薛紅麗 張 曾 王文健 陳偉華 應(yīng) 健 (復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院中醫(yī)科,上海 200040)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥,也是慢性腎衰竭的主要原因之一,微量白蛋白尿是DN的早期表現(xiàn)。研究表明,除高血糖、高血壓等因素參與了DN的發(fā)病過程外,胰島素抵抗是DN發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。因此,對(duì)DN的防治重點(diǎn)除嚴(yán)格控制血糖、血壓外,尚需積極改善胰島素抵抗。如何發(fā)揮中醫(yī)藥的臨床特色,有效延緩DN的病情進(jìn)展,是目前這一領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。本課題組基于對(duì)胰島素抵抗相關(guān)疾病中醫(yī)“聚證”的認(rèn)識(shí),在臨床上采用益氣增敏方治療早期DN取得了滿意療效。本研究旨在觀察益氣增敏方對(duì)2型糖尿病(T2DM)大鼠尿微量白蛋白(MAU)及胰島素抵抗的影響,為進(jìn)一步的臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇雄性SD大鼠40只,體重180～220 g(上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供)〔動(dòng)物合格證號(hào):SCKK(滬2008-0016)〕。飼養(yǎng)在室溫(18～25)℃,相對(duì)濕度50%～80%的環(huán)境條件下,自由進(jìn)食、飲水。

1.1.2 試劑與儀器 高脂飼料:18%豬油、8%蛋黃粉、2%膽固醇、0.2%膽鹽和71.8%普通基礎(chǔ)飼料(熱量百分比),上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司制作。鏈脲佐菌素(STZ):Sigma S0130。葡萄糖測定:氧化酶法,試劑盒由北京普利萊基因技術(shù)有限公司提供。胰島素測定:酶聯(lián)免疫吸附法,試劑盒由Mercodia,Sweden提供。尿微量白蛋白測定:酶聯(lián)免疫分析法,試劑盒由上海滬峰生物科技有限公司提供。血糖儀:羅康全活力型(ACCU-CHEK Active)血糖儀。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立 選取健康SD雄性大鼠40只,體重180～220 g,適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后,將大鼠隨機(jī)分為2組:普通飼料組(NPD)10只和高脂飼料組(HFD)30只。2組大鼠自由進(jìn)食、飲水4 w。4 w后,隔夜空腹12 h,高脂組30只大鼠單次腹腔注射鏈脲佐菌素STZ(Sigma)35 mg/kg;普通飼料組10只大鼠腹腔注射相應(yīng)容量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(p H4.4)。注射3 d后,尾尖采血測隨機(jī)血糖,大于等于16.67 mmol/L者作為2型糖尿病造模成功大鼠。造模成功大鼠繼續(xù)進(jìn)食高脂飼料。

1.2.2 藥品制備 益氣增敏方由黃芪、綠豆衣、紫蘇葉、黃柏、生蒲黃、黃連、澤瀉等10位中藥組成。將所有藥物切碎混合,加8倍的水煎3次,分別2、1、1 h。后將藥液濃縮成浸膏,得膏率為36.76%。該浸膏的制作由國家中藥制藥工程技術(shù)研究中心完成。浸膏4℃保存,雙蒸水稀釋至所需濃度使用。氯沙坦鉀片(科素亞):杭州默沙東制藥有限公司(批準(zhǔn)文號(hào):國藥準(zhǔn)字H20030654),研磨成粉狀,灌胃前用雙蒸水配成相應(yīng)濃度溶液。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法 將造模成功的30只糖尿病大鼠隨機(jī)分為3組,每組10只。2型糖尿病模型組(MOD,n=10),益氣增敏方治療組(YXZM,n=10)和氯沙坦治療組(LOS,n=10)。普通飼料組作為對(duì)照組(CON,n=10)。對(duì)照組及模型組用相應(yīng)容積雙蒸水灌胃,益氣增敏方治療組用益氣增敏方2.82 g(生藥)/100 g(體重)灌胃,氯沙坦治療組用氯沙坦20 mg/kg(體重)灌胃,每天1次,連續(xù)8 w。實(shí)驗(yàn)過程中除對(duì)照組動(dòng)物予普通飼料外,余實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物均給予高脂飼料。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)方法及指標(biāo)測定

1.2.4.1 標(biāo)本采集 毛細(xì)管眼底靜脈叢采血,血液標(biāo)本2 500 r/min 4℃離心10 min,分離血清測空腹血清血糖及胰島素。

1.2.4.2 胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR) 內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)模型法胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(IU/L)/22.5。

1.2.4.3 腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT) 在藥物干預(yù)8 w后,每組取5只大鼠,隔夜禁食不禁水12 h,50%葡萄糖溶液(2 g/kg)腹腔注射,于注射前、注射后30、60、120 min時(shí)分別毛細(xì)管眼底靜脈叢取血,測定血清葡萄糖濃度。

1.2.4.4 胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(ITT) 在藥物干預(yù)8 w后,每組取5只大鼠,隔夜禁食不禁水 12 h,諾和靈 R(0.5 U/kg)腹腔注射,于注射前、注射后30、60、120 min時(shí)分別毛細(xì)管眼底靜脈叢取血,測定血清葡萄糖濃度,ITT計(jì)算血糖下降相對(duì)值(與基礎(chǔ)血糖的比值)。

2 結(jié) 果

2.1 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠體重、血糖及MAU的影響與CON組大鼠相比,MOD組大鼠體重下降,血糖、MAU明顯升高。經(jīng)益氣增敏方治療后,與MOD組大鼠相比,YQZM組大鼠體重?zé)o明顯改變,血糖、MAU水平明顯下降。經(jīng)LOS治療后,與MOD組大鼠相比,LOS組大鼠體重、血糖無明顯改變,MAU水平明顯下降。見表1。

表1 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠體重、血糖及MAU的影響(±s,n=10)

表1 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠體重、血糖及MAU的影響(±s,n=10)

與CON組相比:1)P＜0.05,2)P＜0.01;與 MOD組相比:3)P＜0.05,4)P＜0.01

分組 體重(g) GLU(mmol/L) MAU(μ g/24 h)CON 562.73 ±12.17 3.85±0.33 7.29±1.49 MOD 424.15±18.30 2)17.65±2.222) 51.50 ±6.542)YQZM 445.71±15.54 2)12.16±1.00 2)4)29.64±6.322)3)LOS 407.90±24.69 2)14.51±1.422)31.52±6.432)3)

2.2 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠HOMA-IR的影響 與CON組大鼠相比,MOD組大鼠HOMA-IR明顯升高(16.59±2.65 vs 38.79±9.02,P＜0.01)。經(jīng)益氣增敏方治療后,與MOD組相比,YQZM組大鼠HOMA-IR(22.68±2.37)明顯降低(P＜0.05)。經(jīng)氯沙坦治療后,與MOD組大鼠相比,LOS組大鼠 HOMA-IR明顯升高(51.43±6.27,P＜0.05)。

2.3 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠IPGTT及ITT的影響 藥物干預(yù)8 w后,IPGTT實(shí)驗(yàn)顯示,注射葡萄糖30、60、12 min時(shí),模型組血糖與對(duì)照組相比顯著升高(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),表明模型組大鼠糖耐量異常。經(jīng)益氣增敏方治療后,與模型組相比,各點(diǎn)血糖水平明顯下降(P＜0.05),經(jīng)氯沙坦治療后,與模型組相比,各點(diǎn)血糖水平無明顯下降。見圖1。ITT實(shí)驗(yàn)顯示,注射胰島素30、60、12 min時(shí),MOD組血糖下降程度與對(duì)照組相比顯著降低(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),提示模型組大鼠胰島素耐量異常。經(jīng)益氣增敏方治療后,與模型組相比,30、60 min血糖下降程度明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)氯沙坦治療后,與模型組相比,各點(diǎn)血糖水平無明顯下降。見圖2。

圖1 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠IPGTT的影響

圖2 益氣增敏方對(duì)2型糖尿病大鼠ITT的影響

3 討 論

胰島素抵抗在T2DM和DN的發(fā)病機(jī)制中占重要地位,MAU與胰島素抵抗存在著密切的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn),T2DM患者中胰島素抵抗者較胰島素敏感者M(jìn)AU的發(fā)生率高。在T2DM患者中,MAU陽性者較MAU陰性者有更顯著的胰島素抵抗,而且胰島素抵抗與尿白蛋白排泄率顯著相關(guān)。有研究證實(shí)T2DM患者胰島素敏感性與尿白蛋白排泄量呈負(fù)相關(guān)〔1～3〕。

T2DM是以胰島素抵抗為基礎(chǔ),因胰島素抵抗而不能正常進(jìn)行葡萄糖代謝,除糖代謝紊亂外,常合并有脂代謝紊亂,類似于中醫(yī)理論中的氣化障礙?！端貑枴?“飲入于胃,游溢精氣,上輸于脾;脾氣散精,上歸于肺,通調(diào)水道,下輸膀胱,水精四布,五經(jīng)并行?！边@是中醫(yī)對(duì)飲食物進(jìn)入體內(nèi)后代謝轉(zhuǎn)化過程的基本認(rèn)識(shí),其中以“游溢精氣”和“脾氣散精”最為關(guān)鍵,都屬于氣化作用。患者氣化不足,精氣不能游溢,脾氣不能散精,物不化正,出現(xiàn)脂肪在腹部堆積,糖分、脂質(zhì)在血液中積累。在氣化障礙的基礎(chǔ)上,邪熱、濕濁、瘀血乘虛而入,糖代謝、脂代謝紊亂進(jìn)一步加劇,發(fā)展形成DN等糖尿病慢性并發(fā)癥〔4〕。

基于這一病機(jī)認(rèn)識(shí),我們臨床使用益氣散聚方用于防治T2DM早期腎病,取得了較好療效。該方由黃芪、黃連、黃柏、生蒲黃、綠豆衣、紫蘇葉、澤瀉等10位中藥組成。方中黃芪甘溫補(bǔ)中,推動(dòng)氣化,助脾散聚布精;黃連、黃柏苦寒,清熱、瀉火、燥濕,祛濕熱之邪。生蒲黃味甘性微寒,血分藥而兼行氣分,上者可清,下者可利,滯者可行。綠豆衣甘寒,解熱毒。紫蘇葉善行脾胃氣滯,有行氣寬中,和胃止嘔之效。澤瀉利水,滲濕,泄熱。諸藥合用,既有推動(dòng)氣化之功能,又能清熱、解毒、行氣、散瘀,使精微物質(zhì)能夠正常布散運(yùn)化,臟腑功能得以恢復(fù)〔5〕。

本實(shí)驗(yàn)采用預(yù)先喂飼高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗后,再聯(lián)合低劑量的STZ部分破壞大鼠的胰島細(xì)胞,誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。這種造模方法所誘導(dǎo)的伴胰島素抵抗的大鼠糖尿病更近似于臨床上的T2DM。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組大鼠尿微量白蛋白較對(duì)照組明顯升高,表明該模型符合臨床T2DM早期腎病的臨床特征,這與我們既住的研究結(jié)果相一致〔6〕。微量白蛋白尿是DN的早期臨床表現(xiàn),這一階段如采用適當(dāng)?shù)闹委熒锌筛纳颇I臟病變,減少尿蛋白的排出。本研究表明,益氣增敏方可減少模型動(dòng)物的MAU,改善胰島素抵抗。氯沙坦亦可明顯減少模型大鼠的MAU的作用,但對(duì)胰島素抵抗無明顯改善作用。

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5 王文健.論聚證學(xué)說及臨證辨治〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志,2008;42(7):60-2.

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