白 林，方 旬，任 韡 （.解放軍總醫(yī)院藥檢室，北京 00853；.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 33003）

六味地黃丸具有滋陰補(bǔ)腎的功效，是補(bǔ)陰方藥中的代表方。該藥臨床適應(yīng)證較多，使用金額較大，市售生產(chǎn)廠家較多，性價(jià)比相差較大。目前，中藥原料及制劑質(zhì)量相差甚遠(yuǎn)，六味地黃丸含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)有下限無(wú)上限，同為合格產(chǎn)品，市售不同藥廠生產(chǎn)的六味地黃丸品種之間有一定的質(zhì)量差異，這種差異會(huì)直接影響患者用藥的治療效果。本文對(duì)本院曾用的四個(gè)廠家生產(chǎn)的各三批六味地黃丸按照2010年版《中國(guó)藥典》的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]進(jìn)行比較，并進(jìn)行體外溶出度的研究，尋找該藥療效存在差異的原因，為臨床合理用藥及合理購(gòu)藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（包括在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器、Agilent Chem Station 色譜工作站）（美國(guó)）； D-800LS智能溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）。

六味地黃丸（濃縮丸）的廠家：A（批號(hào)20091202、20100112、20100225），B（批號(hào)0903409、0906403、0907404），C（批號(hào)20091218、20100118、20100215），D（批號(hào)201001028、201002012、201004023），分別產(chǎn)自山西、安徽、北京、長(zhǎng)沙。對(duì)照品：丹皮酚、馬錢(qián)苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0708－9704；111640－200503，含量測(cè)定用）。

甲醇、乙腈（色譜純）；鹽酸；四氫呋喃；其他試劑為分析純；純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含水量測(cè)定

取供試品2～5 g，研碎，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)5 mm，精密稱定，打開(kāi)瓶蓋在100～105 ℃干燥5 h，將瓶蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定重量，再在100～105 ℃干燥1 h，冷卻30 min，精密稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量（%），應(yīng)不超過(guò)12.0%。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 重量差異測(cè)定

以一次服用量最高丸數(shù)8丸為1份，取供試品10份，分別稱定重量，再與標(biāo)示總量比較（無(wú)標(biāo)示量的丸劑，與平均重量比較）。超出重量差異限度（±9%）的不得多于2份，并不得有1份超出限度一倍。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 溶散時(shí)限測(cè)定

取供試品6丸，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅠA溶散時(shí)限檢查法加檔板檢查，應(yīng)在2 h內(nèi)全部溶散。結(jié)果見(jiàn)表1。

表 1 不同廠家的六味地黃丸中含水量、重量差異、溶散時(shí)限比較.±sTab 1 Comparison of water content, weight variation and dissolution time of different Liuweidihuang pills.±s

表 1 不同廠家的六味地黃丸中含水量、重量差異、溶散時(shí)限比較.±sTab 1 Comparison of water content, weight variation and dissolution time of different Liuweidihuang pills.±s

廠家 含水量/ % 重量差異/ % 溶散時(shí)限/min A 8.5±1.0 2.5±0.5 90±3.2 B 7.8±1.2 0.8±0.2 36±4.1 C 7.5±2.1 2.8±0.6 29±5.3 D 6.5±1.4 3.6±0.8 30±3.6

2.4 丹皮酚含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（70∶30）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm，理論塔板數(shù)按丹皮酚計(jì)算不低于3500。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋成每1 mL含20 μg的溶液，搖勻，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取六味地黃丸20粒，研碎，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率33 KHz）45 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 含量測(cè)定 按照供試品溶液制備方法分別制備四個(gè)廠家六味地黃丸的供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取對(duì)照品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，分別測(cè)定各供試品溶液中丹皮酚的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

圖 1 丹皮酚色譜圖注：1－丹皮酚；A、B、C、D、E分別為A、B、C、D廠家產(chǎn)品色譜圖及對(duì)照品色譜圖Fig 1 Chromatograms of paeonolNote∶1－paeonol; chromatogram A, B, C, D, E stand for that of the products from vender A, B, C, D and control respectively

2.5 馬錢(qián)苷含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以四氫呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸（1∶4∶8∶87）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為236 nm，理論塔板數(shù)按馬錢(qián)苷峰計(jì)不低于4000。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 取馬錢(qián)苷對(duì)照品適量，用50%的甲醇溶解并稀釋成每1 mL含20 μg的溶液，搖勻，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 取六味地黃丸20粒，研碎，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，置中性氧化鋁柱(100～200目，4 g，內(nèi)徑1 cm，干法裝柱)上，用40%甲醇50 mL洗脫，收集流出液及洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5.4 含量測(cè)定 按照供試品溶液制備方法分別制備四個(gè)廠家六味地黃丸的供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，分別取10 μL注入液相色譜儀，另取對(duì)照品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，分別測(cè)定各供試品溶液中馬錢(qián)苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

圖 2 馬錢(qián)苷色譜圖注：1－馬錢(qián)苷；A、B、C、D、E分別為A、B、C、D廠家產(chǎn)品色譜圖及對(duì)照品色譜圖Fig 2 Chromatograms of loganinNote∶1－loganin; chromatogram A, B, C, D, E stand for that of the products from vender A, B, C, D and control respectively

表 2 不同廠家六味地黃丸中丹皮酚和馬錢(qián)苷的含量測(cè)定結(jié)果.mg·g-1, ±sTab 2 Results of content determination of paeonol and loganin in different Liuweidihuang pills.mg·g-1, ±s

表 2 不同廠家六味地黃丸中丹皮酚和馬錢(qián)苷的含量測(cè)定結(jié)果.mg·g-1, ±sTab 2 Results of content determination of paeonol and loganin in different Liuweidihuang pills.mg·g-1, ±s

廠家 丹皮酚 馬錢(qián)苷A 1.6±1.2 1.8±1.6 B.1.9±2.2 0.7±1.2 C 3.8±2.4 1.7±2.0 D 3.5±1.8 1.9±3.5

2.6 丹皮酚和馬錢(qián)苷體外溶出度測(cè)定

2.6.1 溶出度測(cè)定方法 使用小杯攪拌漿法，按2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄XC溶出度測(cè)定法第三法項(xiàng)下操作，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液（250 mL水加入2 mL鹽酸脫氣）作為溶出介質(zhì)，溫度為（37±0.5） ℃，轉(zhuǎn)速為75 r·min-1[2]，分別取同一廠家同一批生產(chǎn)的六味地黃丸（濃縮丸）6份，每份8粒，精密稱定，自六味地黃丸接觸溶出介質(zhì)起，立即計(jì)時(shí)，分別在10、20、30、45、60、80 min時(shí)，吸取溶液1 mL，同時(shí)補(bǔ)加同溫溶出介質(zhì)1 mL，立即用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。按照2010年版《中國(guó)藥典》一部六味地黃丸中丹皮酚和馬錢(qián)苷含量測(cè)定方法[1]，測(cè)定各個(gè)時(shí)間點(diǎn)丹皮酚和馬錢(qián)苷的峰面積并計(jì)算累積溶出量。

2.6.2 溶出度結(jié)果 計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度，結(jié)果見(jiàn)表3，表4。

3 討論

3.1 本試驗(yàn)中測(cè)定的四個(gè)廠家六味地黃丸的水分、重量差異、溶散時(shí)限均在合格范圍，其中，水分、重量差異區(qū)別不大，但A廠家溶散時(shí)限較其他三個(gè)廠家有較明顯的延長(zhǎng)。

表 3 六味地黃丸中丹皮酚平均累積溶出度.%, n=6,±sTab 3 Average cumulative dissolution of paeonol in Liuweidihuang pills.%, n=6,±s

表 3 六味地黃丸中丹皮酚平均累積溶出度.%, n=6,±sTab 3 Average cumulative dissolution of paeonol in Liuweidihuang pills.%, n=6,±s

廠家時(shí)間/min 10 20 30 45 60 80 A 6.50±0.43 9.90±0.45 13.50±0.81 17.30±0.66 22.60±1.80 25.80±1.70 B 6.10±0.29 9.60±0.43 13.90±1.34 21.40±1.49 25.50±1.60 33.30x±1.76 C 0.60±0.26 1.20±0.37 2.90±0.45 4.30±0.88 4.70±1.69 9.80±2.51 D 8.80±0.45 23.30±9.33 44.60±9.31 56.70±9.08 71.40±7.37 77.7±8.50

表 4 六味地黃丸中馬錢(qián)苷平均累積溶出度.%, n=6, ±sTab 4 Average cumulative dissolution of loganin in Liuweidihuang pills.%, n=6, ±s

表 4 六味地黃丸中馬錢(qián)苷平均累積溶出度.%, n=6, ±sTab 4 Average cumulative dissolution of loganin in Liuweidihuang pills.%, n=6, ±s

廠家時(shí)間/min 10 20 30 45 60 80 A 21.5±0.31 29.9±0.78 35.8±0.29 45.3±1.12 56.6±2.03 65.1±0.40 B 11.6±1.77 17.9±1.50 29.8±0.88 37.9±0.45 53.3±2.19 66.4±3.24 C 17.2±0.32 26.7±0.71 31.5±1.09 43.1±2.32 52.2±2.08 62.6±2.56 D 14.5±0.65 32.4±2.32 51.6±5.27 76.6±1.27 90.0±2.28 96.1±1.22

3.2 依據(jù)中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，六味地黃丸（濃縮丸）含馬錢(qián)苷不得少于1.4 mg·g-1，含丹皮酚不得少于1.8 mg·g-1。四個(gè)廠家的六味地黃丸均在有效期內(nèi)，B廠家產(chǎn)品含馬錢(qián)苷為0.7 mg·g-1，A廠家產(chǎn)品含丹皮酚為1.6 mg·g-1，含量不符合規(guī)定。馬錢(qián)苷用于山茱萸的質(zhì)量評(píng)價(jià)[3]，丹皮酚為六味地黃丸口服后的原形入血成分[4]，二者含量能夠反映六味地黃丸的內(nèi)在質(zhì)量，因此，含量不同會(huì)導(dǎo)致不同廠家的同一種藥物具有不同的療效。

3.3 由于2010年版以前的《中國(guó)藥典》未收載六味地黃丸（濃縮丸）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)》，丹皮酚的含量測(cè)定從提取、檢測(cè)到含量標(biāo)準(zhǔn)均不同于《中國(guó)藥典》；對(duì)山茱萸的質(zhì)量評(píng)價(jià)是用無(wú)特異性的熊果酸而不是馬錢(qián)苷，因此，標(biāo)準(zhǔn)的不同可能是造成該兩個(gè)廠家產(chǎn)品不合格的原因所在。

3.4 A廠家產(chǎn)品90 min溶散，明顯長(zhǎng)于B、C、D廠家，但體外溶出結(jié)果差異并不顯著，說(shuō)明溶散只是物理現(xiàn)象，是溶出的前提，溶散了，并不一定能溶出，藥物只有溶出，才能被機(jī)體吸收。因此，溶出度檢查結(jié)果更為重要。

3.5 本試驗(yàn)溶出度檢查中，溶出介質(zhì)采用與胃液相似的鹽酸溶液，轉(zhuǎn)速模擬胃蠕動(dòng)，因用HPLC法[1]檢測(cè)其中的兩種成分，試驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng)，80 min的溶出結(jié)果，已能比對(duì)不同廠家的質(zhì)量差異，并且考慮樣品溶液穩(wěn)定性的因素，選用采樣時(shí)間為80 min。

3.6 四個(gè)廠家藥物的體外溶出度有顯著性的差異，其中，D廠家丹皮酚、馬錢(qián)苷溶出度試驗(yàn)結(jié)果均明顯優(yōu)于其他三個(gè)廠家，其他三個(gè)廠家馬錢(qián)苷的溶出度試驗(yàn)結(jié)果相似。A、B、C廠家產(chǎn)品中丹皮酚80 min時(shí)的溶出度分別為25.8%、33.3%和9.8%。溶出度的差異可能導(dǎo)致生物利用度的差異[5]，并與臨床療效相關(guān)。生產(chǎn)工藝的不同可能是導(dǎo)致四個(gè)廠家體外溶出度差異顯著的主要原因，如濃縮丸藥材的粉碎程度，藥粉混合的均勻性，成藥的硬度等都對(duì)其有一定的影響。故制作工藝的標(biāo)準(zhǔn)化是提高藥品質(zhì)量的重要方面。

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