王敏

血管性癡呆是腦血管疾病導致的認知功能障礙的臨床綜合征，是神經(jīng)系統(tǒng)常見病、多發(fā)病。銀丹心腦通軟膠囊中的銀杏葉、丹參、大蒜等有效成份結合能擴張血管，促進血液循環(huán)，預防和消除動脈粥樣硬化。本研究采用血管夾閉法(4-VO法)復制VD大鼠血管性癡呆模型，初步探討血管性癡呆影響學習記憶可能機制以及YDXNT對AD的防治作用及機制。

1 資料與方法

1.1 試劑和儀器 YDXNT(本室自制，HPLC測定純度為90%);丙二醛(MDA)測定試劑盒、免疫組化試劑盒(北京中杉生物工程有限公司)，羊多克隆NPY抗體(南京建成生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組 健康SD大鼠30只，3～4月齡，雄性，體質量200～250g，由煙臺綠葉制造集團提供。實驗分為假手術組(Sham組)、VD模型組(VD組)、YDXNT處理組(YDXNT+VD組)。動物模型制備采用4-VO法建立VD大鼠模型。模型成功后YDXNT組灌胃:YDXNT軟膠囊每粒中1/3量，溶于生理鹽水15 ml，使之均勻，取1 ml灌胃，3次/d，連續(xù)4周，Sham組與VD組均灌胃等量生理鹽水;6周后，開始測定。

1.2.2 模型的建立 采用大鼠4-VO法制成VD大鼠模型:將大鼠用10%的水合氯醛(35 mg/kg)腹腔注射麻醉后，分離雙側頸總動脈。用4號絲線結扎。在距尾尖1cm處剪斷放血約0.3 ml熱凝止血。阻斷血流20 min，松開絲扣再灌注10 min后，再次阻斷血流20 min，切口局部注射慶大霉素0.2萬U。對照組只分離頸總動脈，穿線但不結扎，尾部不放血。

1.2.3 學習記憶能力行為學測定 定位航行實驗歷時4 d，每天上、下午定時各訓練1次，檢測大鼠找到平臺的時間及游泳路徑長度，第5天撤除平臺作空間搜索實驗，將大鼠從同一入水點放入水中，記錄120 s內大鼠在原平臺所在象限的搜索時間及原平臺所在象限游泳距離占總距離的百分比。

1.2.4 海馬組織NPY檢測方法 取血后，結扎胸主動脈，經(jīng)左心室-升主動脈插管，快速灌注300～400 ml磷酸鹽緩沖液沖洗腦組織至流出液體澄清，繼之灌注4℃的4%多聚甲醛溶液灌注過程中動物四肢抽動，全身發(fā)白，逐漸變硬，持續(xù)灌注30～60 min，然后剝離腦，置于同濃度多聚甲醛溶液中后固定12 h以上。修塊，取海馬腦片，梯度乙醇脫水二甲苯透明，石蠟包埋后，行冠狀切片，片厚約4μm。每只大鼠選取含室旁核海馬切片3～5張，用涂有多聚賴氨酸載玻片撈片。以下Fos蛋白檢測按試劑盒要求進行。采用LeicaQWin細胞圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)在PAG隨機取5個高倍視野(×400)計算NPY免疫反應陽性產(chǎn)物的平均光密度(MOD)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 11.0 for Windows軟件對實驗結果進行分析。實驗所得數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

表1 尋找平臺所需潛伏期組間比較( ± s，n=10)

表1 尋找平臺所需潛伏期組間比較( ± s，n=10)

注:與sham組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與VD組比較△P＜0.05，△△P＜0.01

組別潛伏期(s)第1天 第2天 第3天 第4天6.0 VD組 114.30±18.71＊＊ 98.43±20.53＊＊ 91.34±19.80＊＊ 85.80±20.32＊＊YDXNT+VD組 91.22±20.51＊△ 71.00±16.80＊△△ 55.12±12.66＊＊△△ 30.23±13.35 sham組 67.25±22.42 53.16±15.23 29.20±11.23 10.41±＊＊△△

2 結果

2.1 空間學習記憶行為學測試結果 (1)大鼠尋找平臺所需潛伏期及搜索距離均有隨訓練進程縮短的趨勢。(見表1、表2)。(2)VD組和YDXNT+VD組與假手術組比較，在定位航行實驗中大鼠的逃避潛伏期及搜索距離明顯延長(P＜0.05或P＜0.01，表1、2);在空間探索實驗中，兩組在原平臺所在象限的搜索時間明顯減少(P＜0.01，表3)，提示4-VO法建立VD大鼠學習記憶能力明顯減退。(3)YDXNT+VD組與VD組比較，YDXNT+VD組在定位航行實驗中逃避潛伏期及搜索距離縮短(P＜0.01，表1、2)，在空間探索實驗中YDXNT+VD組原平臺所在象限的搜索時間較VD組延長，(P ＜0.05或 P ＜0.01，表 1、2、3)，提示 YDXNT 對血管性癡呆引起的大鼠學習記憶的減退有一定的恢復作用。2.2 銀丹心腦通軟膠囊對血管性癡呆大鼠海馬NPY表達的影響。光鏡觀察免疫組織化學切片，海馬NPY免疫反應物質呈程度不等的棕黃色或棕褐色，主要分布于神經(jīng)細胞胞漿，呈卵圓形、圓形或多角形，胞核呈藍色，核仁清晰可見。MOD值越高說明表達越強，反映細胞內NPY表達量越多。統(tǒng)計學分析結果顯示:VD模型組與針刺組大鼠海馬NPY表達明顯低于Sham組(P＜0.05，表4);其中VD組大鼠海馬NPY表達又低于與Sham組比較;與VD模型組比較，YDXNT+VD組海馬NPY表達明顯升高(見表4)。

表2 空間探索距離組間比較± s，n=10)

表2 空間探索距離組間比較± s，n=10)

注:與sham組比較＊＊P＜0.01;與VD組比較△△P＜0.01

組別空間探索距離(cm)第1天 第2天 第3天 第4天05 315.62±26.87 VD組 2881.43±193.55＊＊ 2611.17±160.50＊＊ 2341.24±191.35＊＊ 1831.53±143.22＊＊YDXNT+VD組 2345.08±156.28＊＊△△ 1804.22±135.46＊＊△△ 1643.45±213.11＊＊△△ 900.64±132.39 sham組 1220.87±169.44 1203.42±158.73 620.41±100.＊＊△△

表3 空間探索實驗中各組在原平臺所在象限的搜索時間的比較 ± s，n=10)

表3 空間探索實驗中各組在原平臺所在象限的搜索時間的比較 ± s，n=10)

注:與sham組比較＊＊P＜0.01;與VD組比較△△P＜0.01

組別 空間探索時間(s)46.15±12.31 VD 組 18.23±5.54＊＊YDXNT+VD組 27.53±14.16 sham組＊＊△△

表4 銀丹NP心Y腦通軟膠囊對血管性癡呆大鼠海馬表達的影響 ± s，n=10)

表4 銀丹NP心Y腦通軟膠囊對血管性癡呆大鼠海馬表達的影響 ± s，n=10)

注:與sham組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與VD組比較△△P＜0.01

組別85.66±8.45 VD 組 52.23±9.22＊＊YDXNT+VD組 75.42±7.58 MOD sham組＊△△

3 討論

銀丹心腦通軟膠囊中的銀杏葉、丹參、大蒜的有效成份結合能擴張血管，促進血液循環(huán)，預防和消除動脈粥樣硬化;絞股藍、燈盞細辛、三七、天然冰片有效成份聯(lián)合能清除血液循環(huán)系統(tǒng)的垃圾，降低血脂及血黏度，修復受損腦組織，促進腦神經(jīng)細胞的生長，防治腦梗死。銀杏葉、大蒜、山楂、三七有效成份聯(lián)合能快速緩解頭暈、眼花、煩躁失眠等心腦血管病初期癥狀。近年來研究表明銀丹心腦通軟膠囊通過降血脂、抗炎等機制防治早期動脈粥樣硬化［1］。芮銘安等［2］進一步發(fā)現(xiàn)銀丹心腦通能使血漿比黏度、全血比黏度、紅細胞比容降低。降低腦血管阻力，增加腦血流量;促進大腦半球經(jīng)胼胝體的信息傳遞，可改善腦組織因缺氧造成的腦損傷，具有促進腦內代謝作用，對缺氧所致的逆行性遺忘有改進作用，可以增強記憶，提高學習能力，具有激活、保護和修復神經(jīng)細胞的作用。銀丹心腦通軟膠囊能通過改變NPY的表達量來改善腦缺血缺氧造成的大鼠學習記憶能力下降。

［1］盧仁榮，陳曉曦.銀丹心腦通軟膠囊對冠心病患者血脂及高敏C反應蛋白的影響.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2008，6(9):1093-1094.

［2］芮銘安，孫赟，柏金喜，等.銀丹心腦通軟膠囊對PCI后心絞痛的療效觀察.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2008，6(1):87-89.