吳碧蓮 林 浩 肖 穎 林 萍

1 福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建省 福州市 350101； 2 福州市第二醫(yī)院

胃癌是我國死亡率最高的惡性腫瘤，腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤難以治療的重要原因之一，其發(fā)生是一個(gè)多步驟復(fù)雜的腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞相互作用的過程。近年來大量研究表明環(huán)氧化酶－2（COX－2）和基質(zhì)金屬蛋白酶－9（MMP－9）在多種腫瘤組織高表達(dá)，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1～4］。本研究通過檢測胃癌組織中 COX－2和MMP－9的表達(dá)，分析二者在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及生物學(xué)意義，為胃癌早期診斷、治療和判斷患者預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集福建省福州市第二醫(yī)院臨床及病理資料齊全2007－2009年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)為胃癌的蠟塊標(biāo)本65例，全部病例術(shù)前均未行化療或放療。其中男44例，女21例；年齡36～68歲，中位年齡53.78歲。組織學(xué)分型：高分化18例，中分化22例，低分化25例；浸潤深度：T111例，T219例，T321例，T414例；淋巴轉(zhuǎn)移：無轉(zhuǎn)移29例，有轉(zhuǎn)移36例。根據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，Ⅰ期9例，Ⅱ期25例，Ⅲ期17例，Ⅳ期14例。正常胃黏膜組15例作對照，標(biāo)本取自胃潰瘍或十二指腸潰瘍手術(shù)標(biāo)本中正常胃黏膜組織，并經(jīng)病理觀察證實(shí)且排除重度不典型增生。其中男11例，女4例，年齡39～71歲，中位年齡50.03歲。所用標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛、石蠟包埋處理。

1.2 檢測方法 將經(jīng)甲醛、石蠟包埋后組織標(biāo)本行4μm連續(xù)切片，脫蠟入水，以過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶并行抗原熱修復(fù)。然后嚴(yán)格按SP試劑盒說明書流程操作。以已知COX－2、MMP－9陽性的胃癌組織切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。鏡下觀察控制顯色過程，最后以蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水后樹膠封片。每例均行HE染色和SP法免疫組織化學(xué)染色，光鏡觀察。鼠抗人COX－2多克隆抗體，鼠抗人MMP－9單克隆抗體；SP即用型免疫組織化學(xué)染色試劑盒和DAB顯色試劑盒；磷酸鹽緩沖液（PBS），檸檬酸組織抗原修復(fù)液等試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 結(jié)果判斷 COX－2、MMP－9染色陽性表達(dá)以細(xì)胞漿內(nèi)和（或）細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒，強(qiáng)度大于非特異性背景為準(zhǔn)，二者表達(dá)以細(xì)胞染色的比率和強(qiáng)度進(jìn)行判斷［5］：細(xì)胞無著色為“－”；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)微弱且彌漫染色（包括＜10%的細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)染色）為“±”；10%～90%的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)中度或強(qiáng)染色為“＋”；＞90%的細(xì)胞胞質(zhì)強(qiáng)染色為“＋＋”。－～±判為陰性表達(dá)，＋～＋＋判為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)及Pearson分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中COX－2和 MMP－9的表達(dá) 胃癌組織中COX－2的表達(dá)主要為癌細(xì)胞胞漿內(nèi)均勻的棕黃色細(xì)顆粒，少數(shù)核膜亦著色，癌周血管內(nèi)皮細(xì)胞、間質(zhì)中單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞亦可見散在表達(dá)（見圖1）。胃癌組織中MMP－9的表達(dá)主要為癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒，胞核不著色，且表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞多位于浸潤前沿，亦有浸潤至小靜脈內(nèi)的腫瘤細(xì)胞呈陽性反應(yīng)（見圖2）。

2.2 胃癌和正常胃黏膜組織中COX－2和 MMP－9的表達(dá) 65例胃癌組織中有41例COX－2表達(dá)陽性，有24例表達(dá)陰性，其陽性表達(dá)率為63.08%；15例正常胃黏膜組織中COX－2表達(dá)均為陰性；顯示胃癌組織中COX－2陽性率顯著高于正常胃黏膜組 （P＜0.01）。65例胃癌組織中48例MMP－9表達(dá)為陽性，17例表達(dá)陰性，陽性率為73.85%；15例正常胃黏膜組織中MMP－9表達(dá)均為陰性；顯示胃癌組織中MMP－9陽性率顯著高于正常胃黏膜組 （P＜0.01）。

圖1 胃癌組織中COX－2陽性染色（×400）

圖2 胃癌組織中MMP－9陽性染色（×400）

2.3 組織中COX－2和 MMP－9的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 COX－2表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化程度無關(guān)（P＞0.05），與腫瘤浸潤深度、TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。MMP－9表達(dá)與腫瘤浸潤深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤分化程度無關(guān)（P＞0.05），見表1。

表1 胃癌組織中COX－2和MMP－9表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4 胃癌組織中COX－2和 MMP－9的表達(dá)與胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系 胃癌組織中COX－2表達(dá)與MMP－9表達(dá)呈正相關(guān)（R＝0.4151，P＜0.01）；COX－2和MMP－9同為陽性表達(dá)者發(fā)生深度浸潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比率均高于其中之一陽性表達(dá)和同為陰性表達(dá)者（P＜0.05，見表2）。

3 討論

環(huán)氧化酶（cyclooxygenase，COX）是前列腺素（PGs）合成過程中的關(guān)鍵酶，有 COX－1和 COX－2兩種同工酶。COX－1為結(jié)構(gòu)型，幾乎在所有的正常組織中結(jié)構(gòu)性地表達(dá)，介導(dǎo)維持生理性自身穩(wěn)定的前列腺素的合成，因而具有胃黏膜保護(hù)，調(diào)節(jié)腎臟血流，控制血小板聚集等功能。COX－2為誘導(dǎo)型，在正常生理狀態(tài)下多數(shù)組織細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)，但當(dāng)細(xì)胞接受相應(yīng)細(xì)胞因子、內(nèi)毒素、促腫瘤劑以及癌基因等刺激后可誘導(dǎo)性表達(dá)，COX－2參與多種病理生理過程，包括急、慢性炎癥、疼痛和腫瘤等。近年來COX－2的表達(dá)異常升高作為胃腸道惡性腫瘤中的一個(gè)普遍分子事件，日益受到人們的重視［6］。COX－2主要通過抑制細(xì)胞凋亡，加速細(xì)胞增殖，增強(qiáng)腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移能力，促進(jìn)新生血管形成等機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［7］。本研究結(jié)果表明胃癌組織中COX－2蛋白表達(dá)陽性率為63.08%，在正常胃黏膜組織中COX－2表達(dá)均為陰性。同時(shí)還表明COX－2表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化程度無關(guān)（P＞0.05），與腫瘤浸潤深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。

表2 胃癌組織中COX－2和 MMP－9的表達(dá)和胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

MMP－9是基質(zhì)金屬蛋白酶中降解Ⅳ膠原最重要的蛋白酶之一，其主要作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)，如基底膜的主要成分——纖維連接蛋白和層粘連蛋白。大量研究表明，MMP－9在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過度表達(dá)，降解破壞細(xì)胞外基質(zhì)中最主要的組分Ⅳ、Ⅴ型膠原和明膠，在惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色。MMP－9高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞在侵襲、轉(zhuǎn)移過程中突破各種屏障的能力較高［8］。而具有轉(zhuǎn)移傾向的癌細(xì)胞可自身分泌或誘導(dǎo)其他細(xì)胞分泌大量的MMP－9，使基底膜的完整性遭到破壞，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生［9］。本研究結(jié)果表明65例胃癌組織中48例MMP－9表達(dá)為陽性，17例表達(dá)陰性，陽性率為73.85%。15例正常胃黏膜組織中MMP－9表達(dá)均為陰性，顯示胃癌組織中 MMP－9陽性率顯著高于正常胃黏膜組 （P＜0.01）。胃癌中 MMP－9表達(dá)與腫瘤浸潤深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤分化程度無關(guān)（P＞0.05）。

目前為止，COX－2促進(jìn)腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的確切分子作用機(jī)制尚不清楚。腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的發(fā)生是癌細(xì)胞自原發(fā)灶脫落、進(jìn)入血管或淋巴管繼而到達(dá)遠(yuǎn)處靶組織并形成新的繼發(fā)灶的過程。這一過程必須首先破壞其周圍基質(zhì)及脈管基膜成分，基底膜的完整與否是影響腫瘤細(xì)胞移動(dòng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。胃癌是以淋巴系統(tǒng)為主要轉(zhuǎn)移途經(jīng)的惡性腫瘤。

大量研究認(rèn)為COX－2表達(dá)與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。Tsujii等研究發(fā)現(xiàn)，在COX－2高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞可伴有MMPs表達(dá)的顯著增高，并發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)移侵襲活性較不伴有MMPs表達(dá)者增強(qiáng)，該作用在體外可被特異性COX－2抑制劑所逆轉(zhuǎn)［10］。Nagatsuka等應(yīng)用JIE－522，一種COX－2選擇性抑制劑作用于具有高度轉(zhuǎn)移性的結(jié)腸癌細(xì)胞株LH－H3，發(fā)現(xiàn)JIE－522可抑制該細(xì)胞株 MMP分泌［11］。本研究結(jié)果表明胃癌組織中COX－2表達(dá)與 MMP－9表達(dá)呈正相關(guān)（R＝0.4151，P＜0.01）；COX－2和 MMP－9同為陽性表達(dá)者發(fā)生深度浸潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比率均高于其中之一陽性表達(dá)和同為陰性表達(dá)者（P＜0.05）。

總之，COX－2 和 MMP－9的表達(dá)與胃癌的TMN分期、侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，二者在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，在腫瘤的進(jìn)展過程中可能存在協(xié)同作用，聯(lián)合檢測兩項(xiàng)指標(biāo)有利于判斷腫瘤惡性程度、進(jìn)展情況，有利于選擇更合適的治療方案以及有效估計(jì)患者預(yù)后和生存期。

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