張兆林，張淑鳳，鄭玉忠

(1.河北省滄州市傳染病醫(yī)院，河北 滄州 061001;2.滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 滄州 061001)

依諾沙星(enoxacin)是第3代氟喹諾酮藥物，抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)，耐受性好，主要用于全身性感染和急、慢性尿道感染[1]。許多金屬離子可與喹諾酮分子中的3－位羧基和4－位酮基配位形成配合物，從而增強(qiáng)藥物的抗菌活性。稀土離子的4f電子層結(jié)構(gòu)使其具有獨(dú)特的化學(xué)和物理性質(zhì)，有消炎、殺菌、抗凝血、鎮(zhèn)痛等作用[2]。筆者采用水熱法合成了依諾沙星與鈷的配合物并對其進(jìn)行了體外抑菌活性試驗(yàn)，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

FA1004型電子分析天平(上海天平儀器廠);Spectrum One FT－IR Spectrometer(Perkin Elmer公司);Varia－ER型元素分析儀(德國Elementar公司);Cary－100型紫外－可見分光光度計(jì)(美國Varian公司)。依諾沙星(湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，批號為20090102);氯化鈷(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號為20090203);小牛胸腺 DNA(ct－DNA，北京華美生物工程有限公司，批號為20090508)。

2 方法與結(jié)果

2.1 配合物合成

準(zhǔn)確稱取 0.139 8 g(1 mmol)氯化鈷和 0.640 6 g(2 mmol)依諾沙星，置25 mL聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，在不斷攪拌的條件下加入9 mL無水乙醇和9 mL蒸餾水，密封后置110℃烘箱中，反應(yīng)5 d后，取出，自然冷卻至室溫，過濾，將濾液于室溫下自然揮發(fā)1個(gè)月，得到粉色塊狀晶體。

2.2 元素分析

碳、氫、氮含量用元素分析儀測定，氯的含量用氧瓶燃燒法測得，金屬含量的測定采用HNO3－HClO4(3∶1)分解配合物后用乙二胺四乙酸(EDTA)滴定。配合物的元素分析結(jié)果見表1。由元素分析可推知，配合物的分子式為Co(C15H17FN4O3)2。

表1 配合物元素分析結(jié)果

2.3 紅外光譜分析

紅外光譜用溴化鉀壓片，測定范圍400～4000 cm－1。結(jié)果見圖1?？芍?，配體在1 651 cm－1處出現(xiàn)的最大吸收峰，在配合物中紅移到了1 597 cm－1，這說明依諾沙星中萘啶環(huán)上的羧基是以單齒方式與氯化鈷配位;配體萘啶環(huán)上的羰基(C=O)伸縮振動吸收峰出現(xiàn)在1 594 cm－1處，在配合物中則紅移至1 561 cm－1處，這也說明生成了配合物。

圖1 紅外光譜圖

2.4 紫外光譜分析

在紫外－可見光譜儀中，往參比池中加入3 mL二甲基亞砜，在樣品池加入同樣體積的配合物溶液(2×10－5mol/L)，用微量加樣器每次往參比池和樣品池中加入 30 μL的ct－DNA儲備液(2 ×10－3mol/L)，使ct－DNA與配合物濃度比值遞增直至飽和，吸收峰不再減色。再次混和均勻約10 min后，在 200～600 nm波長范圍內(nèi)監(jiān)測配合物的吸收光譜變化。配合物與ct－DNA作用的紫外光譜與結(jié)合常數(shù)見圖2和圖3。由光譜圖可知，在紫外區(qū)240～300 nm波長范圍內(nèi)的強(qiáng)吸收峰是配體的π－π＊躍遷。在配合物溶液中加入不同量的ct－DNA后，出現(xiàn)了不同程度的光譜擾動，吸收強(qiáng)度逐漸減弱且稍有紅移，即從258 nm紅移至260 nm。光譜變化特征表明，配合物是以插入方式鍵合ct－DNA的。

圖2 配合物紫外光譜圖

圖3 配合物與DNA結(jié)合常數(shù)

為了定量計(jì)算配合物與DNA的結(jié)合強(qiáng)弱，通過以下列方程求出它與DNA的結(jié)合常數(shù)Kb。

[DNA]/(εa－εf)=[DNA]/(εb－εf)+1/[Kb(εb－εf)]

式中[DNA]代表 DNA 的濃度，εa，εf，εb分別代表在各 DNA濃度下的、游離的、與DNA鍵合飽和的配合物的摩爾吸光系數(shù)。用[DNA]/(εa－εf)對[DNA]作圖，由擬合直線的斜率與 y軸相交的截距之商求得Kb。

經(jīng)計(jì)算，配合物與ct－DNA的結(jié)合常數(shù)Kb為3.72×104，說明配合物與DNA的結(jié)合較強(qiáng)。

2.5 體外抗菌活性測定

在含有質(zhì)量濃度分別為 10，5，2.5，1.25，0.62，0.31 g/L 配合物和依諾沙星的肉膏瓊脂平板培養(yǎng)基上，分別接種金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、白色念珠球菌，待接種點(diǎn)菌液干后，放入37℃孵箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后取出，觀察不同細(xì)菌在不同質(zhì)量濃度的藥物平板上的生長情況，得出藥物對細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC)。配體與配合物的抗菌活性測定結(jié)果見表2?？梢?，依諾沙星對白色念珠球菌和綠膿桿菌的抗菌活性強(qiáng)于對肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其配合物對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、白色念珠球菌都具有抗菌活性，但僅對金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌的抗菌活性強(qiáng)于配體本身。

表2 依諾沙星及其配合物的最低抑菌濃度(μg/mL)

3 討論

金屬離子具有穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，且對腎上腺有調(diào)節(jié)作用，能使創(chuàng)面炎癥減輕，加速愈合[3]，與依諾沙星配位后能增強(qiáng)藥物的可溶性和脂溶性。因此，金屬依諾沙星配合物有望成為收斂、抗菌、消炎作用更強(qiáng)的藥物。

[1]田晶晶，鄧 寧，何建波.高效毛細(xì)管電泳分離檢測五種喹諾酮類抗生素[J].合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，32(8):1 170 －1 172.

[2]曾正志，崔建中，鄧汝溫.甘草酸稀土配合物的制備及抗炎作用[J].科學(xué)通報(bào)，1988，33(13):1 004.

[3]Shan PM， Modak S.drug retention and risistance to bacteria challenge[J].J Surg Res，1987，43(3):298 － 300.