楊 亮 ，郭 晶 ，范寶成

(1.貴陽昊臻藥物開發(fā)有限公司，貴州 貴陽 550025; 2.貴陽市宏信藥業(yè)職業(yè)學校，貴州 貴陽 550025)

飛龍掌血為蕓香科植物飛龍掌血 Toddalia asiatica(L.)Lam.的干燥根皮，味微苦、辛、溫，具有祛風止痛、散瘀止血、消腫解毒的功效，用于治療風濕痹痛、胃痛、跌打損傷、吐血、刀傷出血、痛經(jīng)、閉經(jīng)、牙齦出血、口舌生瘡[1]。關于其指紋圖譜的研究至今尚未見報道。本研究旨在通過對其指紋圖譜研究，為飛龍掌血藥材建立嚴格的質(zhì)量控制方法，從而為其臨床療效提供保證。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括UV－200Ⅱ型紫外可變波長檢測器、P－200高壓恒流泵(大連依利特科學儀器有限公司);Easy－3000色譜工作站(中國科學院，浙江大學);TU－1800SPC型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);AUW120D型電子天平(日本島津株式會社)，101－2型電熱鼓風恒溫干燥箱(上海市崇明實驗儀器廠);AS3120型超聲清洗儀(天津津騰實驗儀器廠)。乙腈(色譜純，天津科密歐化學試劑公司);磷酸(分析純，貴陽磷山化工集團);白屈菜紅堿對照品(純度為97.3%，中國藥品生物制品檢定所)。飛龍掌血藥材分別采自貴州省的貴陽高坡鄉(xiāng)、息烽縣、織金縣、興義市、大方縣及羅甸縣，見表1。

表1 飛龍掌血藥材的來源、采集時間

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:迪馬 C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1% 磷酸水溶液(20 ∶80);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:10 μL;測定波長:221 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取白屈菜紅堿對照品0.010 43 g，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得0.104 3 g/L的對照品母液;精密量取此溶液0.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理制成約為0.006 g/L的對照品溶液。取飛龍掌血藥材粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐瓶中，加甲醇100 mL，精密稱定，超聲提取30 min，稱重，用甲醇補足質(zhì)量，濾過，得供試品溶液。

2.3 方法學考察

精密度試驗:取飛龍掌血藥材粉末(批號為HZZ20090001)，依法制備供試品溶液，連續(xù)進樣6次。結(jié)果面積百分比不低于10%的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取飛龍掌血藥材粉末(批號為HZZ20090001)，依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12，24 h 時進樣測定。結(jié)果面積百分比不低于10% 的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批樣品粉末(批號為HZZ20090001)5份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果面積百分比不低于10%的共有峰相對峰面積的 RSD＜2%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.4 指紋圖譜建立

2.4.1 共有指紋峰標定

取不同產(chǎn)地和批次的樣品(11批)，依法制備供試品溶液，進樣，繪制指紋圖譜。采用國家藥典委員會推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)的操作規(guī)范軟件(版本2004A)，標定其中5個色譜峰為共有指紋峰(圖1)，其中4號峰為參照物質(zhì)白屈菜紅堿峰(圖2)，其余共有峰與4(S)號峰相對保留時間與相對峰面積見表2及表3。

圖1 飛龍掌血藥材指紋圖譜

2.4.2 相似度評價

根據(jù)共有指紋峰的標定結(jié)果，計算相似度。11批飛龍掌血藥材與對照指紋圖譜的相似度結(jié)果均大于0.90，表明各批次藥材具有良好的一致性，本方法可用于綜合評價藥材的整體質(zhì)量。

圖2 白屈菜紅堿對照品圖譜

表2 飛龍掌血藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對保留時間

表3 飛龍掌血藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對峰面積

3 討論

曾考察了95%乙醇和甲醇兩種溶劑，甲醇的提取效果明顯較好;并考察了甲醇超聲和水浴回流兩種提取方法，結(jié)果兩者無明顯差別;提取時間考察了超聲15 min，30 min及60 min，前者效果較差，后兩者無明顯差別。因此選擇超聲提取30 min。

曾檢測了315，274，221 nm波長下的藥材指紋圖譜。比較分析發(fā)現(xiàn)，檢測波長為221 nm時，色譜峰較多，且各色譜峰能較好地分離，因此選221 nm作為檢測波長。本試驗比較了飛龍掌血藥材根、莖及葉，發(fā)現(xiàn)飛龍掌血藥材根、莖及葉的指紋圖譜完全不一致，這可作為本藥材藥用部位確定的依據(jù)。

通過全面系統(tǒng)研究建立的飛龍掌血藥材指紋圖譜，具有穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好的特點。本研究有助于飛龍掌血藥材的標準化種植和質(zhì)量控制，并可在貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準基礎上對飛龍掌血藥材的鑒別及質(zhì)量控制起到一定的補充作用，有助于全面、科學地評價和控制飛龍掌血藥材的質(zhì)量。

[1]DB52/YC059－2003，貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準(2003年版)[S].

[2]安彩賢，楊廣德，葉建濤，等.RP－HPLC法同時測定小果博落回中血根堿和白屈菜紅堿的含量[J].中成藥，2001，11(23):824.