竇文淵 王 飛 鄭家概 石燕麗

中國廣州分析測試中心 /廣東省化學危害應急檢測技術(shù)重點實驗室，廣東 廣州 510070

紅景天枸杞片主要由紅景天和枸杞子中藥經(jīng)過多重工藝制成的制劑。紅景天為景天科植物大紅花紅景天Rhodiola crenulataa(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥跟和根莖，能益氣活血，通脈平穿喘。用于氣虛血瘀，胸痹心痛，中風偏癱，倦怠氣喘［1];枸杞子 (Fructus Lycii)為茄科植物枸杞 (Lycium，barbarum L．)的成熟果實，能滋補肝腎、益精明目，用于虛勞精虧、腰膝酸痛、眩暈耳鳴、內(nèi)熱消渴、血虛萎黃、目昏不明［2]。該制劑具有抗氧化，抗疲勞，抗輻射，抗衰老，抗癌，降血脂等療效。以往文獻報道紅景天苷含量測定，主要是高效液相色譜法［3～4]，但未有文獻報道以HPLC測定紅景天枸杞片制劑中紅景天苷的含量。因此，筆者采用HPLC測定紅景天枸杞片中紅景天苷的含量，為有效控制該制劑質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試劑

日本島津LC一20AB液相色譜儀 (包括二元梯度泵，自動進樣器，控溫箱，控制系統(tǒng));SPD－M20A PDA檢測器;島津LC solution色譜工作站。紅景天苷對照品 (購于中國藥品生物制品檢定所，批號：110818－200404，≥98%);甲醇、乙腈 (色譜純，美國Merck公司)，水為高純水。樣品：紅景天枸杞片，由廣東湯臣倍健生物科技股份有限公司生產(chǎn)，(規(guī)格：9100mg.片－1，批號：(20110201、20110202、20110203、20110301、20110302、20110303)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Welch C18色譜柱 (250×4.6mm，5μm);流動相A：水，流動相B：乙腈;梯度程序：0～13 min，0～35%B;13～18min，35～60%B;18～25min，60～0%B.檢測波長：275nm;流速：1.0ml.min－1;柱溫：35℃;進樣量10μl。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對照品20.00mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含紅景天苷784μg.ml－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品20片，研細，混勻。取約0.5g，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇約20ml，超聲30min，使其充分溶解，加甲醇至刻度，搖勻，用濾膜過濾，配制成供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按紅景天枸杞片處方比例，制成缺紅景天的陰性樣品，按“2.2.2”項下供試品溶液配制方法配成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 對照溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液分別進樣10μl，按色譜條件進行測定，記錄色譜圖(見圖A、B、C)。在上述色譜條件下，理論板數(shù)以紅景天苷算不低于4000，供試品溶液中紅景天苷的峰與前后峰分離度均大于1.5，且陰性樣品無干擾。

2.4 線性關(guān)系試驗 精密量取784μg.ml－1的紅景天苷對照溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得濃度分別為39.2、78.4、157、235、314、392μg.ml－1的紅景天苷對照溶液，進樣10μl，按色譜條件進行測定，記錄色譜圖，以濃度 (C)為橫坐標，峰面積 (A)為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程A=1911C+8360，相關(guān)系數(shù)r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明紅景天苷在39.2～392μg.ml－1濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取批號為“2.2.1”對照品溶液進樣10μl，按色譜條件進行測定 ，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果紅景天苷對照品溶液峰面積的RSD=0.60%(n=6)，表明此儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取新配制的供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24h進樣10μl，記錄紅景天苷的峰面積，結(jié)果RSD=0.98%，表明紅景天苷供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗 精密稱取本品適量 (批號：20110301)，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣，記錄紅景天苷的峰面積，結(jié)果RSD為0.79%(n=6)，表明此方法的重復性良好。

2.8 加樣回收試驗 取同一批號 (批號：20070301)的樣品6份，各精密加入一定量的紅景天苷對照品，按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果，RSD=0.70%，表明此方法準確可靠(見表1)。

表1 加樣回收試驗測定結(jié)果 (n=6)

2.9 樣品含量測定 取6個不同批次的樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，以外標法計算含量 (見表2)，6批樣品的含量均≥5.00 mg. 片－1。

表2 樣品的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 紅景天苷以往測定，洗脫條件為等度洗脫，大多數(shù)流動相選擇選擇甲醇一水 (15∶85)、甲醇一0.02mol.L－1NaAc(9∶91)、水—甲醇—乙腈 (90∶5∶5)［5]、水—乙腈等，筆者也嘗試過，發(fā)現(xiàn)紅景天枸杞片成分較多，等度洗脫不能滿足實驗要求，甲醇一0.02mol.L－1NaAc溶液 (9∶91)，保留時間太長 (30min左右)，甲醇一水 (15∶85)保留時間在18min左右，但分離度不能滿足要求。經(jīng)過多次試驗，最后選擇水－乙腈作為流動相，進行梯度洗脫效果最理想。

3.2 記錄紅景天苷對照品溶液和樣品圖譜，通過SPDM20A PDA檢測器對在190－800nm范圍進行掃描，其中223nm和275nm處有較大吸收，223nm出吸收最強，275nm次之，由于223nm處干擾較大。因此，檢測波長選擇275nm。

3.3 不同批次產(chǎn)品測出含量個別相差較大，分析原因可能是由于原材料大紅花紅景天的干燥跟和根莖采摘年限和季節(jié)的差異。在一定年齡階段內(nèi)，紅景天苷含量隨年齡增高而升高，在生長至10年左右時，紅景天苷含量達到最高，之后紅景天苷含量又開始下降［6]。在同樣條件下，野生和園林的紅景天的紅景天苷含量明顯比種植的紅景天高，秋季花莖凋枯后是紅景天采摘的最好季節(jié)。因此，根據(jù)中藥特點去采摘才能更好利用中藥的寶貴資源。

［1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典 (2010年版一部) ［S]．北京：化學工業(yè)出版社，2010．144－144．

［2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典 (2010年版一部) ［S]．北京：化學工業(yè)出版社，2010．231－232．

［3]黃萍，廖建，劉仲義．紅景天膠囊中紅景天苷的含量測定［J]．華西藥學雜志，2003，18(2)：144－145．

［4]耿鳳孌，付加雷，陳之瑞等．HPLC法測定紅景天含片中紅景天苷的含量［J]．中國民族醫(yī)藥雜志，2010，2(2)：44－45．

［5]黃雨三．《保健食品檢驗與技術(shù)規(guī)范實施手冊》［S]．北京：清華同方電子出版社，2003：1188－1190．

［6]吳雙秀，尚辛亥，戴紹軍等．高山紅景天年齡與根部紅景天甙含量的關(guān)系［J]．植物研究，2001，21(2)：252－257．