王建東，謝浙裕，柴軍

(浙江省紹興市食品藥品檢驗(yàn)所，312071)

潰平寧顆粒是由大黃浸膏、白芨和延胡索粗堿組成的復(fù)方制劑，具有抑制胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性、減弱胃酸酸度，從而有效地抑制黏膜損害因子的作用;可隔離胃及十二指腸內(nèi)消化液與黏膜潰瘍面的接觸，促進(jìn)潰瘍面的愈合，抑制幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)。用于胃潰瘍、急慢性胃炎、十二指腸潰瘍及合并上消化道出血等癥。原制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]只有化學(xué)鑒別，為更好地控制該藥的質(zhì)量，筆者選擇方中延胡索粗堿的有效成分延胡索乙素為含量測(cè)定對(duì)象，采用高效液相色譜法對(duì)延胡索乙素的含量進(jìn)行控制。中藥復(fù)方制劑中延胡索乙素的含量測(cè)定方法已有報(bào)道[2-5]，但筆者尚未見(jiàn)到對(duì)該藥中延胡索乙素進(jìn)行含量測(cè)定的報(bào)道。筆者在本實(shí)驗(yàn)中所建立的方法回收率高，分離度好，方法簡(jiǎn)便，適于該藥的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器;Chemstation色譜工作站。

1.2 試藥延胡索乙素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110726-200208)，潰平寧顆粒(吉林省長(zhǎng)源藥業(yè)有限公司，批號(hào):20070501，20080307，20080405)，甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Agilent Zorbax XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈-1%冰醋酸(三乙胺調(diào)pH=5.0)(23∶77)，流速:1.0 mL·min-1，柱溫:30℃;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取延胡索乙素對(duì)照品10.72 mg，置于100 mL量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密吸取5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.021 44 mg·mL-1的延胡索乙素對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備取5袋潰平寧顆粒內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.4 g，精密稱量，置于具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，超聲處理60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，高速離心，取上清液，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備根據(jù)潰平寧顆粒處方，取不含延胡索粗堿的處方量藥材，按制備工藝制備缺延胡索乙素的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)方法制成缺延胡索乙素的陰性供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)以延胡索乙素計(jì)＞6 000;供試品色譜中延胡索乙素與相鄰峰為基線分離;陰性供試品溶液色譜圖中在延胡索乙素保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，說(shuō)明無(wú)干擾(圖1)。

圖1 3種溶液的高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1，2，5，10，15，20 μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，進(jìn)樣，測(cè)定延胡索乙素峰面積。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=913.4X－3.6(r=0.999 9)。結(jié)果表明，延胡索乙素在進(jìn)樣量為0.107 2～2.144 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別于0，1，2，4，6，8 h各進(jìn)樣測(cè)定1次，結(jié)果延胡索乙素峰面積的RSD為0.8%(n=6)。表明該溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，其峰面積的RSD為0.6%，說(shuō)明該方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品(批號(hào):20070501)6份，平行處理，處理方法同“2.2.2”項(xiàng)，測(cè)定并計(jì)算含量。結(jié)果6份含量的RSD為1.0%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為20070501的樣品(延胡索乙素含量為1.693 6 mg·g-1)，研細(xì)，精密稱取9份，分別加入0.8，1.0，1.2 mL延胡索乙素對(duì)照品溶液(濃度為0.321 6 mg·mL-1)，揮去溶劑，精密加入60%乙醇25 mL，按“2.2.2”項(xiàng)制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。平均回收率101.1%，RSD=1.2%。表明本方法回收率好，方法可行。

2.9 樣品的含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20070501，20080307，20080405的樣品，延胡索乙素含量分別為1.69，1.70，1.68 mg·g-1。

表1 潰平寧顆粒中延胡索乙素回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

選擇供試品溶液制備方法時(shí)，筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)，有報(bào)道采用60%乙醇提取、氨-乙醇(1∶25)、氨-甲醇(1∶25)提取。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)60%乙醇和氨-甲醇(1∶25)提取較完全，且基本一致，因考慮到甲醇毒性較乙醇大，因此采用60%乙醇作為提取溶劑。在選擇提取方法時(shí)，《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版及相關(guān)文獻(xiàn)采用超聲或回流方式，筆者對(duì)這兩種方法進(jìn)行比較，兩種方法測(cè)得的結(jié)果基本一致，同時(shí)對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行考察，分別對(duì)30，60，90 min提取的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果超聲或者回流60 min提取已經(jīng)較完全，因此提取方法采用60%乙醇，超聲60 min。而2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》元胡止痛片采用甲醇提取，中性氧化鋁柱純化的方法比較復(fù)雜，并未采用。選擇測(cè)定波長(zhǎng)時(shí)，結(jié)合文獻(xiàn)資料，確定測(cè)定波長(zhǎng)為280 nm。流動(dòng)相選擇，筆者對(duì)文獻(xiàn)應(yīng)用的流動(dòng)相進(jìn)行比較:①甲醇-0.02%磷酸(40∶60)，對(duì)照品峰形良好，而樣品峰形差、理論板數(shù)低且分離度差;②甲醇-0.04%磷酸(三乙胺調(diào)pH=3.5)，對(duì)照品峰形差，理論塔板數(shù)低，而且pH越大峰形越差;③乙腈-0.01%磷酸(三乙胺調(diào)pH=5.0)，峰形差，樣品分離度低;④乙腈-0.8%冰醋酸(三乙胺調(diào)pH=5)，峰形良好，周?chē)鸁o(wú)雜質(zhì)峰干擾，且理論板數(shù)＞10 000。因此采用乙腈-1%冰醋酸(三乙胺調(diào)pH=5.0)作為流動(dòng)相。筆者也考察過(guò)甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)，不調(diào)pH，發(fā)現(xiàn)峰形都不對(duì)稱，前拖尾很?chē)?yán)重。

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第三冊(cè)[S].179.

[2]汪玲，程貝，羅蘭，等.元胡止痛分散片中延胡索乙素的含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(1):114－115.

[3]范成杰，徐增香.HPLC測(cè)定安胃片中的延胡索乙素的含量[J].中國(guó)醫(yī)療前沿，2008，3(14):96－97.

[4]李健，楊濤，宋毅，等.HPLC測(cè)定氣滯胃痛顆粒中的延胡索乙素[J].華西藥學(xué)雜志，2008，23(3):375.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:525－527.