何玲玲

（廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東佛山 528000）

根據(jù)《中國藥典》2005年版一部[1]中收載，當歸養(yǎng)血丸主要是由當歸、白芍、黃芪和地黃等10味藥物組成。其功效為益氣、養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)，臨床上常用于治療氣血兩虛、月經(jīng)不調(diào)等病癥，且療效顯著?！吨袊幍洹?005年版的法定標準中僅僅收載了當歸的顯微鑒別項及丹皮的薄層鑒別方法，對含量測定的監(jiān)控指標無相應(yīng)的收錄，不利于相關(guān)的部門控制其藥品的生產(chǎn)和使用質(zhì)量，本實驗在文獻[2]報道的基礎(chǔ)上，將高效液相色譜法測定阿魏酸含量進行深入的方法學(xué)研究，建立更為準確的阿魏酸含量限度，便于更好地控制該藥品的質(zhì)量。因此，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent-1100型高效液相色譜儀 （安捷倫科技有限公司）；Agilent 1100色譜工作站，紫外光譜檢測器，Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），Agirlent進樣瓶；分析天平（精密度萬分之一）；TU-1900紫外可見分光光度計。

1.2 試藥

甲醇 （北京北化精細化學(xué)有限責(zé)任公司，批號：20091114，色譜純），水為三蒸水，其他試劑均為分析純；阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，生產(chǎn)批號：20081123）；當歸養(yǎng)血丸 （本院自制，生產(chǎn)批號分別為091023、091031、091101、091110、091201，091214）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

采用 Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-1.0%冰醋酸溶液為 25∶75，流速：1.0 ml/min，檢測波長：321 nm，柱溫：25℃，進樣量為 10.0 μl。理論塔板數(shù)以阿魏酸峰值計算大于3000。

2.2 供試品溶液制備

分析天平稱取當歸養(yǎng)血丸約10 g，精密稱定，加入10 g硅藻土，混合均勻后研細，置于索式提取器中，加入70%的甲醇溶液200 ml，提取5 h，提取液減壓濃縮至約4 ml，殘渣用流動相溶解后轉(zhuǎn)移至20 ml量瓶中，加入流動相定容至刻度，靜置后備用。

2.3 對照品溶液制備

精密稱定阿魏酸對照品0.1 mg，置5 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，靜置備用。

2.4 陰性樣品溶液制備

精密稱定缺當歸的樣品，照“2.2”項下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

分別取阿魏酸對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按上述色譜條件進行試驗，考察系統(tǒng)適用性。HPLC色譜圖見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取濃度為 20 μg/ml的阿魏酸對照品溶液10、20、40、80、160、320 μl，分別至 2 ml量瓶中，加入流動相定容至刻度，分別吸取10 μl注入高效液相色譜儀中，記錄其峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=3.84×104X+0.05×104（r=0.9998）。結(jié)果表明阿魏酸含量在0.025～1.200 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液10.0 μl，重復(fù)進樣6次，測定其平均峰面積，其RSD為0.97%，結(jié)果表明本法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取同一供試品溶液 10.0 μl， 在 0、4、8、12、16、20、24 h各進樣1次，其結(jié)果峰面積的RSD為0.76%，表明阿魏酸在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批號的樣品5份，按照阿魏酸供試品溶液的制備方法制備樣品溶液并測定阿魏酸的含量，根據(jù)線性關(guān)系測定結(jié)果，樣品中阿魏酸的平均含量為0.058 mg/g，RSD為1.62%。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。

2.10 回收率試驗

稱取已知含量（批號：091101）的樣品約2.0 g，共6份，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對照品溶液（0.05 mg/g）2.4 ml，按照含量測定項下的方法測定含量，同時計算回收率。結(jié)果測得的阿魏酸的平均回收率為98.69%，RSD為0.96%，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 樣品含量測定

取當歸養(yǎng)血丸樣品，按照供試品溶液的制備方法制備溶液，精密稱取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀中。阿魏酸的色譜峰與樣品中的雜質(zhì)峰可以達到基線分離，理論塔板數(shù)按照阿魏酸峰計算大于3000[3]。6批當歸養(yǎng)血丸中阿魏酸含量結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

3.1 流動相的選擇

[4-6]，對流動相的選擇考察了甲醇-0.1%磷酸溶液的不同比例（25∶75，30∶70，45∶55），但是分離效果均不理想，樣品峰與雜質(zhì)峰分離不完全，因此，本文中最后采用甲醇-1.0%冰醋酸溶液（25∶75）作為檢測當歸養(yǎng)血丸中阿魏酸的含量測定法，分離效果滿意，保留時間適中。

3.2 波長的選擇

選擇檢查波長時，筆者取樣品在220～400 nm處進行掃描，結(jié)果表明阿魏酸在321 nm處有最大吸收峰，且干擾條件少，故選擇321 nm作為樣品中阿魏酸的檢測波長。

當歸養(yǎng)血丸制劑中以當歸的藥材細粉入藥，《中國藥典》2005年版一部中當歸項下阿魏酸的含量限度為0.05%[7]，由測定的6批樣品中阿魏酸的含量，以《中國藥典》2005年版當歸藥材含量限度為依據(jù)[8]，當歸養(yǎng)血丸中阿魏酸含量不得低于0.035 mg/g。

綜上所述，本文建立了高效液相色譜法測定當歸養(yǎng)血丸中阿魏酸含量，方法的重現(xiàn)性、分離度等均符合規(guī)定，測定的方法穩(wěn)定，經(jīng)過對樣品各項檢測數(shù)據(jù)的反復(fù)考察結(jié)果，其專屬性較強，可用于當歸養(yǎng)血丸的質(zhì)量控制，具有可行性。

[參考文獻]

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[8]陳昌彪,羅明芳,陳少軍.HPLC法測定當歸補血顆粒中阿魏酸的含量[J].中成藥,2006,28(4):599.