黃凱文，陳劍梅，蘇寧，郭潔文，梁錦詩，劉若軒，吳偉文（.南方醫(yī)科大學(xué)附屬順德第一人民醫(yī)院，佛山市 5800；.廣州市中醫(yī)醫(yī)院，廣州市 500；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州市 50405）

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指除酒精外和其他明確損肝因素（如遺傳-環(huán)境-代謝-應(yīng)激相關(guān)因素等）所致的、以彌散性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，目前NAFLD全球發(fā)病率為20%～33%，由肥胖或2型糖尿病所致達(dá)75%，且有逐年增加的趨勢[1，2]，目前對(duì)其尚無有效治療藥物。有研究[3]表明，雞骨草具有利濕退黃、清熱解毒、疏肝止痛之功效，本研究采用高脂飲食-四氯化碳（CCl4）復(fù)制脂肪肝大鼠模型，觀察雞骨草醇提物對(duì)病鼠肝功能和脂肪肝的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器

7170型全自動(dòng)生化分析儀型（日本日立公司）；TB1020型切片機(jī)、RM2135型脫水機(jī)（德國Leica公司）；CX21型顯微鏡（日本Olympus公司）；RE252A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（西安德派生物科技有限公司）。

1.2 試藥

雞骨草（廣州致信藥業(yè)有限公司，批號(hào)：090110）經(jīng)廣東省藥物研究所中藥藥理室邱光清教授鑒定為真品；CCl4（上海聯(lián)試化工試劑有限公司，批號(hào)：000220）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒（批號(hào)：090121）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒（批號(hào)：090116）均由上海北海生物技術(shù)工程有限公司提供。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，♀♂兼半，體重180～200 g，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（動(dòng)物合格證號(hào)：0067696）。

2 方法

2.1 試藥的制備

用FW100型高速萬能粉碎機(jī)粉碎雞骨草，取20 g粉末置于索氏提取器中，加200 mL75%的乙醇在90℃水浴中回流提取3 h，取出提取液，再次用200 mL75%的乙醇在90℃水浴中回流提取3 h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至20 mL，即為試藥（液）；40%CCl4橄欖油溶液。

2.2 模型的復(fù)制和分組、給藥

參照文獻(xiàn)[4]將50只SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照（等容生理鹽水）、模型（等容生理鹽水）和雞骨草醇提物高、中、低劑量（40、30、20 g·kg-1）組。正常飼養(yǎng)1周后開始復(fù)制模型。正常對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)，模型和雞骨草醇提物高、中、低劑量組大鼠于第1～2周給予高脂低蛋白飼料（79.5%玉米粉、20%豬油、0.5%膽固醇）飼養(yǎng)，并配合CCl4溶液sc。首次以純CCl4溶液5 mL·kg-1sc，其后用40%CCl4橄欖油溶液3 mL·kg-1sc，每周2次，連續(xù)2周。此后，所有大鼠均采用普通飼料喂養(yǎng)，自由飲食。復(fù)制模型成功后，ig給藥，每天1次，連續(xù)2周。于末次給藥后禁食不禁水24 h，稱大鼠體重，眼眶靜脈叢采血，低速離心后取血清，－20℃貯藏，備用。全自動(dòng)生化儀檢測血清中AST、ALT含量。隨后斷頸處死大鼠，取肝臟，吸干表面血液后稱重，計(jì)算肝臟系數(shù)；取肝左葉同部位肝組織1塊（0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm），置于4%多聚甲醛中固定，做常規(guī)HE染色，光鏡下進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 動(dòng)物存活情況

除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠在復(fù)制模型過程中出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)減少、食欲下降、皮毛欠光滑、體重增長緩慢等，50只大鼠共死亡7只，其中喂養(yǎng)過程中ig死亡3只，嚴(yán)重肝損傷致死4只，最后存活大鼠數(shù)量為：正常對(duì)照組9只，模型組8只，雞骨草醇提物低劑量組8只，雞骨草醇提物中劑量組9只，雞骨草醇提物高劑量組7只，其病死率分別為10%、20%、20%、10%、30%。

3.2 雞骨草醇提物對(duì)模型大鼠血液生化指標(biāo)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中AST、ALT含量顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，雞骨草醇提物高、中、低劑量組大鼠血液AST、ALT含量顯著降低，AST/ALT值顯著升高（P＜0.01），提示雞骨草醇提物可降低CCl4+高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝大鼠血清中AST、ALT活性，減輕肝細(xì)胞損傷程度。雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影響見表1。

表1 雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影響（±s）Tab 1 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on the serum levels of AST and ALT in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

表1 雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝血清AST、ALT含量的影響（±s）Tab 1 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on the serum levels of AST and ALT in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

組別正常對(duì)照組模型組雞骨草醇提物低劑量組雞骨草醇提物中劑量組雞骨草醇提物高劑量組n 9 8 8 9 7劑量/g·kg-1-- 2 0 30 40 AST/U·L-1 137.50±19.60 184.27±16.37＊139.43±23.55#135.67±14.12#134.15±32.87#ALT/U·L-1 36.20±14.85 68.20±13.51＊40.14±10.64#38.96±6.50#37.86±6.58#AST/ALT 3.79±0.59 2.70±0.64＊3.47±0.67#3.48±0.62#3.54±0.94#

3.3 雞骨草醇提物對(duì)脂肪肝大鼠肝臟系數(shù)的影響

肝臟系數(shù)＝肝臟重量/大鼠體重（g）×100%。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟系數(shù)顯著增加（P＜0.05）；與模型組比較，雞骨草醇提物高、中、低劑量組均能顯著降低大鼠肝臟系數(shù)（P＜0.05）。雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝的肝臟系數(shù)的影響見表2。

表2 雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝的肝臟系數(shù)的影響（±s）Tab 2 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on liver index in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

表2 雞骨草醇提物對(duì)CCl4致大鼠脂肪肝的肝臟系數(shù)的影響（±s）Tab 2 Influence of ethanol extraction of A.cantoniensis on liver index in rats with fatty liver induced by CC（l4±s）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05vs.normal control group：＊P＜0.05；vs.model group：#P＜0.05

組別正常對(duì)照組模型組雞骨草醇提物低劑量組雞骨草醇提物中劑量組雞骨草醇提物高劑量組n 9 8 8 9 7劑量/g·kg-1 2 mL·kg-1 2 mL·kg-1 20 30 40肝臟系數(shù)0.028±0.003 0.039±0.003＊0.034±0.002#0.032±0.003#0.031±0.004#

3.4 大鼠肝組織形態(tài)學(xué)觀察

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肝臟發(fā)生不同程度的肝細(xì)胞損傷及脂肪變性，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量脂肪空泡。與模型組比較，雞骨草醇提物高、中、低劑量組大鼠肝細(xì)胞胞漿內(nèi)脂肪空泡明顯減少，肝小葉結(jié)構(gòu)比較清楚，肝細(xì)胞索基本正常，提示雞骨草可減輕肝細(xì)胞損傷及脂肪變性程度。大鼠肝組織形態(tài)學(xué)見圖1。

圖1 大鼠肝組織形態(tài)學(xué)觀察（×200）Fig 1 Histomorphological observation of rats liver（×200）

4 討論

NAFLD是由于過量脂肪向肝細(xì)胞內(nèi)滲透、堆積形成脂肪浸潤變化，“二次打擊”學(xué)說是其較為公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制，“初次打擊”是胰島素抵抗導(dǎo)致肝臟的脂肪沉積，“二次打擊”是在此基礎(chǔ)上發(fā)生的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷導(dǎo)致肝臟炎癥，脂肪性肝炎的持續(xù)存在或其他因素的打擊可造成肝臟細(xì)胞外基質(zhì)合成大于降解，形成進(jìn)展性纖維化[5，6]。CCl4在肝內(nèi)經(jīng)細(xì)胞色素P450分解活化，生成2個(gè)活性自由基及一系列氧活性物，誘導(dǎo)膜系統(tǒng)發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，大量降解膜磷脂，破壞生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，增高膜的通透性，肝細(xì)胞中的AST、ALT大量進(jìn)入血液[7]。

雞骨草成分復(fù)雜，具有降血脂、抗脂肪肝、護(hù)肝、利膽、抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫、抗氧化、清除自由基、抗腫瘤和抗輻射等藥理作用，臨床主要用于治療各類肝膽疾病，對(duì)急慢性肝炎、病毒性肝炎、膽囊炎、膽石癥、脂肪肝均有良效[8]。本研究結(jié)果亦顯示其能降低病大鼠血清中AST、ALT含量及肝臟系數(shù)，減輕其肝細(xì)胞損傷及脂肪變性程度，具有較強(qiáng)的抗肝損傷及緩解肝臟脂肪沉積的作用，證實(shí)雞骨草可改善高脂飼料+CCl4所致大鼠的脂肪肝，但有關(guān)其有效部位或成分、藥理作用機(jī)制和量效關(guān)系等尚需作進(jìn)一步研究。

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