閆曉鵬 李雪英 王文莉

全自動加樣系統(tǒng)具有加樣精確度高、標(biāo)本處理量大、加樣速度快、不易出現(xiàn)人為差錯事故等優(yōu)點，進(jìn)一步提高了血液檢測的質(zhì)量和水平，近年來在采供血系統(tǒng)的ELISA血液檢測中得到了廣泛應(yīng)用［1］。但筆者在運用全自動加樣系統(tǒng)進(jìn)行血液標(biāo)本加樣檢測過程中，發(fā)現(xiàn)有強(qiáng)陽性標(biāo)本引起的拖帶污染現(xiàn)象，給工作造成了一定的不利影響。經(jīng)分析原因并制定相應(yīng)整治措施，特別是更換使用一次性加樣針后，完全杜絕了此類現(xiàn)象的發(fā)生。筆者以HIV檢測為例報告如下。

1 材料與方法

1.1 血液標(biāo)本 本站無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本74215份(其中2008年10月至2008年12月6142份，2009年1月至2011年4月68073份)。每位獻(xiàn)血者均留取2份血液標(biāo)本，其中1份為獻(xiàn)血者獻(xiàn)血時由采血護(hù)士留取的試管標(biāo)本，作初檢用;另1份為留取的血袋導(dǎo)管標(biāo)本，作復(fù)檢用。所有血液標(biāo)本均2000 r/min離心15 min備用。

1.2 試劑 初檢用HIV抗原抗體診斷試劑盒(北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司);復(fù)檢用HIV抗原抗體診斷試劑盒(法國BIO-RAD公司);2種試劑均通過中國藥品生物制品檢定所批檢合格，并在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器設(shè)備 STAR全自動樣本處理系統(tǒng)(瑞士HAMILTON公司);FAME全自動酶免分析系統(tǒng)(瑞士HAMILTON公司);Sunrise酶標(biāo)儀(奧地利TECAN公司);MK2洗板機(jī)(芬蘭Thermo公司)。

1.4 方法 分別使用初檢試劑檢測初檢標(biāo)本，復(fù)檢試劑檢測復(fù)檢標(biāo)本，根據(jù)HIV檢測試劑說明書的要求，在STAR全自動樣本處理系統(tǒng)控制微機(jī)上編輯初檢、復(fù)檢2個加樣程序。2008年使用永久性鋼針，加樣過程中，STAR全自動樣本處理系統(tǒng)在吸取、分配不同的血液標(biāo)本或液體試劑后，按設(shè)定程序需將加樣探針清洗3次，在擦針紙上擦拭1次。2009年以后全部使用一次性加樣針，設(shè)定程序也相應(yīng)取消了洗滌環(huán)節(jié)。當(dāng)加樣程序完成后，將微板移至FAME全自動酶免分析系統(tǒng)，進(jìn)行溫育、洗板、顯色及結(jié)果判讀。

以大寫字母A～H表示96孔酶標(biāo)板的縱列;以阿樂伯?dāng)?shù)字1～12表示96孔酶標(biāo)板的橫列，標(biāo)本在酶標(biāo)板的位置可分別表示為A1～A12、B1～B12……H1～H12(見圖1)。如發(fā)現(xiàn)ELISA微板上從A排至H排連續(xù)出現(xiàn)2孔或2孔以上陽性結(jié)果時，即懷疑是由拖帶污染引起的假陽性。首先進(jìn)行同一檢測項目初、復(fù)檢結(jié)果比對;然后重新取1份血袋導(dǎo)管標(biāo)本，連同初、復(fù)檢標(biāo)本，分別用2種試劑進(jìn)行3孔復(fù)試。

圖1 酶標(biāo)板標(biāo)本位置圖解

2 結(jié)果

在2008年10月至2008年12月的6142份血液標(biāo)本的HIV檢測中，由STAR全自動樣本處理系統(tǒng)引起的強(qiáng)陽性標(biāo)本拖帶污染現(xiàn)象共2次，分別見表1、表2。2009年1月～2011年4月共68073份血液標(biāo)本檢測中未發(fā)現(xiàn)拖帶污染現(xiàn)象。

表1 第1例拖帶污染檢測結(jié)果

本次拖帶污染現(xiàn)象出現(xiàn)在初檢中，實驗的Cut off值為0.134，故6份標(biāo)本中5份為陽性，1份為“灰區(qū)”。根據(jù)HIV檢測規(guī)程，對6份標(biāo)本分別進(jìn)行了3孔復(fù)試，結(jié)果H2標(biāo)本仍為強(qiáng)陽性，檢測OD值分別為2.759、2.543和2.398;H3標(biāo)本為弱陽性，檢測OD值分別為0.596、0.603和0.628;其余4份標(biāo)本均為陰性。遂將H2、H3標(biāo)本送焦作市疾控中心的HIV確認(rèn)實驗室進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果H2標(biāo)本仍為強(qiáng)陽性，H3標(biāo)本為可疑，須3個月后進(jìn)一步隨訪和復(fù)查。

表2 第2例拖帶污染檢測結(jié)果

本次拖帶污染現(xiàn)象出現(xiàn)在復(fù)檢中，實驗的Cut off值為0.204，故4份標(biāo)本均呈陽性。按HIV檢測規(guī)程分別對4份標(biāo)本進(jìn)行3孔復(fù)試后，E9標(biāo)本仍為強(qiáng)陽性，檢測OD值分別為3.110、3.188和3.011，其他3份樣本均為陰性。E9標(biāo)本經(jīng)焦作市疾控中心HIV確認(rèn)實驗室確認(rèn)后，仍為強(qiáng)陽性。

3 討論

由于全自動加樣系統(tǒng)的諸多優(yōu)點，使其在大部分血站得到推廣應(yīng)用。最初幾年，推廣使用的加樣針均為永久性鋼針，目前有部分血站仍在使用。因其在加完血液標(biāo)本或試劑后，需按編好的加樣程序進(jìn)行沖洗、擦拭后重復(fù)使用，所以從理論上講，隨著加樣運行方向從左→右各孔間的拖帶污染是不可避免的［2］，尤其是一根加樣針加完強(qiáng)陽性標(biāo)本后，如果因標(biāo)本存在纖維蛋白凝塊等原因而使加樣針未徹底沖洗干凈，就會造成強(qiáng)陽性拖帶污染情況的發(fā)生，本文中2例拖帶污染現(xiàn)象經(jīng)分析均為標(biāo)本處理不當(dāng)引起。同時由加樣參數(shù)設(shè)置不當(dāng)而引起的加樣量不準(zhǔn)確、加樣針掛珠等情況以及洗針槽不潔凈、溢液通道不通暢、針爪內(nèi)外壁干燥密封不好、加樣探針有內(nèi)栓漏氣等均可導(dǎo)致拖帶污染現(xiàn)象發(fā)生。

針對產(chǎn)生拖帶污染的原因，我們采取了以下對應(yīng)措施:①根據(jù)不同廠家試劑的實際情況，設(shè)置科學(xué)合理的加樣參數(shù)，避免液體試劑和標(biāo)本之間的相互污染。②自2009年全面更換使用一次性加樣針，由于沒有了洗滌環(huán)節(jié)，在保持血液加樣的高精確度和自動化的前提下，可完全杜絕拖帶污染帶來的影響［3］。③建立和實施儀器設(shè)備的維護(hù)、校準(zhǔn)和持續(xù)監(jiān)控管理制度，大型和關(guān)鍵儀器設(shè)備實行專人管理、專人使用，并按照儀器使用要求做好其日維護(hù)、月維護(hù)及日常保養(yǎng)工作，使儀器始終處在良好的工作狀態(tài)。④對血液標(biāo)本全過程進(jìn)行管理，建立和實施標(biāo)本采集程序、標(biāo)本運送程序及標(biāo)本的接收和處理程序，并嚴(yán)格執(zhí)行，有效避免了標(biāo)本出現(xiàn)溶血、污染、變質(zhì)及存在懸浮顆粒等情況。

基于我們采取的綜合整治措施，2009年至今，我站共檢測獻(xiàn)血者血液標(biāo)本近7萬人份，未發(fā)生1例拖帶污染現(xiàn)象，更好地發(fā)揮了全自動檢測設(shè)備的優(yōu)勢，進(jìn)一步提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性及血液使用的安全性。

［1］李玉笑，鄭優(yōu)榮，肖韶英，等.FAME酶標(biāo)分析系統(tǒng)在安全輸血中的應(yīng)用.廣東醫(yī)學(xué)，2002，23(5):461-463.

［2］徐樹良，談維，石斌，等.全自動加樣儀引起抗-HIV拖帶陽性分析.中國輸血雜志，2003，16(2):106-107.

［3］申俊峰，陸蓉，王軍，等.全自動加樣儀一次性加樣針在血液檢測中的應(yīng)用.貴州醫(yī)藥，2009，33(3):264-265.