黏液細(xì)胞癌1例，鱗癌1例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。取10例 膽管結(jié)石伴膽管下端狹窄做膽腸Roux-Y吻合術(shù)患者的膽管組織作為對(duì)照，均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)無(wú)癌變。

1.2 試劑 鼠抗人VEGF單克隆抗體，鼠抗人CD34單 克隆抗體，即用型免疫組織化學(xué)超敏VltrasensitiveTMS-P試劑盒。以上產(chǎn)品均購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均用10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片3張，厚度4 μm。采用VltrasensitiveTMS-P免疫組化染色法，檢測(cè)膽管癌組織中VEGF和MVD的表達(dá)情況，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。磷酸鹽緩沖液代替一抗進(jìn)行陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷

1.4.1 VEGF表達(dá)以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞10%定為陽(yáng)性表達(dá)，≤10% 為陰性表達(dá)。

1.4.2 MVD表達(dá) 采用Weidner等[1]的校正技術(shù)，以任何一個(gè)棕色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢作為一個(gè)血管。先在低倍鏡下觀察切片全部視野，找到腫瘤血管密度最高區(qū)域，再在高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè) 視野的微血管數(shù)，取其平均值作為該例腫瘤的MVD。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所獲數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 VEGF和MVD在膽管癌組織和正常膽管組織中表達(dá)的比較 見(jiàn)表1。 結(jié)果顯示VEGF和MVD在膽管癌組織中的表達(dá)明顯高于在正常膽管組織中表達(dá)，差異有顯著性。

表1VEGF、MVD在兩組組織中表達(dá)的比較（例±s)

表1VEGF、MVD在兩組組織中表達(dá)的比較（例±s)

P＜0.01

組別 例數(shù) VEGF MVD陽(yáng)性 陰性膽管癌組 51 41 10 51.05±13.8正常膽管組 10 2 8 11.87±1.65

2.2 VEGF、MVD與膽管癌分化程度、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系 高分化10例，VEGF陽(yáng)性8例，占76%。MVD值為50.2±12.9。中分化25例，VEGF19例，占76%。MVD值為51.15±13.0。低分化16例，VEGF陽(yáng)性14例，占87.5%。MVD值為53.28±10.1。不同分化程度間VEGF、MVD比較，P＞0.05，無(wú)顯著性差異。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，VEGF陽(yáng)性19例，占95%。MVD值為58.4±14.15。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例，VEGF陽(yáng)性22例，占71%。MVD值為32.01±6.8。有無(wú)淋巴結(jié)晶轉(zhuǎn)移間VEGF、MVD值比較，P＜0.05， 有顯著性差異。結(jié)果顯示膽管癌組織中VEGF、MVD表達(dá)與腫瘤的分化程度無(wú)明顯關(guān)系，但與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)系，轉(zhuǎn)移組高于無(wú)轉(zhuǎn)移組。

2.3 膽管癌中VEGF和MVD表達(dá)的關(guān)系 51例膽管癌中VEGF陽(yáng)性標(biāo)本（41例）中MVD為58.97%，陰性標(biāo)本（10例）中MVD為33.06%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.136，r=0.69，P＜0.05） ，說(shuō)明VEGF的表達(dá)與MVD密切相關(guān)。

3 討論

腫瘤相關(guān)的血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的必備條件，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一種高度特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂素，被公認(rèn)為最重要和最強(qiáng)的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，促使腫瘤血管生成[2-3]。VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞強(qiáng)有力的有絲分裂原，通過(guò)表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF受體發(fā)揮作用，選擇性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，促使血管增生；同時(shí)還可增加金屬蛋白酶和間質(zhì)膠原酶的表達(dá)，提高血管通透性，有利于腫瘤細(xì)胞向外浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移；通過(guò)抑制宿主抗原反應(yīng)細(xì)胞的成熟，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，因而對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要的促進(jìn)作用。VEGF在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，如肺癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌等[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在膽管癌中的陽(yáng)性表達(dá)率（80.4%）明顯高于非膽管癌組；VEGF在膽管癌中的表現(xiàn)與腫瘤的分化程度無(wú)明顯關(guān)系，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示VEGF在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

腫瘤微血管密度（MVD）是一個(gè)反映腫瘤血管生成的重要指標(biāo)，直接反映腫瘤血管生成的情況，惡性腫瘤血管生成的數(shù)量可通過(guò)測(cè)定MVD進(jìn)行評(píng)估[5]。有文獻(xiàn)顯示MVD的高低與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的程度密切相關(guān)[6]。MVD反映了腫瘤微血管生成的強(qiáng)度與腫瘤侵襲性的必然關(guān)系，可以作為預(yù)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)預(yù)后指標(biāo)。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)乳癌、前列腺癌、大腸癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、腎癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌等各系統(tǒng)進(jìn)行微血管密度的研究證實(shí)，MVD是一個(gè)獨(dú)立而重要的預(yù)后因素，高M(jìn)VD提示腫瘤易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良[7]。對(duì)患者手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行MVD分析，可以為及早使用血管生成抑制劑提供依據(jù)，也可為其他治療方法的采用與否提供依據(jù)。本研究顯示MVD在膽管癌組明顯高于非膽管癌組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示二者的差異具有顯著性意義，MVD在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中是一個(gè)重要的觀察指標(biāo)，反映腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力，可作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素來(lái)判斷膽管癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)情況。

VEGF和MVD在膽管癌中的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系，即VEGF的表達(dá)水平高，MVD也隨之增高，說(shuō)明VEGF是腫瘤血管形成的強(qiáng)誘導(dǎo)因子，MVD能很好地反映腫瘤血管生成情況，也同時(shí)證實(shí)VEGF是作用特異的血管生成刺激因子，能特異性地促進(jìn)腫瘤血管的生成，促使腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。VEGF和MVD的聯(lián)合檢測(cè)能為臨床預(yù)測(cè)膽管癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后提高依據(jù)，也為腫瘤的靶向治療提供依據(jù)。參考文獻(xiàn)：

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