王 巖，劉欣欣

(1.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016; 2.遼寧普誠醫(yī)藥有限公司，遼寧 沈陽 110014)

嘎日迪五味丸為1998年版《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準·蒙藥分冊》收載的方劑，主要由制草烏、訶子、人工麝香、水菖蒲和木香組方，是治療風(fēng)濕、頭痛、白喉、炭疽、壞血病、瘰疬瘡瘍、疥癬等的一種蒙藥制劑。在文獻[1－2]的基礎(chǔ)上，筆者采用高效液相色譜法對嘎日迪五味丸中烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的含量進行了測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AT高效液相色譜儀，Anstar工作站;BS124S型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司);BU3120型超聲儀。嘎日迪五味丸(內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠，批號為090901);烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0720－9807，0799－9403，0798－9403);甲醇、氯仿、三乙胺為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Symmetry C18柱(150 mm × 4.6 mm，5μm);流動相:甲醇 －水 －氯仿 －冰醋酸 －三乙胺 (50∶50∶2∶1∶0.6);檢測波長:254 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL;柱溫:25 ℃。

2.2 溶液制備

精密稱取烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿對照品適量，加水溶解制成每1 mL溶液分別含烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿90 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。稱取那嘎日迪五味丸劑粉末約25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，滴加5滴氨水，加無水乙醚100 mL，超聲振蕩30 min，放置3 h，過濾，殘渣用無水乙醚25 mL洗滌3次，合并濾液，回收溶劑，殘留物用二氯甲烷溶解，定量轉(zhuǎn)移至1 mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方制備不含草烏的樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察[3－4]:準確量取對照品溶液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL，分別置1 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，分別取10 μL進樣分析。以對照品峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進行線性回歸，烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的回歸方程分別為 A1=2.084×106C+3.120 × 104，A2=1.827 × 106C+1.680 × 104，A3=1.618 ×106C －3.970 ×104，相關(guān)系數(shù) r分別為 0.9996，0.9998，0.9998。結(jié)果表明，烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的質(zhì)量濃度均在9.0～45.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

回收率試驗:精密稱取樣品(批號為090901)粉末9份，每份25 g，分別加入一定量的對照品，按供試品溶液制備方法操作，在上述色譜條件下進樣，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿回收率試驗結(jié)果(n=6)

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品，依法制備供試品溶液6份并測定含量。結(jié)果烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿含量的 RSD分別為0.82%，0.64% ，0.77%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗:吸取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12 h 時測定。結(jié)果烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿面積的 RSD分別為0.88%，0.94%，1.02%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.4 樣品含量測定

取批號為090901的樣品，照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依法測定樣品中烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的含量(mg/g)。結(jié)果樣品中烏頭堿含量為0.00186%，中烏頭堿含量為0.00562%，次烏頭堿含量為0.00513%。

3 討論

高效液相色譜法測定制劑中烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿含量的研究較多，多以甲醇－氯仿－水和乙腈－氯仿水系統(tǒng)為主，但嘎日迪五味丸藥味較多，單純的上述流動相均難以分離測定。文獻[3]報道，流動相中加入三乙胺等堿性調(diào)節(jié)劑。經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，在選用的色譜條件下加堿性調(diào)節(jié)劑可以改善色譜峰的對稱度，但烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿保留時間附近色譜峰的分離度不令人滿意。為此在流動相系統(tǒng)中加入少量的冰醋酸使形成緩沖鹽溶液，結(jié)果使嘎日迪五味丸中烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的峰形、與其他物質(zhì)的分離度等均達到了含量測定的要求。

在試驗過程中，使用的檢測器是紫外－可見光檢測儀，由于烏頭類生物堿結(jié)構(gòu)中只有1個苯環(huán)結(jié)構(gòu)，因此其摩爾吸光系數(shù)較小，在制作標(biāo)準曲線時對照品溶液的質(zhì)量濃度需較高。在本試驗中使用的高效液相色譜儀及反相色譜柱，測定烏頭類生物堿的含量時，進樣量(體積)對其色譜行為有較大的影響。在進樣量較小時，才能得到較好的色譜峰。因此，采用人為控制進樣量，通過多次進樣(RSD＜2%)，取平均值。文中所用方法簡單、可行，重現(xiàn)性好，適用于嘎日迪五味丸中烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的含量測定。

[1]韓國忠，白玉霞.蒙藥嘎日迪五味丸研究概況[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2009，24(5):563 －565.

[2]李麗敏，王欣美，王 柯，等.RP－HPLC測定鎮(zhèn)痛活絡(luò)酊中3種烏頭類生物堿含量[J].中成藥，2008(12):1785－1789.

[3]陶淑娟，邵太麗，畢開順.RP－HPLC法測定蒙藥那如3味丸中烏頭類生物堿含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2005，22(3):197－199.

[4]陳曉穎，梁基智，梁松慶，等.高效液相色譜法測定舒絡(luò)靈酊劑中次烏頭堿的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008(2):106－107，111.