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        西洋參莖葉皂苷對局灶性腦缺血大鼠血清中S-100β含量的影響

        2011-08-11 07:49:52魯美君關(guān)利新趙鑫王懷剛朱丹朱孝娟蘇云明
        中醫(yī)藥信息 2011年5期
        關(guān)鍵詞:西洋參皂苷腦缺血

        魯美君,關(guān)利新,趙鑫,王懷剛,朱丹,朱孝娟,蘇云明

        (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040;2.牡丹江醫(yī)學(xué)院,黑龍江 牡丹江 157000;3.齊齊哈爾市中醫(yī)院,黑龍江 齊齊哈爾 161000;4.哈爾濱醫(yī)科大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150081)

        腦血管病目前在全球疾病的死因中居第3位。根據(jù)中國衛(wèi)生部的統(tǒng)計(jì),在全國主要城市中,腦血管病的死亡率居第2位,有的城市甚至是第1位,發(fā)病率高達(dá)125~180個/10萬。我們國家的腦血管病從死亡率上看是全世界最高的國家,大概中國每年有150萬人死于腦卒中。隨著人口老齡化速度的加快和人群預(yù)期壽命的延長,腦血管病發(fā)病率和患病率呈逐年增高的趨勢。

        西洋參莖葉皂苷(PQS)是從西洋參莖葉中提取的總皂苷。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn),其具有多方面的藥理作用。本實(shí)驗(yàn)通過線栓法建立大鼠局灶性腦缺血的模型[1-2],通過ELISA法來檢測腦缺血大鼠血清中 S-100β的含量的方法來探討西洋參莖葉皂苷對腦缺血的保護(hù)作用。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料

        雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量(300±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。西洋參莖葉皂苷由牡丹江醫(yī)學(xué)院藥理教研室自制。尼莫地平片(091201,西安博愛制藥有限公司);酶聯(lián)免疫試劑盒(美國R&D公司);酶標(biāo)儀(奧地利,anthos 2010);CFAP酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(南京建成)。

        1.2 動物分組及給藥

        Wistar雄性大鼠隨機(jī)分成高、低劑量組、西藥陽性對照組,模型對照組及假手術(shù)組5組。高劑量給予西洋參莖葉皂苷100mg/kg,低劑量給予西洋參莖葉皂苷50mg/kg,陽性對照組給予尼莫地平片21.6mg/kg,模型對照組及假手術(shù)組給予等容積生理鹽水。各組均灌胃給藥,連續(xù)7天,在末次給藥后0.5h,對大鼠實(shí)施右側(cè)大腦中動脈阻塞模型手術(shù)。

        1.3 右側(cè)大腦中動脈阻塞(MCAO)模型制作

        線栓的制備:單股尼龍線,直徑 0.23mm,長30mm,經(jīng)酒精燈燒灼,使其一端形成光滑圓球狀,制成線栓,經(jīng)75%酒精消毒后備用。

        水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。再將大鼠四肢固定于手術(shù)臺上,頸部備皮,常規(guī)消毒。在大鼠頸正中部切開,手術(shù)顯微鏡下分離右側(cè)頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)、頸內(nèi)動脈(ICA)以及 ECA和ICA的分支,并仔細(xì)分離迷走神經(jīng)(神經(jīng)節(jié)的刺激和損傷會引起大鼠呼吸驟阻)在ECA靠近ECA及頸內(nèi)動脈(ICA)分叉處結(jié)扎ECA,在已分離的CCA上結(jié)扎其近心端,遠(yuǎn)心端用動脈夾阻斷血流,并在CCA上預(yù)置一根縫合線。在CCA上位于動脈夾和結(jié)扎處之間剪一“V”形切口。將線栓球面端插入CCA上的切口,打開ICA上預(yù)置的動脈夾,將線栓經(jīng)CCA插入ICA內(nèi),向前徐進(jìn),向上插至MCA起始部,稍遇阻力即停止徐進(jìn),此時自ECA、ICA分叉處計(jì)起,線栓推進(jìn)長度約為18~20mm,造成MCA血供阻斷。將預(yù)置在CCA上的縫合線扎緊,防止出血和栓子滑出。復(fù)位組織,逐層縫合皮膚,術(shù)畢。術(shù)中大鼠出現(xiàn)呼吸困難、出血過多者棄之。

        假手術(shù)組手術(shù)時,只分離頸總動脈,但是不插入尼龍線,復(fù)位組織,逐層縫合皮膚。

        1.4 神經(jīng)功能缺損評分

        大鼠腦缺血的判定及研究納入標(biāo)準(zhǔn)采取五分法評分,于MCAO術(shù)后(大鼠意識恢復(fù)后30min)對腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺陷進(jìn)行評分。

        0分:無神經(jīng)功能障礙;1分:左前爪不能充分外展;2分:行走時朝左轉(zhuǎn)圈;3分:行走時朝左傾倒;4分:不能自主行走伴意識障礙。

        MCAO術(shù)后計(jì)分在1~3分者納入研究。各組選取MCAO術(shù)后合格大鼠10只,納入研究。

        大鼠術(shù)后24h取大鼠血液,離心后取血清。用酶標(biāo)儀測定血清中S-100β的含量。酶聯(lián)免疫試劑盒購自美國R&D公司,檢測儀器采用奧地利生產(chǎn)的anthos 2010酶標(biāo)儀。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,其組間比較采用單因素方差分析。

        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        本實(shí)驗(yàn)觀察了24h以后,PQS對MCAO模型大鼠血清中S-100β含量的影響。結(jié)果顯示,在手術(shù)后模型組與假手術(shù)組比較,血清中的S-100β有顯著增加,其差異具有顯著性意義(P<0.01)。同時高、低劑量組及陽性對照組與模型組比較,血清中的S-100β蛋白均有不同程度的減少,高劑量組、低劑量組和陽性對照組與模型組比較,具有顯著性意義(P<0.05)。

        Table.1PQS MCAO rats on the content of S-100β(s)

        Table.1PQS MCAO rats on the content of S-100β(s)

        注:Compared with model group,aP < 0.05;Compared with sham group,dP <0.01。

        Group n Dose(mg·kg-1)S -100β(ng/ml)Model 10 等體積水 12.07±1.61d Sham 10 等體積水 0.70±0.39 PQS(H)10 100 9.79 ±2.14a PQS(L)10 50 10.29 ±1.49a Nim 10 21.6 9.42 ±1.92a

        3 討論

        S-100β蛋白是神經(jīng)組織蛋白的一種,是More于1965年首次發(fā)現(xiàn),因其在中性條件下能溶解于100%飽和硫酸銨中而得名。它是一種小分子酸性的鈣離子結(jié)合蛋白,分子量21 000道爾頓,S-100β蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的分布十分廣泛,高濃度存在于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或Shcwnan細(xì)胞中,被認(rèn)為是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白[3]。S-100β蛋白具有神經(jīng)營養(yǎng)作用,能激活腦果糖1,6二磷酸醛縮酶和葡萄糖磷酸變位酶,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的能量代謝,促進(jìn)神經(jīng)的生長和損傷后的修復(fù)[4]。并能通過微絲、微管等骨架成分直接或間接的相互作用以維持星形膠質(zhì)細(xì)胞的完整性。急性腦缺血時,大量的腦膠質(zhì)細(xì)胞死亡會導(dǎo)致S-100β蛋白漏出到組織間液,同時急性腦缺血導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的死亡,血-腦屏障受損害,S-100β蛋白就越過血-腦屏障,自受損傷的腦組織釋放,這就提示了在血漿中測定S-100β蛋白能用來監(jiān)測腦缺血的病情程度及療效。本實(shí)驗(yàn)通過酶聯(lián)免疫法測定了MCAO模型大鼠血清中S-100β的含量,結(jié)果顯示,PQS給藥組大鼠血清中S-100β的含量低于模型組,說明了PQS能減輕大鼠的腦缺血損傷。在臨床研究中我們認(rèn)為,急性腦缺血早期診斷和治療特別是超早期溶栓治療是提高療效,降低致殘率最有效的方法。但傳統(tǒng)的顱腦CT對腦缺血的診斷往往需要發(fā)病后24~48h才有陽性結(jié)果,有時會延誤治療。而S-100β在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷時即出現(xiàn)在體液中,并與病變程度相關(guān)。這使我們對血清中S-100β的測定可以成為急性腦缺血早期診斷以及愈后程度的標(biāo)志。

        [1]白云,顏培宇,梁穎.活血熄風(fēng)方對MCAO局灶性腦缺血模型大鼠腦皮質(zhì)ICAM-1蛋白表達(dá)的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2011,39(1):13-15.

        [2]王懷剛,關(guān)利新,趙鑫,等.西洋參莖葉皂苷對局灶性腦缺血后大鼠血清中GFAP表達(dá)的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2011,39(4):17-19.

        [3]唐紅霞,李文輝,施榮富,等.戊四氮致癎大鼠海馬S-100β蛋白變化及其相關(guān)性研究[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2004,17(3):221 -222.

        [4]張曉琴.急性腦梗死患者血清肝細(xì)胞生長因子S-100β蛋白變化的意義[J].鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2008,27(5):405.

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