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        中華苦荬菜治療糖尿病并發(fā)癥的物質(zhì)基礎(chǔ)研究

        2011-08-23 14:37:26邸子真王光函姜鴻鄒桂欣
        醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2011年11期
        關(guān)鍵詞:血糖糖尿病

        邸子真,王光函,姜鴻,鄒桂欣

        (遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)室,沈陽(yáng)110034)

        中華苦荬菜含有三萜類、倍半萜類、木犀草素及其苷、洋芹苷等黃酮類成分和多種維生素[1-2]。同屬植物抱莖苦荬菜[Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance]被制成注射液用于治療糖尿病并發(fā)癥,取得了良好的療效[3]。齒緣苦荬菜[Ixeris dentate(Thunb)Nakai]在韓國(guó)被作為抗糖尿病的民間草藥[4],但筆者未見中華苦荬菜抗糖尿病的報(bào)道。糖化血紅蛋白(glycolated hemoglobin,HbAlC)和果糖胺分別表示近8~12周和近2~3周的血糖水平,彌補(bǔ)了血糖值時(shí)效性太強(qiáng)的缺點(diǎn),對(duì)于了解平均血糖水平具有實(shí)際意義,其高低與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展呈明顯相關(guān)性[5]。

        筆者在本研究中對(duì)高脂血癥糖尿病模型大鼠給予不同劑量中華苦荬菜提取物,發(fā)現(xiàn)中華苦荬菜在降低HbAlC和果糖胺方面有顯著的效果,并將藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與各提取物指紋圖譜相對(duì)峰面積相關(guān)聯(lián),通過SPSS統(tǒng)計(jì)軟件相關(guān)分析初步確定中華苦荬菜中與抗糖尿病作用相關(guān)物質(zhì)的色譜峰,為進(jìn)一步發(fā)掘中華苦荬菜的藥用價(jià)值奠定了理論基礎(chǔ)。

        1 材料

        中華苦荬菜藥材采自遼寧省沈陽(yáng)市,經(jīng)遼寧省藥品檢驗(yàn)所王維寧教授鑒定為菊科植物中華苦荬菜全草。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 提取物的制備取干燥中華苦荬菜藥材揉碎,分別加10倍量和8倍量水各提取1次,每次1 h,濾過,合并濾液,濃縮,放冷,取少量樣品供指紋圖譜分析用,其余用等倍量石油醚(60~90℃)、乙酸乙酯、水飽和正丁醇各萃取3次,合并各萃取溶液,減壓回收溶劑至稠膏,少量溶劑溶解,分別加入糊精適量,干燥,研勻,制成樣品每克相當(dāng)于藥材10 g的粉末:1號(hào)提取物(石油醚層)、2號(hào)提取物(乙酸乙酯層)、3號(hào)提取物(正丁醇層)。萃取剩余水溶液減壓干燥至干,稱定質(zhì)量,粉碎成每克相當(dāng)于藥材3.25 g的細(xì)粉,作為4號(hào)提取物。以上各提取物分別干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

        2.2 提取物指紋圖譜分析

        2.2.1 儀器與試藥Agilent 1100高效液相色譜分析儀:四元泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、DAD檢測(cè)器、全自動(dòng)進(jìn)樣器(美國(guó)Agilent公司)。乙腈(天地公司,色譜純,批號(hào):1004900),冰醋酸(國(guó)藥集團(tuán),色譜純,批號(hào):200907161217FC),水(杭州娃哈哈純凈水,批號(hào):T20070911),其他試劑均為分析純。

        2.2.2 色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相A:0.8%醋酸水溶液,B:0.8%醋酸乙腈溶液,梯度洗脫;流速:1 mL·min-1;DAD檢測(cè)器,梯度檢測(cè)波長(zhǎng);柱溫:30℃;圖譜記錄105 min。

        2.2.3 供試品溶液的制備取“2.1”項(xiàng)下1~4號(hào)提取物各1 g,精密稱定,加甲醇50 mL,回流提取2 h,過濾,蒸干,1號(hào)定容至1 mL,2,3號(hào)分別定容至2 mL,搖勻,取少量溶液高速離心,吸取上清液作為供試品溶液。取4號(hào)提取物細(xì)粉1 g,精密稱定,用純化水定容至15 mL,混勻,取少量高速離心,吸取上清液作為供試品溶液。

        2.2.4 高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)指紋圖譜分析取各供試品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣,記錄色譜圖。取木犀草苷對(duì)照品溶液進(jìn)樣,記錄色譜圖,并將保留時(shí)間與樣品各指紋峰比較。1~4號(hào)提取物共得到36個(gè)共有峰,其中X27與木犀草苷對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同。

        2.3 提取物對(duì)高脂血癥糖尿病大鼠的作用Wistar大鼠[吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)進(jìn),合格證號(hào):SCXK(吉)2003-0001],適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,稱體質(zhì)量,隨機(jī)取10只喂以普通標(biāo)準(zhǔn)飼料。其他大鼠喂高脂飼料(在標(biāo)準(zhǔn)飼料中加入10%豬油,10%蛋黃粉和20%蔗糖),8周后,按30 mg·kg-1劑量一次性腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(溶于0.1 mol·L-1檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液,pH4.4)。測(cè)48 h后的空腹血糖值和灌胃20%葡萄糖溶液(2 g·kg-1)后30,60,120 min的血糖值,即葡萄糖耐量。選擇空腹血糖≥7.0 mmol·L-1或灌胃葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)服糖后2h血糖≥11.1 mmol·L-1的大鼠作為受試模型。將造模成功的糖尿病大鼠分為7組,分別為模型組、1~4號(hào)提取物組、陽(yáng)性對(duì)照組1(二甲雙胍)、陽(yáng)性對(duì)照組2(參芪降糖顆粒),各給藥組大鼠按相應(yīng)劑量灌胃給予對(duì)應(yīng)藥液,給藥容積均為20 mL·kg-1,模型組和空白組灌胃給予等量純化水,連續(xù)給藥4周后,禁食12 h,腹主動(dòng)脈采血測(cè)定HbAlC和果糖胺,結(jié)果見表1。

        表1 8組大鼠HbAlC與果糖胺測(cè)定結(jié)果Tab.1ResultsofHbAlCandfructosamine determination in 8 groups of rats ±s

        表1 8組大鼠HbAlC與果糖胺測(cè)定結(jié)果Tab.1ResultsofHbAlCandfructosamine determination in 8 groups of rats ±s

        與模型組比較,*1P<0.05Compared with model group,*1P<0.05

        組別大鼠數(shù)HbAlC/%果糖胺/(mmol·L-1)1號(hào)提取物組1014.19±2.030.24±0.02 2號(hào)提取物組1013.71±1.57*10.23±0.01*1 3號(hào)提取物組1013.44±1.18*10.23±0.02*1 4號(hào)提取物組912.81±0.87*10.24±0.02陽(yáng)性對(duì)照組11010.77±1.60*10.23±0.03陽(yáng)性對(duì)照組2912.40±1.36*10.25±0.02模型組1015.04±0.990.25±0.02空白組125.58±0.22*10.17±0.01*1

        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法與結(jié)果使用SPSS13.0版軟件中的雙變量相關(guān)分析可以得到變量?jī)蓛芍g的皮爾遜系數(shù)及其統(tǒng)計(jì)量。根據(jù)相關(guān)分析結(jié)果可知,與降低HbAlC呈正相關(guān)的色譜峰有X26(tR=50.47 min),X28(tR=53.75 min),X34(tR=60.58 min),與降低果糖胺呈正相關(guān)的色譜峰有X29(tR=55.14 min),X30(tR=57.48 min),X32(tR=58.85min),X33(tR=59.78 min)。提示以上色譜峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)可能具有降低HbAlC和果糖胺的作用。

        3 討論

        HbAlC是衡量血糖的金指標(biāo),中華醫(yī)學(xué)會(huì)于2010年開展了中國(guó)HbAlC教育計(jì)劃,以便使更多的臨床醫(yī)生及患者認(rèn)識(shí)到HbAlC的檢測(cè)和臨床應(yīng)用的重要性。近年研究表明,控制HbAlC水平可使由糖尿病引起的視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及清蛋白尿等的風(fēng)險(xiǎn)大幅下降;使并發(fā)高血壓、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)明顯降低[5-7]。果糖胺的濃度與血糖水平呈正相關(guān),并且相對(duì)穩(wěn)定,日間變異小,由于血漿蛋白的半衰期為17~20 d,故可反映檢測(cè)前2~3周內(nèi)的平均血糖水平,從一定程度上彌補(bǔ)了HbAlC不能反映較短時(shí)期中血糖濃度變化的不足[8-9]。應(yīng)用果糖胺與HbAlC聯(lián)合測(cè)定,有利于更準(zhǔn)確地掌握一段時(shí)間之內(nèi)血糖的變化情況,為評(píng)價(jià)藥品穩(wěn)定血糖的能力提供更科學(xué)的依據(jù)。

        在樣品指紋圖譜測(cè)定中,筆者采用醋酸水-乙腈系統(tǒng),隨著乙腈比例的增加基線逐漸升高,后在乙腈中也加入了同樣比例的醋酸,使酸度保持恒定,解決了基線漂移的問題。Agilent 1100配置的DAD檢測(cè)器可以同時(shí)進(jìn)行5個(gè)波長(zhǎng)的掃描,通過多個(gè)波長(zhǎng)的比對(duì)發(fā)現(xiàn)0~20 min在252 nm波長(zhǎng)下色譜峰的信息量大且各色譜峰有較高的響應(yīng)值,20 min之后324 nm下各主要色譜峰的響應(yīng)值大,基線干擾小,所以設(shè)置了梯度檢測(cè)波長(zhǎng)。

        在該色譜條件下,對(duì)樣品同時(shí)進(jìn)行了在線紫外掃描,獲得了每個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)物質(zhì)的紫外掃描圖譜(波長(zhǎng)190~400 nm)。發(fā)現(xiàn)X26,X28,X29,X30,X32,X33,X34色譜峰均在230~232 nm和316~329 nm兩處有較強(qiáng)的吸收峰。提示他們有可能為具有相同或相似官能團(tuán)的物質(zhì)。將3號(hào)提取物回流提取之后調(diào)成酸性,用乙酸乙酯萃取,再通過D101大孔吸附樹脂柱分離,可于40%乙醇洗脫液中得到較純的該物質(zhì)群,提示其為中等極性,與木犀草苷極性相似的物質(zhì)。

        同屬植物抱莖苦荬菜的注射液已經(jīng)在治療糖尿病并發(fā)癥發(fā)面取得了良好的療效,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示中華苦荬菜也有可能成為一種防止或延緩糖尿病并發(fā)癥的良藥,而且抱莖苦荬菜中治療糖尿病并發(fā)癥的有效成分可能就是中華苦荬菜降低HbAlC和果糖胺的同類成分,還有待對(duì)兩種中藥的對(duì)比研究進(jìn)一步證實(shí)。

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