廖美金，李瑞明

（1.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510120；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510080）

銀杏Ginkgo biloba L.屬銀杏科，是我國(guó)的特產(chǎn)植物。銀杏葉中黃酮類化合物可分為黃酮、雙黃酮和兒茶素等三類化合物，共有36種，主要以苷的形式存在。其含有6種萜內(nèi)酯化合物，分別為銀杏內(nèi)酯A、B、C、M、J及白果內(nèi)酯。各國(guó)學(xué)者對(duì)其藥理作用進(jìn)行多年且大量有效的研究發(fā)現(xiàn)，銀杏內(nèi)酯B為特異性血小板活化子（PAF）的強(qiáng)拮抗藥，而銀杏內(nèi)酯為目前天然PAF受體拮抗藥中最具前景的藥物[1]，也是一種良好的天然抗氧化劑，對(duì)神經(jīng)退行性疾病有效[2]。我國(guó)將銀杏葉作為保健茶使用也具有了十余年的歷史，由于其具有很好的抗氧化、抗衰老的重要保健作用，受到國(guó)內(nèi)外的歡迎[3]，但銀杏葉中存在著銀杏酚酸類物質(zhì)[4]，研究發(fā)現(xiàn)其具有致敏性、細(xì)胞毒性和免疫毒性等作用，是銀杏葉提取物GBE和銀杏茶中的主要毒性物質(zhì)，其食用安全性已引起人們的高度重視[5]。因此，筆者對(duì)脫酚酸銀杏葉保健茶進(jìn)行了研究，既可保持銀杏葉良好的心腦血管保健作用，又可減少有害物質(zhì)帶來的損害。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DF-XS-10型中藥粉碎機(jī) （沈陽基石東方機(jī)械有限公司）；烘箱、HA221-50-06型超臨界二氧化碳提取設(shè)備（江蘇南通華安超臨界萃取有限公司）；Waters 2695/2996（ailliance）；色譜柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.2 試藥

總銀杏酸對(duì)照品（批號(hào)：111594-200502，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；白果新酸（111690-200702，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；銀杏葉由廣州市藥材公司購(gòu)買（江蘇省邳州市）；水為雙重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液制備

準(zhǔn)確稱取干燥后的粉碎為細(xì)粉的銀杏葉適量，加入正己烷索氏提取10 h，提取液減壓濃縮至干，用少量石油醚溶解加樣于硅膠柱上，先用石油醚50 ml洗滌。再用石油醚-乙醚-甲酸（89∶11∶1）洗脫，收集銀杏酸組分，濃縮至干。用無水甲醇溶解、定容后，進(jìn)行HPLC分析，根據(jù)銀杏酸峰面積，求出銀杏酸含量[6]。

色譜系統(tǒng)、對(duì)照品溶液的制備及測(cè)定方法按照《中國(guó)藥典》2010年版銀杏葉提取物項(xiàng)下總銀杏酸的要求進(jìn)行測(cè)定[5]。

2.2 制備工藝研究

2.2.1 凈選、洗凈 產(chǎn)區(qū)購(gòu)買回來的銀杏葉中常含有少量雜物、腐葉及灰塵。因此需要在潔凈的工作臺(tái)上人工去除雜物及腐爛葉，并用適量的水快速?zèng)_洗去除灰塵。

2.2.2 烘干及粉碎 經(jīng)過凈選、洗凈的銀杏葉需要烘干到水分為4%～6%，以適合下一步的粉碎、脫酸的操作。烘干溫度是對(duì)烘干的時(shí)間及沖泡出來的茶味有比較大的影響，實(shí)驗(yàn)表明以50℃，烘干36 h的口感為好。70℃烘干20 h，可以在口感要求不高的時(shí)候采用；而100℃烘干只需要8 h，但是口感比較差，有焦糊味，不太適合飲用。見表1。烘干后葉子粉碎過篩為20～60目。

2.2.3 脫酚酸 取以上工序獲得的銀杏葉子進(jìn)行脫酸研究[7]。實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)法[8]。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選取萃取壓力（A）、萃取溫度（B）、解析壓力（C）作為考察因素，每個(gè)因素各取三個(gè)水平，以脫銀杏酸率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，設(shè)置 L9（34）正交試驗(yàn)（表 2～4）。 取一定量的粉碎好的銀杏葉放入萃取釜中按照正交設(shè)計(jì)好的萃取壓力、溫度及解析壓力（解析溫度為室溫25℃）設(shè)置好，超臨界萃取2 h，然后出料，測(cè)定銀杏葉中總酚酸含量，計(jì)算出脫酸率。脫酸率=（1-萃取過的銀杏葉中的銀杏酸的含量/原銀杏葉中銀杏酸的含量）×100%。

表1 烘干條件的選擇

表2 因素水平表

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表4 方差分析表

由表3據(jù)直觀分析顯示，各因素的影響大小順序?yàn)檩腿毫Γ窘馕鰤毫Γ据腿囟取Ｓ赏灰蛩氐娜齻€(gè)水平比較可知，A3＞A2＞Al、C1＞C2＞C3、最佳工藝條件為A3B3C1。 方差分析表明，因素A和C對(duì)指標(biāo)成分脫除率有顯著性差異 （F比＞F臨界值），而因素B無顯著性差異。正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件為A3B3C1，即用萃取壓力為 30 MPa，萃取溫度為 60℃，解析壓力為 4 MPa。

以最佳工藝萃取3批銀杏葉，脫酸率為85.79%，RSD為3.19%。萃取過的銀杏葉中銀杏酸含量為0.22%，低于日本銀杏茶產(chǎn)品（0.27%）。工藝穩(wěn)定，脫酸率比較高，可用于銀杏保健茶的脫酸，而且不影響銀杏葉中的黃酮和內(nèi)酯的含量。

2.3 裝袋成品

取脫酸銀杏葉分裝成5 g/袋，10袋裝入紙盒即成。

3 討論

銀杏酸為6-烷基或烯基水楊酸[9]，其結(jié)構(gòu)中雖有芳羥基和羧基等極性基團(tuán)，但因6位上的側(cè)鏈?zhǔn)翘紨?shù)為13～17的長(zhǎng)鏈（雙鍵數(shù)為0～3），使銀杏酸為脂溶性成分，顯弱極性，可溶于非極性的超臨界CO2中，而銀杏葉中的主要藥用成分黃酮和內(nèi)酯的極性較大，不加極性溶劑夾帶劑時(shí)無法用超臨界CO2萃取出黃酮和內(nèi)酯。所以利用超臨界CO2不僅可以選擇性地萃取出銀杏葉中的銀杏酸，而且對(duì)其中的有效成分黃酮和內(nèi)酯無影響[10]。

采用本工藝制備的銀杏脫酸袋茶，既脫去容易導(dǎo)致過敏等不良作用的銀杏酚酸類成分，又保留了銀杏葉中的有效成分，銀杏黃酮及銀杏內(nèi)酯，不含溶劑脫酸導(dǎo)致的溶劑殘留，保持了良好的口感，工藝穩(wěn)定可控。

[1]張慶紅,王洪星,谷洪燕.銀杏葉化學(xué)成分及提取分離研究概況[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志,2005,18(10):1532-1533.

[2]王曉峰.天然抗氧化物與神經(jīng)退行性疾病[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,12(1):147-150.

[3]梁立興.我國(guó)銀杏茶開發(fā)中存在的問題和對(duì)策[J].林業(yè)科技開發(fā),2003,17(2):6-8.

[4]陳西娟,王成章,葉建中.銀杏葉化學(xué)成分及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物質(zhì)化學(xué)工程,2008,42(4):57-62.

[5]吳向陽,仰榴青,陳鈞.銀杏茶中有毒成分銀杏酸的研究[J].分析化學(xué),2003,31(11):1407.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典 [S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[7]侯峰,華文俊,姚煜東,等.超臨界CO2脫除銀杏葉提取物中酚酸的研究[J].中草藥,2003,34(1):37-39.

[8]周懷梧,倪永興.醫(yī)藥應(yīng)用概率統(tǒng)計(jì)[S].上海:百家出版社,1989.

[9]譚衛(wèi)紅,沈兆邦,王成章,等.銀杏葉中烷基酚化合物的分離與鑒定[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2001,21(4):1-6.

[10]吳向陽,仰榴青,陳鈞等.超臨界CO2脫除銀杏葉中銀杏酸的研究[J].食品科學(xué),2003,24(10):85-88.