宗序玲 孟國(guó)梁 黃金華*

（1 如皋人民醫(yī)院藥劑科，江蘇 如皋 225000；2 南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南通 226001）

冬蟲(chóng)夏草為麥角菌科真菌冬天寄生在蛾科昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)體內(nèi)到夏天形成的干燥子座和蟲(chóng)體的復(fù)合體，簡(jiǎn)稱蟲(chóng)草；主要成分為蟲(chóng)草多糖，是從冬蟲(chóng)夏草菌絲中提取的；現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)，蟲(chóng)草多糖具有多種藥理學(xué)活性，如提高免疫活性、抗腫瘤、抗病毒、降血糖等；靈芝為靈芝菌科靈芝屬真菌的總稱，通常所稱靈芝是指靈芝屬中赤芝的子實(shí)體部分，靈芝多糖是靈芝中的主要活性物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老以及活血化瘀等多種生物活性；蟲(chóng)草靈芝合劑以蟲(chóng)草多糖為主，佐以靈芝多糖等精制而成。

本研究通過(guò)觀察蟲(chóng)草靈芝合劑對(duì)小鼠肝損傷的影響，并初步探討其對(duì)肝損傷有預(yù)防和保護(hù)作用機(jī)制，以期為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康ICR小鼠，體質(zhì)量18～22g，雌雄兼用，由南通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK[（蘇）2002-0019]；蟲(chóng)草靈芝合劑（江蘇南通安惠生物科技公司，批號(hào)090918），以0.4%CMC配置成溶液；四氯化碳油劑（宜興市第二化學(xué)試劑廠，批號(hào)20060701）。

1.2 處理

小鼠摘眼球取血，迅速離心，取上層血清冰箱4℃保存，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST），丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）。取血同時(shí)切取小鼠肝組織放到10%中性福爾馬林中固定處理，其余肝組織置液氮冷凍保存，再經(jīng)石蠟包埋切片，進(jìn)行HE染色觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 方法與結(jié)果

2.1 蟲(chóng)草靈芝合劑對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的預(yù)防作用

取 ICR小鼠40只，雌雄兼?zhèn)?，隨機(jī)分蟲(chóng)草靈芝合劑低、中、高劑量組和正常對(duì)照組4組，每組10只。從分組后第1天起給藥，低、中、高劑量蟲(chóng)草靈芝合劑灌胃，劑量分別為（40、80、160mg/kg）；正常對(duì)照組以生理鹽水灌胃，到第5天每天上午各組繼續(xù)給藥，第5天下午小鼠背部皮下注射0.1%CCl4溶液0.lmL/10g（體質(zhì)量），第6天上午稱完小鼠體質(zhì)量后摘眼球取血清，置4℃冰箱保存；隨即剖腹取出肝臟，稱重后于10%福爾馬林溶液中固定，以做組織學(xué)觀察。結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1可知，蟲(chóng)草靈芝合劑中劑量與高劑量組三種酶皆非常顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。用藥的高劑量組小鼠體質(zhì)量較用藥前有顯著增加；正常組及中劑量組也有增加，但于對(duì)照組比統(tǒng)計(jì)不顯著。對(duì)照組體質(zhì)量無(wú)變化，用藥3組每l0g體質(zhì)量的肝重皆無(wú)顯著性差異。

2.2 蟲(chóng)草靈芝合劑對(duì)CCl4致肝損傷小鼠的治療作用

取ICR小鼠50只，雌雄兼?zhèn)洌S機(jī)分為5組，分別為蟲(chóng)草靈芝合劑低、中、高劑量組、對(duì)照組和正常組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前稱體質(zhì)量；給藥組及對(duì)照組皆從實(shí)驗(yàn)第1天起從小鼠背部皮下注射1%CCl4油溶液0.lmL/10g（體質(zhì)量）。同日下午給藥組以蟲(chóng)草靈芝合劑灌胃，其三組劑量分別為（40、80、160mg/kg）；對(duì)照組以生理鹽水灌胃，第2～8天每天上午繼續(xù)給藥，第5天下午再重復(fù)注射CCl4一次，第8天上午稱小鼠體質(zhì)量后摘眼球取血清，用賴氏法測(cè)定ALT等三種酶。隨后剖腹取肝臟，稱重后于10%福爾馬林溶液中固定，以備組織學(xué)觀察。正常組小鼠不給任何藥物，從1～8d以相同條件飼養(yǎng)，至第8天的試驗(yàn)同其他組。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 蟲(chóng)草靈芝合劑對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的治療作用(n=10，±s)

表1 蟲(chóng)草靈芝合劑對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的治療作用(n=10，±s)

*P＜0.01與對(duì)照組比較；△P＜0.01與實(shí)驗(yàn)前比較

對(duì)照組 341.3±135.5 149.8±78.6 4.7±37 25.3±1.1 27.6±2.0 0.59±0.06低劑量組 338.9±132.6 142.9±39.7 1.7±1.0 24.8±1.4 25.9±1.8 0.57±0.06中劑量組 202.3±44.1* 88.6±20.3* 1.2±0.7* 24.6±1.7 26.9±2.0△ 0.57±0.05高劑量組 145.6±37.3* 48.3±18.6* 0.9±0.5* 25.3±2.0 28.8±2.1△ 0.58±0.06

表2 對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的預(yù)防作用（n=10，±s）

表2 對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的預(yù)防作用（n=10，±s）

*P＜0.01與對(duì)照組比較；△P＜0.01與實(shí)驗(yàn)前比較

對(duì)照組 338.8±136.4 153.6±81.3 4.6±3.7 28.6±1.2 29.2±1.4 0.60±0.06正常組 78.3±57.2 14.3±9.1 0.7±0.6 27.9±1.4 28.8±1.9 0.59±0.05低劑量組 324.6±134.8 129.3±40.1 4.4±3.5 26.2±1.8 27.3±1.8 0.60±0.06中劑量組 213.8±51.1* 92.7±34.3* 2.2±0.9* 25.4±1.7 27.8±1.9△ 0.60±0.05高劑量組 155.6±53.3* 55.2±17.9* 1.0±0.8* 25.1±1.6 27.1±1.8△ 0.59±0.06

從表2可見(jiàn)，對(duì)照組的ALT、GGT兩種酶約為正常組的幾倍，蟲(chóng)草靈芝合劑低、中、高3個(gè)劑量組的AST 、ALT、GGT皆低于對(duì)照組，經(jīng)t檢驗(yàn)除低劑量組與對(duì)照組比無(wú)顯著性差別外，中與高劑量組與正常組比有顯著性增加（P＜0.01） 且各劑量組之間存在量效關(guān)系；正常組，對(duì)照組與低劑量組的實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量無(wú)顯著變化，中、高2個(gè)劑量組實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量有所增加，與實(shí)驗(yàn)前差別非常顯著（P＜0.01）。各組之間以每l0g體質(zhì)量所計(jì)的肝重則無(wú)顯著性差異，

2.3 病理檢查

實(shí)驗(yàn)各組的小鼠肝臟用10%福爾馬林液固定后，經(jīng)石蠟包埋病理切片，再經(jīng)HE染色后鏡檢的結(jié)果如下：對(duì)照組小鼠因CC14的損傷其肝小葉結(jié)構(gòu)嚴(yán)重紊亂，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)嚴(yán)重的脂肪變性，纖維組織顯著增生，纖維間隔大量形成，肝細(xì)胞中央帶出現(xiàn)出血性壞死，肝小葉整體呈彌漫性水樣性；蟲(chóng)草靈芝合劑的低劑量組與對(duì)照組相似，未見(jiàn)用藥后有明顯改善；但蟲(chóng)草靈芝合劑中劑量組只有輕度水樣性病變，且較少有出血性壞死，纖維化明顯改善，顯示肝組織結(jié)構(gòu)正逐步接近正常組；蟲(chóng)草靈芝合劑大劑量組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)則出現(xiàn)明顯改善，小葉分布均勻，多呈放射狀分布，匯管區(qū)內(nèi)無(wú)出血性壞死。

3 討 論

本研究運(yùn)用四氯化碳的肝損傷小鼠經(jīng)典模型，配以3種劑量的蟲(chóng)草靈芝合劑給予灌胃治療，結(jié)合血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草靈芝合劑能夠明顯降低3種指標(biāo)酶的血清含量，表明其對(duì)受損肝臟有治療作用;此外從組織病理切片上發(fā)現(xiàn)用藥組的肝纖維化病變明顯改善，并且呈現(xiàn)劑量相關(guān)性。

大量研究顯示[1-3]，肝纖維化的形成 MMP-2是肝臟最重要的致肝纖維化因子，其在肝纖維化中的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成并抑制其降解；而靈芝多糖能通過(guò)減輕 MM-2對(duì)肝臟正?；啄さ钠茐模瑥亩g接抑制HSC的激活，阻止肝損傷的進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展。

國(guó)內(nèi)外對(duì)冬蟲(chóng)夏草已經(jīng)有較深入的研究[4-7]，發(fā)現(xiàn)天然冬蟲(chóng)夏草具有看氧化作用，可通過(guò)清除體內(nèi)羥自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少膽固醇沉積，從而減輕肝臟纖維化及對(duì)其臟器細(xì)胞起保護(hù)作用。

蟲(chóng)草靈芝合劑主要是以冬蟲(chóng)夏草和靈芝為主的合劑，此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其具有明顯的抗肝損傷的作用，可以預(yù)防和抗肝纖維化，希望通過(guò)進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)來(lái)應(yīng)用于臨床。

[1] 王明宇,劉強(qiáng),車慶明,等.蟲(chóng)草靈芝合劑類化合物對(duì)3種小鼠肝損傷模型的影響[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2000,35(5):326-329.

[2] 徐濟(jì)良,羅琳,陳潔,等.靈芝三萜對(duì)大 鼠肝纖 維化 的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(9):694-697.

[3] 李敏,仇雯倩,黃金華.靈芝三萜對(duì)小鼠肝損傷的預(yù)防和保護(hù)作用研究現(xiàn)代[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009,18(32):3933.

[4] Komoda Y,Shmize M,Sonoda Y,et al.Ganoderic acid and itsderivatives as cholesterol synthesis inhibitors[J].Chem PharmBull,1989,37(2):531-533.

[5] Zhu M,Chang Q,Wong LK,et al.Triterpene antioxidantsfrom Ganoderma lucidm[J].Phytother Res,1999,13(6):529-531.

[6] Kanzier S,Lohse AW,keii A,et al.TGF-betai in liver fibrosis:an induchic transgenic mouse model to study liver fibrogrnesis[J].AM J Physiol,1999,276(4):1059-1065.

[7] 李保森,游紹莉,趙志海,等.實(shí)驗(yàn)性肝纖維化形成過(guò)程中幾種基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的研究[J].世界華人消化雜志,2003,11(4):483-485.