蔡勝艷，王樂秋，代海平，董祥梅

牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013

Survivin在大腸癌中的表達與其64排CT表現的關系

蔡勝艷a，王樂秋b，代海平c，董祥梅c

牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013

目的探討大腸癌患者CT表現及分期與Survivin（凋亡抑制基因）表達的相關性。方法62例術前行64排CT檢查并經手術病理證實為結直腸癌患者，采用免疫組化檢測腫瘤標本中Survivin的表達,分析Survivin表達與CT分期及CT表現的關系。結果62例結直腸癌組織中，Survivin的陽性表達率為80.6%，隨大腸癌CT分期增加Survivin的陽性表達率逐漸增加，與CT表現中的Ducks分期、浸潤深度及淋巴結轉移有顯著性差異（均P＜0.05）。結論Survivin在大腸癌侵襲轉移中發(fā)揮重要作用，結合術前CT影像表現，對患者預后的判斷及術后治療方案的選擇有積極意義。

CT；大腸癌；凋亡抑制基因；免疫組織化學

0 前言

大腸癌（CRC）是消化道常見的惡性腫瘤之一，在過去的 20年中，世界上大多數國家或地區(qū)大腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢[1]。迄今大腸癌的病因不明，但 20 世紀 60 年代以來，分子生物學逐漸進入腫瘤研究領域，大腸癌的發(fā)病機制及臨床方面的研究已進入分子水平[2]。己經證明，許多基因在大腸癌的演進過程中發(fā)揮重要作用，大腸癌是一種基因病己得到共識。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程與許多因素有關，其中癌基因的激活和抑癌基因的失活在這一過程中起著重要作用[3]。大腸癌的 CT 分期是臨床分期的重要依據,對預后及術后治療方案的選擇至關重要。筆者試圖通過 62 例大腸癌 CT 表現及分期與 Survivin 表達的相關性研究，評價大腸癌影像學表現與其惡性程度和預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

62 份大腸癌標本取自 2007 年 9 月～2010 年 7 月在我院行大腸癌根治性切除術的患者。所有患者術前均未接受過放療和化療，均有完整的隨訪資料。年齡 26～88 歲，平均年齡 61 歲 ；男性 33 例，女性 29 例 ；直腸癌 23 例，結腸癌 39例。

1.2 CT掃描技術及CT分期標準評定

CT 掃描儀為 Aquiline 64 排螺旋 CT 掃描機。掃描條件：120KV，200mAs，層厚 0.5mm，掃描范圍從膈頂至恥骨聯合，常規(guī)平掃后作增強掃描，非離子型對比劑碘海醇（300mgI/ mL）使用高壓注射器經前臂靜脈內團注，劑量 1.5mL/kg，流率 2.0mL/s，總劑量不超過 100mL，延時 60s 掃描。腫瘤CT 分期標準按 Dukes分期，Ⅰ期 3 例，Ⅱ期 16 例，Ⅲ期41 例，Ⅳ期 2 例。CT 征象評定采用雙盲法，由 2 位從事腹部放射診斷的主治醫(yī)生分別進行，有分歧時由上級醫(yī)生評定。CT征象評定與免疫組化評定分別單獨進行。

1.3 免疫組織化學染色

采用 EliVisinn 二步法檢測大腸癌組織中 Survivin 的表達，用 PBS替代一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。

（l）常規(guī)石蠟連續(xù) 4μm 切片，二甲苯脫蠟，經梯度酒精（100%-95%-90%-80%）水化。

（2）進行組織抗原修復，采用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復法。取 pH=6.0 檸檬酸緩沖液 1500mL 于壓力鍋中，大火加熱直至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴氣，從噴氣開始計時，2min 后，壓力鍋離開熱源，冷卻至室溫，取出玻片，先用蒸餾水沖洗2 次，之后用 PBS（pH=7.4）沖洗 2 次，每次 3min。

（3）3% 過氧化氫去離子水孵育 5min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS 沖洗 3 次。

（4）每張切片加一滴第一抗體 ；鼠抗人 Survivin 單克隆抗體，室溫下孵育 60min。

（5）PBS 沖洗 3 次，每次 5min。

（6）滴加 IgG 抗體一 HRD 多聚體，室溫下孵育 15min。PBS 沖洗 3 次，每次 2min。

（7）應用 DAB 溶液顯色 1～4min，顯微鏡下控制顯色程度，自來水沖洗，終止反應。

（8）蒸餾水沖洗，蘇木素復染，自來水沖洗返藍。

（9）切片用梯度酒精（80%-90%-95%-100%）脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

（10）Olympus顯微鏡觀片。

1.4 免疫組織化學染色結果判定

免疫組化判定標準：以細胞膜、細胞核或胞漿出現棕色顆粒為陽性。癌組織 Survivin 蛋白主要定位于大腸癌細胞細胞核或細胞漿，為棕黃色顆粒，呈異質性染色。

1.5 統(tǒng)計分析

采用卡方檢驗，分別分析 Survivin 的表達與大腸癌的CT表現（腫瘤部位、腫瘤大小、侵潤程度，淋巴結轉移、Dukes 分期）的相關性。以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義，所有統(tǒng)計分析均采用計算機 SPSS13.O 軟件進行檢驗。

2 結果

2.1 大腸癌的CT分期與Survivin表達相關性（見表1）

Survivin 在結直腸癌中的表達與腫瘤大小、腫瘤位置、無顯著性差異（均 P＞0.05），與 Dukes 分期、浸潤深度及淋巴結轉移有顯著差異（均 P＜0.05）。

表1 大腸癌的 CT 分期與 survivin 表達相關性

3 討論

控制侵襲、防止浸潤、轉移是當今腫瘤研究的重要課題之一[4]。侵襲和轉移是影響結直腸癌患者治療效果和預后的重要因素。本研究用免疫組化染色法檢測原發(fā)腫瘤灶中 Survivin 的表達并與 CT 分期對照，發(fā)現隨大腸癌分期增加 Survivin 的陽性表達百分率逐漸增加。深入探討它們之間的作用機制，對闡明和阻斷腫瘤轉移的形成具有重要價值。Survivin 在結直腸癌中的表達與腫瘤大小、腫瘤位置無明顯相關，與 Dukes分期、浸潤深度及淋巴結轉移有相關關系，表明不論其病理分化程度、腫瘤大小、位置及CT病灶強化程度如何，均應積極進行術后治療，早期預防轉移及侵襲的發(fā)生，而 Dukes分期大，周圍脂肪浸潤及淋巴結腫大預示預后較差[5-8]。隨著科學的發(fā)展和研究的深入，在分子水平結合大體影像學表現對大腸癌的預后提供新的方向和思路，符合當前影像學發(fā)展的方向，我們將做進一步的努力。

[1] Montgomery E,Abraham SC, Fisher C．CD44 loss in gastric stromaltumors as a prognostic marker[M]．Lippincott Williams & Wilkins,Inc,2004,28:168-177．

[2] Wilmanns C,Grossmann J,Steinhauer S,et al．Soluble serum E-cad-herin as amarker oftumor progression in colorectal cancer patients[J]．Clin Exp Metastasis,2004,21:75-78．

[3] Bartolazzi A,Gasbarri A,PapottiM,et al．Application of an immuno-diagnostic method for improving preoperative diagnosis of nodular thy-roid lesions[J]．Lancet,2001,(57):1644-1650．

[4] 冼沛中,康旭,王芳．Survivin在大腸癌中的表達及其與血管生長因子的相關性研究[J]．中國實驗診斷學,2005,9(2):216-219．

[5] 金軍,袁宏銀,熊金．bag-1,bcl-2在大腸腫瘤和大腸癌中的表達及意義[J]．腫瘤防治研究,2005,32(5):254-256．

[6] 王從玉,鄧躍華,劉弋,等．nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大腸癌中的表達及意義[J]．中國腫瘤臨床,2008,46(19):42-46．

[7] 邵佳發(fā),張樹春,周媛媛,等．大腸癌相關腫瘤轉移抑制基因的研究進展[J]．醫(yī)學綜述,2009,16(22):70-72．

[8] 熊煜,甄萬燚．p16和CyclinD1在大腸癌組織中的表達及臨床意義[J]齊齊哈爾醫(yī)學院學報,2008,25(18):14-15．

Correlation of CT Appearance with Survivin Expression in Colorectal Cancer

CAI Sheng-yana,WANG Le-qiub, DAI Hai-pingc,DONG Xiangmeic
a.Radiology Department;b.ENT;c. Pathology Department,Hongqi Hospital of Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157013,China

ObjectiveTo study the correlation between 64-slice CT staging, appearance and Survivin expression in colorectal cancer.Methods62 cases of colorectal cancer proved by surgery and pathology were examined with abdominal CT scan before operation.The expression of Survivin was estimated with SP immunohistochemical technique individually.The relation between CT staging, appearance and expression of survivin was retrospectively analyzed.ResultsSurvivin positive expression was 80.6%.According with the Ducks staging increasing, Survivin expression between Ducks staging, invasion of adjacent fat and lymph nodes metastases had significant difference (P＜0.05).ConclusionSurvivin combine with CT scan before operation, can play important role in invasion and metastases of colorectal cancer, judge prognosis and choose correct therapy.

CT; colorectal cancer; Survivin; immunhistochemistry

R735.34

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2011.06.034

1674-1633(2011)06-0095-02

2010-12-07

作者郵箱：mdjwjf@qq．com