方芳 達(dá)世儉 湛達(dá)河 劉超愿 劉佳麗

臨床上，宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤之一，全世界范圍內(nèi)發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)[1]。人附睪分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4，HE4)是一種新型的婦科腫瘤標(biāo)志物，主要分布于生殖系統(tǒng)上皮，如附睪、精曲小管、輸精管上皮、輸卵管上皮及子宮內(nèi)膜等，HE4對(duì)卵巢癌、宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌等婦科惡性腫瘤的早期診斷和監(jiān)測具有重要價(jià)值[2]。本研究通過對(duì)比宮頸癌、子宮良性腫瘤患者及正常健康女性血清HE4表達(dá)水平差異，探討血清HE4表達(dá)水平鑒別診斷宮頸良惡性腫瘤的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料自2008年1月至2011年5月，對(duì)我院住院手術(shù)的患者，根據(jù)術(shù)后石蠟切片病理報(bào)告，將患者分為宮頸癌組30例、宮頸良性腫瘤組30例，并選擇同期行體檢的健康女性30例作為對(duì)照組。

1.2 標(biāo)本采集及處理宮頸癌、宮頸良性腫瘤組患者于手術(shù)前，對(duì)照組婦女于體檢時(shí)，均空腹抽取肘靜脈血3～5 ml，室溫下靜置30 min，3000 r/min離心15 min，取上層血清分裝于聚丙烯EP管內(nèi)，儲(chǔ)存于-80℃。

1.3 血清HE4的檢測方法實(shí)驗(yàn)前2 d將待測血清標(biāo)本從-80℃冰中取出，放置于4℃冰箱中緩融。檢測時(shí)室溫保持在20℃～25℃，檢測前將試劑和血清標(biāo)本平衡至室溫，并將試劑和標(biāo)本充分混勻。具體方法如下:清洗微孔板條1次，將HE4標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及待測標(biāo)本各25分別加入微孔中，每孔中加

入100 μl生物素標(biāo)記的HE4抗體，置微孔板振蕩器上室溫孵育1 h。棄掉孔內(nèi)液體，充分清洗3次。每孔中加入100 μl示蹤工作液，置微孔板振蕩器上室溫孵育1 h。棄掉孔內(nèi)液體，充分清洗6次。每孔中加入100 μl辣根過氧化物酶-四甲基聯(lián)苯胺(HRP-TMB)底物液，加液應(yīng)盡可能快速，置微孔板振蕩器上室溫、避光孵育30 min。加入100 μl止液，混勻，立即在酶標(biāo)儀上于405 nm處測定吸光度值。采用二項(xiàng)式擬合曲線法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，質(zhì)控品復(fù)孔檢測結(jié)果的平均值在試劑瓶標(biāo)示值范圍內(nèi)認(rèn)為血清HE4檢測結(jié)果有效，行重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果的可靠性。血清HE4正常閾值為為0～150 pmol/L[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。血清HE4水平以中位值表示，以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)。制作受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線，ROC曲線最左上方的點(diǎn)即約登指數(shù)(Yonden index)最大的點(diǎn)的測定值，計(jì)算曲線下面積(area under the curve，AUC)、敏感度和特異度，以反映診斷的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

2.1 血清HE4水平差異比較宮頸良性腫瘤組和正常健康對(duì)照組血清HE4中位值均在正常范圍內(nèi)，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);宮頸癌組患者血清HE4中位值明顯高于正常值，與宮頸良性腫瘤組和正常健康對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。宮頸癌組患者血清HE4陽性率為80.0%，顯著高于子宮良性腫瘤組和正常健康對(duì)照組陽性率(均P＜0.05)。見表1。

表1 各組血清HE4中位值和陽性率(%)

2.2 血清HE4水平對(duì)宮頸癌的診斷效能ROC曲線分析結(jié)果表明，以宮頸良性腫瘤組+正常健康對(duì)照組為參照人群，血清HE4表達(dá)水平在114.8 pmol/L時(shí)診斷宮頸癌的Youden指數(shù)最大為0.657，AUC為0.827，其敏感度和特異度分別為73.1%和83.4%。見圖1。

圖1 血清HE4診斷宮頸癌的ROC曲線

3 討論

血清HE4是一種小分子分泌型糖蛋白，是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤標(biāo)志物，對(duì)卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌的早期診斷和監(jiān)測具有重要價(jià)值[4]。HE4基因最早在人附睪上皮細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，它定位于染色體20q12～q13.1上，全長約11.78 kb，編碼124個(gè)氨基酸的HE4蛋白前體，其編碼的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是附睪特有的、與精子成熟有關(guān)的蛋白質(zhì)[5]。國外學(xué)者采用PCR反應(yīng)、Norihem印跡雜交、免疫組化、基因芯片和組織芯片等方法對(duì)HE4蛋白進(jìn)行了組織定位，發(fā)現(xiàn)其主要分布于生殖系統(tǒng)上皮，如附睪、曲細(xì)精管、輸精管上皮、輸卵管上皮和子宮內(nèi)膜上皮等[5];此外，在其他一些組織的導(dǎo)管和腺上皮也有表達(dá)，其中支氣管和腮腺表達(dá)較高，乳腺導(dǎo)管、甲狀腺、腎遠(yuǎn)曲小管、前列腺、結(jié)腸黏膜部分陽性[6]。

本研究通過評(píng)價(jià)了宮頸癌患者、宮頸良性腫瘤患者和正常女性的血清HE4中位表達(dá)水平和陽性率差異，并采用ROC曲線探討了血清HE4診斷宮頸癌的效能。研究結(jié)果表明，宮頸癌組患者血清HE4中位值明顯高于宮頸良性腫瘤組和正常健康對(duì)照組，其血清HE4陽性率高達(dá)80.0%，亦顯著高于子宮良性腫瘤組和正常健康對(duì)照組陽性率。此外，本研究以宮頸良性腫瘤組+正常健康對(duì)照組作為參照人群，應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)了血清HE4診斷宮頸癌的效能，結(jié)果表明血清HE4表達(dá)水平在114.8 pmol/L時(shí)診斷宮頸癌的Youden指數(shù)最大可達(dá)0.657，AUC為0.827，其敏感度和特異度分別為高達(dá)73.1%和83.4%。

綜述所述，我們可以得到以下初步結(jié)論:血清HE4表達(dá)水平是鑒別診斷宮頸良惡性腫瘤的有效工具，其敏感度和特異度相對(duì)較高，可有助于臨床早期診斷宮頸癌。由于本研究入組病例較少、血清HE4檢測方法局限性、數(shù)據(jù)描述等方面存在的欠缺，以上結(jié)論尚需更多大樣本臨床研究加以證實(shí)。

[1]Purdie DM，Green AC.Epidemiology of endometrial cancer.Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol，2001，15(3):341-354.

[2]楊彩虹，張雪玉.人附睪蛋白4在婦科惡性腫瘤中的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述，2010，16(20):3081-3083.

[3]Drapkin R，von Horsten HH，Lin Y，et al.Human epididymis protein 4(HE4)is a secreted glycoprotein that is overexpressed by serous and endometrioid ovarian carcinomas.Cancer Res，2005，65(6):2162-2169.

[4]Galgano MT，Hampton GM，F(xiàn)rierson HF Jr.Comprehensive analysis of HE4 expression in normal and malignant human tissues.Mod Pathol，2006，19(6):847-853.

[5]Montagnana M，Lippi G，Ruzzenente O，et al.The utility of serum human epididymis protein 4(HE4)in patients with a pelvic mass.J Clin Lab Anal，2009，23(5):331-335.

[6]Abdel-Azeez HA，Labib HA，Sharaf SM，et al.HE4 and mesothelin:novel biomarkers of ovarian carcinoma in patients with pelvic masses.Asian Pac J Cancer Prev，2010，11(1):111-116.