張觀宇 ，許立莉 ，王建琴 ，孫鳳娟 ，韓吉萍

1.遼寧省遼陽(yáng)市遼化總醫(yī)院病理科，遼寧遼陽(yáng) 111003；2.遼寧省遼陽(yáng)市遼化總醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧遼陽(yáng) 111003

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，近40年來(lái)由于宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普遍與應(yīng)用，宮頸癌和癌前病變得以早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，其發(fā)病率和死亡率明顯下降[1-2]。研究資料表明，宮頸癌通常由上皮內(nèi)瘤變演變而來(lái)，由于上皮內(nèi)瘤變與鱗狀上皮內(nèi)增生、腺上皮鱗化等病變?cè)谛螒B(tài)上常有相似之處，單純依靠病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行鑒別比較困難。因此，本研究在液基細(xì)胞學(xué)檢查宮頸病變的基礎(chǔ)上，觀察分析其相應(yīng)組織形態(tài)變化、免疫組織學(xué)Ki-67和PTEN的改變，旨在探討其在宮頸病變?cè)\斷和鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集遼化總醫(yī)院2010年1月～2011年3月宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查病例1330例，年齡24～79歲，平均年齡44.7歲。

1.2 方法

1.2.1 宮頸細(xì)胞學(xué)檢查 采用進(jìn)口新柏氏一次性無(wú)菌采樣器，將宮頸細(xì)胞采集刷前面的刷毛伸入宮頸管并抵住宮頸，按順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)3～5圈，并迅速將采集刷伸入細(xì)胞保存液中反復(fù)推壓、搖動(dòng)。

表1 44例宮頸黏膜上皮中Ki-67和PTEN的表達(dá)

1.2.2 陰道鏡檢查和宮頸活檢 宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查陽(yáng)性者（≥ASC-US定為細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性[1]）通過(guò)陰道鏡選擇可疑病灶準(zhǔn)確定位、分點(diǎn)取活檢。

1.2.3 病理學(xué)檢查 所有標(biāo)本常規(guī)制片，HE染色，從每例分點(diǎn)取材的標(biāo)本中選取病變最顯著的組織塊，連續(xù)切片，超敏TMHRP法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，一抗Ki-67和PTEN購(gòu)自北京英碩力新柏科技有限公司，選取20例宮頸炎作為對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

Ki-67陽(yáng)性表達(dá)為胞核呈現(xiàn)棕黃色顆粒，在著色區(qū)域選擇5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)上皮細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%為（-），＞10%為（+）[3]。 PTEN 陽(yáng)性表達(dá)為胞核呈現(xiàn)棕黃色顆粒，判定標(biāo)準(zhǔn)同Ki-67。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，采用非參數(shù)Spearman等級(jí)進(jìn)行相關(guān)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

1330例液基細(xì)胞檢查發(fā)現(xiàn)非典型鱗狀細(xì)胞61例，組織學(xué)檢查24例為上皮內(nèi)瘤變，其中，CINⅠ11例，CINⅡ～CINⅢ13例。Ki-67和PTEN在24例上皮內(nèi)瘤變和20例對(duì)照的表達(dá)情況見(jiàn)表1。對(duì)照組和低度上皮內(nèi)瘤變中Ki-67和PTEN表達(dá)未見(jiàn)有相關(guān)性，低度上皮內(nèi)瘤變和高度上皮內(nèi)瘤變中Ki-67 和 PTEN 顯示呈負(fù)相關(guān)（r=-0.818，P＜0.05），表 2。

表2 24例宮頸病變上皮中Ki-67和PTEN相關(guān)性分析（例）

3 討論

從世界范圍來(lái)講，宮頸癌在年輕女性發(fā)病率有所增加。在我國(guó)，目前宮頸癌發(fā)病率居?jì)D科惡性腫瘤首位[4]，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅婦女健康的疾病[5]，為此，2006年科技部將包括宮頸癌在內(nèi)的常見(jiàn)惡性腫瘤的預(yù)防、早診和綜合治療納入“十一五”國(guó)家科技重大項(xiàng)目，2009年中央財(cái)政撥款7640萬(wàn)元，在全國(guó)200個(gè)縣為農(nóng)村婦女免費(fèi)進(jìn)行宮頸癌篩查。宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查及檢測(cè)后對(duì)陽(yáng)性病例做宮頸活檢是目前診斷宮頸病變的有效手段，但僅僅是根據(jù)常規(guī)HE切片對(duì)于某些宮頸良性病變與低度上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ）以及低度上皮內(nèi)瘤變與高度上皮內(nèi)瘤變（CINⅡ～CINⅢ）的鑒別診斷存在一定的困難。

Ki-67是一種在細(xì)胞 G1、S、M、G2期均會(huì)出現(xiàn)的核抗原，表達(dá)的高低可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞增殖的情況[6]。已有研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67有可能作為確定癌變?nèi)巳焊呶€(gè)體分子標(biāo)志物[7]。本組研究表明，對(duì)照組為良性病變，Ki-67多在基底層表達(dá)，即使在個(gè)別鱗狀細(xì)胞乳頭狀增生中，Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞只是散在分布，考慮是上皮鱗化后處在不成熟階段，增殖較活躍。低度上皮內(nèi)瘤變中Ki-67陽(yáng)性率升高，但與對(duì)照組的表達(dá)率差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。高度上皮內(nèi)瘤變中Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增高，且陽(yáng)性細(xì)胞增至上皮的中層和表層，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，低度上皮內(nèi)瘤變和高度上皮內(nèi)瘤變組間差異顯著（P＜0.05）。

PTEN是1997年由Stick等3個(gè)研究小組分別發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，定位于人類(lèi)染色體10q23，PTEN由403個(gè)氨基酸組成，具有磷酸酶活性，起到阻止細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡等作用[8]。在人類(lèi)的前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤等多種腫瘤中，發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白表達(dá)缺失，提示該基因的表達(dá)降低與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，但具體機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，PTEN在正常對(duì)照組陽(yáng)性率為100%（20/20），在宮頸上皮內(nèi)瘤變中PTEN陽(yáng)性率下降，高度病變中僅為15.4%（2/13），且隨著上皮內(nèi)瘤變級(jí)別升高PTEN水平逐漸降低，說(shuō)明PTEN低表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多基因長(zhǎng)期協(xié)同作用的結(jié)果。本研究還發(fā)現(xiàn)，在宮頸上皮內(nèi)瘤變中Ki-67和PTEN的表達(dá)出現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.818），說(shuō)明Ki-67陽(yáng)性同時(shí)PTEN陰性的病例具有更高的癌變風(fēng)險(xiǎn)，聯(lián)合檢測(cè)可以起到互相補(bǔ)充的作用。

綜上所述，對(duì)宮頸癌的篩查和預(yù)防，臨床通過(guò)涂醋白、涂碘方法只提高了宮頸病變?nèi)〔牡臏?zhǔn)確率，液基細(xì)胞學(xué)檢查與病理組織學(xué)診斷只能簡(jiǎn)單進(jìn)行分級(jí)，而聯(lián)合檢測(cè)Ki-67和PTEN則可以反映細(xì)胞增殖狀態(tài)，對(duì)于低度和高度上皮內(nèi)瘤變鑒別具有重要意義，對(duì)于高度上皮內(nèi)瘤變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估具有重要的生物學(xué)意義，可以更好地指導(dǎo)臨床治療，降低對(duì)患者的損害，是早期合理預(yù)防宮頸癌的重要途徑。

[1]金善姬,李點(diǎn)珠,崔賢子,等.液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查與巴氏涂片法臨床比較應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2011,1(1):45-46.

[2]樂(lè)杰.婦產(chǎn)科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:263.

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[4]紀(jì)小龍,張雷.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2011:99.

[5]劉金鳳.正確認(rèn)識(shí)液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在宮頸病變篩查的價(jià)值[J].中國(guó)婦幼保健,2010,25(15):2167.

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