田鑫，趙輝，王志強，李揚，朱朝陽*

(1.河南大學(xué)淮河醫(yī)院，河南 開封 475000；2.河南大學(xué)藥學(xué)院，河南 開封 475004)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其中非肌層浸潤性膀胱癌(NMIBC)約占膀胱癌初發(fā)患者的70%[1]。經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)(TURBT)是治療NMIBC的首選治療方式，但術(shù)后復(fù)發(fā)率、進展率較高[2]。因此，探索新的預(yù)后標(biāo)志物和有效的基因治療靶點已成為目前研究的熱點。S100蛋白家族是一類鈣結(jié)合蛋白，在細胞分化、細胞周期活動及細胞外基質(zhì)分泌等過程中發(fā)揮重要作用，并與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。近年研究表明[4-5]，S100P在多種惡性腫瘤中異常表達，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。本研究旨在探討S100P與NMIBC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，為NMIBC的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年6月—2016年6月收治的NMIBC患者42 例，并經(jīng)TURBT術(shù)獲得癌組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：原發(fā)性NMIBC(術(shù)后病理學(xué)確診)且接受TURBT術(shù)及術(shù)后膀胱灌注治療；無淋巴結(jié)受侵及遠處轉(zhuǎn)移；臨床隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：肌層浸潤性膀胱癌患者(腫瘤分期≥T2)；術(shù)前接受過放化療者；合并心力衰竭、慢性阻塞性肺病、肝功能不全、腎衰竭者；有腫瘤病史或自身免疫性病史。同期的16 例膀胱囊腫患者行開放性手術(shù)時取的正常膀胱組織作為對照組。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者或家屬均對本研究知情同意。

1.2 方法

統(tǒng)計患者臨床資料：包括年齡、性別、吸煙史、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分級等一般資料。

統(tǒng)計患者術(shù)后并發(fā)癥、術(shù)后導(dǎo)管留置時間及住院時間等術(shù)后短期恢復(fù)指標(biāo)。

Western Blot檢測蛋白的表達：取組織研磨成勻漿，采用蛋白提取試劑盒提取總蛋白，并用二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。取40 μg蛋白樣品在聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分離，然后將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上，并在含有5%脫脂乳的磷酸緩沖液中封閉1 h。加入一抗：S100P抗體(1∶100)和β-actin抗體(1∶2 000)，4 ℃孵育過夜，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的IgG(1∶1 000)二抗，室溫下孵育1 h。洗膜后采用電化學(xué)發(fā)光劑顯色，曝光，使用凝膠圖像分析系統(tǒng)(Bio-RAD)進行灰度分析。目的蛋白表達水平用相對灰度值表示，并將相對灰度值>0.1定義為陽性表達，由此將NMIBC患者分為S100P(+)組和S100P(-)組。

1.3 術(shù)后隨訪

采用電話及門診定期復(fù)查等方式對患者進行隨訪。術(shù)后1 年內(nèi)每3 個月隨訪1 次，1 年后每6 個月隨訪1 次，如出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移則改為3 個月隨訪1 次，隨訪截止至2019年6月。復(fù)查內(nèi)容包括尿常規(guī)、CT及膀胱鏡檢測等，依據(jù)檢查結(jié)果判斷是否復(fù)發(fā)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 S100P蛋白在NMIBC癌組織中的表達

Western Blot檢測S100P蛋白的表達(見圖1)，結(jié)果顯示，NMIBC患者癌組織中S100P蛋白的表達水平為0.44±0.11，明顯高于正常膀胱組織的0.07±0.02(P<0.05)；NMIBC患者中S100P的陽性表達率為79%(33/42)，對照組的陽性表達率為6.25%(1/16)，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 癌組織及正常膀胱組織的S100P表達

2.2 S100P蛋白與臨床資料的關(guān)系

根據(jù)S100P是否為陽性表達將患者分為S100P(+)組和S100P(-)組。兩組患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤數(shù)量及腫瘤大小比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；兩組患者的腫瘤分期和腫瘤分級比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

2.3 S100P蛋白與NMIBC患者術(shù)后短期恢復(fù)的關(guān)系

S100P(+)組患者術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率和住院時間均明顯高于S100P(-)組(P<0.05)，而兩組患者的術(shù)后導(dǎo)管留置時間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。

2.4 S100P蛋白與NMIBC患者無復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系

S100P(+)組和S100P(-)組患者的1 年無復(fù)發(fā)生存率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但S100P(+)組的3 年無復(fù)發(fā)生存率明顯低于S100P(-)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表1 S100P(+)組和S100P(-)組患者臨床資料比較 例(%)

表3 S100P(+)組和S100P(-)組患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存率比較 例(%)

3 討 論

S100家族是多功能信號蛋白家族，可介導(dǎo)鈣離子依賴的信號傳導(dǎo)途徑，參與調(diào)控細胞生長、分化及維持胞內(nèi)外鈣離子平衡等多種生物學(xué)過程[6]。有研究報道多個S100家族成員在腫瘤組織中異常表達[7-8]。S100P是S100蛋白超家族成員之一，可通過與鈣周期結(jié)合蛋白(CaeyBP/SIP)、埃茲蛋白(Ezrin)、晚期糖基化終末產(chǎn)物(RAGE)、S100P結(jié)合蛋白(S100PBPR)等靶蛋白結(jié)合，參與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，從而介導(dǎo)腫瘤的生長、增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移等病理過程[9-10]。有證據(jù)顯示，S100P在多種惡性腫瘤組織中異常表達，與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[11-12]。Wang等[13]研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中S100P陽性率明顯低于良性前列腺增生和正常組織，其表達水平與TNM分期及遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。麥聰?shù)萚14]研究表明，S100P在胃腺癌組織中的陽性表達下調(diào)，與腫瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)。而田鑫等[15]研究發(fā)現(xiàn)，沉默S100P后膀胱癌細胞的增殖抑制率和凋亡率明顯升高，說明S100P與膀胱癌細胞的增殖、凋亡有關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NMIBC癌組織中S100P蛋白的表達明顯高于正常膀胱組織，且NMIBC患者中S100P表達陽性率明顯高于對照組，同時隨著腫瘤分期及腫瘤分級的增加，S100P的陽性表達率明顯升高，表明S100P的高表達可能激活NMIBC組織中的某些腫瘤相關(guān)因子或相關(guān)信號通路，進而參與NMIBC的發(fā)生與發(fā)展，推測S100P可能是NMIBC的潛在標(biāo)志物，可作為NMIBC基因治療的一個候選基因。此外，近年研究表明[16]，S100P與多種惡性腫瘤的預(yù)后有關(guān)。Ge等[17]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中S100P的表達明顯高于正常對照組；S100P在胃癌高表達與TNM分期及預(yù)后相關(guān)，且S100P高表達患者的5 年生存率明顯低于低表達患者。Wang等[18]研究表明，上皮性卵巢癌標(biāo)本中S100P表達明顯高于輸卵管組織和正常卵巢組織，且是總體生存期和無進展生存期的獨立預(yù)后因素。本研究表明，S100P表達與術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率、住院時間及3 年無復(fù)發(fā)生存率有關(guān)，提示S100P與NMIBC患者預(yù)后有關(guān)，但S100P是否是NMIBC患者預(yù)后的獨立影響因素有待進一步的探討。

綜上所述，S100P在NMIBC癌組織中高表達，與腫瘤分期及腫瘤分級密切相關(guān)，且與術(shù)后短期恢復(fù)及3 年無復(fù)發(fā)生存率有關(guān)，推測其可作為NMIBC的臨床診斷和預(yù)后評估指標(biāo)。但是本研究的樣本較少，且為單中心臨床研究，可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在偏倚，后續(xù)還需擴大樣本量進行多中心深入研究。