楊俊杰 ，李 石 ，李 劼 ，呂新剛

（1.兵團農九師畜牧科學研究所，新疆額敏 834601；2.石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003）

豬支原體肺炎（Mps）亦稱豬氣喘病、豬地方性流行性肺炎，是由豬肺炎支原體（Mhp）感染引起的一種慢性呼吸道傳染病，通常引起豬群生產性能顯著下降，受感染豬群日增重下降、飼料報酬降低等，給豬場造成嚴重的經濟損失[1]。

為了解新疆北疆部分規(guī)模豬場中Mhp的感染情況，降低該病對養(yǎng)豬業(yè)的危害，對13個規(guī)模豬場進行了流行病學調查，現(xiàn)將調查結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 采于北疆地區(qū)13個規(guī)模豬場，血清364份，病變肺臟72份。

1.1.2 檢測試劑與儀器 豬肺炎支原體（Mhp）抗體檢測ELISA試劑盒購于北京IDEXX；10×Buffer，dNTPs，Taq 酶，DNAMarker，PCR 儀 （Techentc512），酶標儀（Biotek）等。

1.2 方法

1.2.1 流行病學調查 2010年11月—2011年5月，對北疆13個規(guī)模豬場進行現(xiàn)場調查和問卷調查，調查豬支原體肺炎在豬場的流行情況，包括發(fā)病的數(shù)量、年齡、病死率、發(fā)病季節(jié)、傳染源、傳播途徑、誘發(fā)因素以及主要臨床癥狀等內容，掌握豬支原體肺炎流行的基本情況。

1.2.2 樣品采集 無菌采集13個規(guī)模豬場不同年齡段的豬血（均未接種過豬肺炎支原體疫苗），待凝固后，4000r/min離心10min，-20℃保存。

剖檢可疑病豬，觀察心、肺、脾等組織病理變化。按參考文獻[2]方法無菌采集肺臟、脾臟等病料，-20℃保存；另取病變肺臟浸泡于10%甲醛溶液中。

1.2.3 Mhp血清學檢測 按試劑盒說明書操作。

1.2.4 病變組織PCR檢測 DNA的提取參照文獻提取[3]。陽性對照為南京天邦生物科技有限公司生產的豬支原體肺炎活疫苗（168株）。

PCR引物參考文獻[4]合成1對Mhpldh引物，上游引物 p1 為：5'-CCGTTGAAGCCTTGCTGTAT-3'，下游引物 p2 為：5'-CGGTTAGTGTCTCCCGTTATG-3'，擴增片段大小為287bp。引物由上海申工公司合成。

PCR 體系 （25 μL）：10×Buffer3 μL，10mM dNTPs0.6μL，上下引物各 1μL，模板 2μL，Taq酶0.3μL，補ddH2O至25μL。設定以下參數(shù)進行PCR反應：94℃預變性3min，94℃變性30S，54℃退火30S，72℃延伸40S，進行30個循環(huán)，72℃再延伸10min，4℃保存。取PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳。

1.2.5 病理組織學觀察 將通過PCR鑒定為陽性的肺臟組織，做病理切片。

2 結果與分析

2.1 流行病學調查結果 規(guī)模豬場中Mps主要發(fā)生于秋冬季，各年齡段豬勻易感，發(fā)病率高（30%~90%），死亡率低（8%~20%），仔豬發(fā)病后死亡率高。

病豬和帶菌豬是主要傳染源，感染母豬垂直傳染給小豬，豬群間主要通過接觸傳染。

臨床癥狀表現(xiàn)為咳嗽、氣喘，明顯的腹式呼吸，精神沉郁，食欲減退，生長發(fā)育停滯，日漸消瘦，被毛粗亂，混合感染其它病原時常出現(xiàn)體溫升高。以慢性病例多見，病程長達數(shù)月。使用藥物治療只能減輕臨床癥狀，停藥后很快復發(fā)。寒冷、潮濕、擁擠的環(huán)境會加劇本病的發(fā)生。

2.2 病理剖檢結果 病肺呈現(xiàn)大面積肺炎以及不同程度的氣腫；尖葉、心葉呈對稱性實變，實變區(qū)大小不一，呈“肉樣變”或“胰變”，硬度增強，病灶與非病變區(qū)有明顯的界限（圖1）。肺門淋巴結腫大、質硬，斷面灰白色，呈髓樣變。

2.3 Mhp血清抗體檢測結果

2.3.1 各豬場血清抗體檢測結果 Mhp抗體檢測結果見表1

表1 Mhp抗體檢測結果

結果顯示：364份血清抗體陽性率為52.2%，13個規(guī)模豬場中陽性豬場有9個，豬場陽性率為69.23%；陽性率最高的豬場感染率達90%，說明部分規(guī)模豬場肺炎支原體感染情況比較普遍，個體感染情況比較嚴重。

2.3.2 不同年齡段Mhp抗體檢測結果（見表2）

表2 不同年齡段Mhp抗體檢測結果

由表2可知，不同年齡段豬Mhp的感染率不同，母豬感染率高達100%，仔豬感染率相對較低。原因可能是母豬呈隱性感染帶菌或感染耐過后母豬在2~4胎后仍可攜帶此菌，哺育期仔豬與帶菌母豬接觸而被感染，此時仔豬從母乳獲得了母源抗體的保護，但母源抗體不能保證新生仔豬免受感染。母源抗體從30天開始衰減，感染仔豬血清抗體逐漸轉陽[5]；即使仔豬未被感染，在斷奶混群后如果與病豬和帶菌豬接觸也易被感染，豬感染肺炎支原體后需2~4周才能檢測到抗體；因此育肥豬和母豬陽性率高于仔豬。

2.4 組織PCR檢測結果 72份病變肺臟進行PCR檢測，結果42份陽性，陽性率為58.33%，陽性率高于血清學檢測結果。部分病變肺臟PCR檢測結果見圖2。

2.5 病理組織學觀察 肺支氣管內有淋巴樣細胞浸潤，夾雜有單核細胞，中性粒細胞及脫落的肺泡上皮細胞（圖3），支氣管周圍淋巴樣細胞增生（圖4），從而使肺泡之間的間隙增厚。

3 討論

豬支原體肺炎是豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）的重要病原之一，廣泛分布于世界各地，其死亡率雖然不高，但由于流行的廣泛性、長期性和消耗性，可使飼料轉化率降低，并引起豬的多種并發(fā)病，是造成養(yǎng)豬業(yè)經濟損失最重要的疾病之一[6]。常呈隱性發(fā)病，多取慢性經過，一旦感染，便難以消除。

血清學診斷雖然可以檢測出Mhp抗體的存在，作為診斷是否感染肺炎支原體的依據(jù)，但并沒有直接檢測其病原，由于個體血清轉陽時間差異較大，因此僅僅依靠血清學診斷來確診其感染支原體還不夠。

利用PCR方法進行豬肺炎支原體的檢測，為確定豬感染率提供了更加精確的方法[7]。本試驗用于PCR檢測病變肺臟的Mhpldh（乳酸脫氫酶）引物，具有種特異性，能與其它種類的支原體（如豬鼻支原體）相區(qū)分[8]，進一步提高了檢測結果的準確性。因此，血清學方法和PCR方法結合可得到滿意的診斷結果。

本研究首次系統(tǒng)地進行了新疆北疆部分規(guī)模豬場Mhp的流行病學調查，初步查明了Mhp的感染情況和流行規(guī)律，為該病的診斷和制定有效防控措施提供了科學依據(jù)。

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[2]農業(yè)部畜牧獸醫(yī)局.NY/T541-2002動物疫病實驗室檢驗采樣方法[S].北京：中國標準出版社，2002.

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[8]Caron J，Ouardani M，Dea S.Diagnosis and differentiation ofmycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis infectionin pigs by PCR amplification of the p36 and p46 genes [J].JClin Microbiol，2000，38（4）：1390-1396.