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        歐洲越桔提取物改善小鼠葡萄膜炎的機制研究

        2011-07-28 09:57:50李小迪李善兵何蓉蓉栗原博
        中國藥理學(xué)通報 2011年11期
        關(guān)鍵詞:蓉蓉葡萄膜提取物

        姚 楠,李小迪,李善兵,何蓉蓉,栗原博

        (1.廣東省中醫(yī)研究所,廣東廣州 510095;2.暨南大學(xué)中藥及天然藥物研究所,廣東 廣州 510632)

        目前葡萄膜炎的發(fā)病機制尚未完全明確,缺乏理想的預(yù)防及治療措施[1]。葡萄膜炎動物模型的研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎大鼠眼內(nèi)存在氧化應(yīng)激[2]。歐洲越桔屬于杜鵑花科越桔亞科植物,富含花色苷類化合物。本課題組首次發(fā)現(xiàn)歐洲越桔提取物(bilberry extract,BE,含有 42.04% 的花色苷)[3]對束縛應(yīng)激以及葡萄膜炎小鼠眼內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)都具有一定的改善作用[4-5]。在此,本研究對改善作用的機制進行了初步探討,研究了葡萄膜炎小鼠眼內(nèi)一氧化氮誘導(dǎo)型合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表達水平,核轉(zhuǎn)錄因子 κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)中的 NF-κB p65 mRNA以及蛋白的表達水平。

        1 材料與方法

        1.1 試劑 歐洲越桔提取物(bilberry extract,BE)(批號:28770/M1)購自意大利Indena S.p.A.公司,傷寒沙門菌脂多糖LPS購自美國Sigma-Aldrich公司。

        1.2 動物 體質(zhì)量18~22 g,6周,♂,SPF級BALB/C小鼠90只,購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,許可證號:SCXK(粵)2008-0002。飼養(yǎng)溫度為(23±2)℃,照明時間為12 h·d-1(7:00~19:00)。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進行實驗。

        1.3 方法 將90只♂ BALB/C小鼠隨機分為正常(Control)對照組、模型(LPS)組、BE低劑量(LPS+BE 50 mg·kg-1)組、BE 中劑量(LPS+BE 100 mg·kg-1)組和 BE 高劑量(LPS+BE mg·kg-1)組共5組,每組18只小鼠。BE不同劑量給藥組連續(xù)5 d灌胃給予BE,Control組和LPS組給予同體積蒸餾水,每天1次。在第5天LPS組和BE各劑量組小鼠灌胃后立即進行LPS(來源于傷寒沙門菌)足底皮下注射,注射劑量為100 μg/只,24 h后乙醚麻醉處死小鼠收集眼球。通過半定量RT-PCR技術(shù)檢測眼組織iNOS和NF-κB p65基因表達,并且通過 Western blot技術(shù)檢測眼組織NF-κB p65蛋白表達。

        2 結(jié)果

        2.1 歐洲越桔提取物對注射LPS后小鼠眼組織iNOS mRNA和NF-κB p65 mRNA表達的影響 見 Tab 1。

        Tab 1 Effects of bilberry extract(BE)on expression of iNOS and NF-κB p65 mRNA levels in eyes of micetreated with LPS(±s,n=18)

        Tab 1 Effects of bilberry extract(BE)on expression of iNOS and NF-κB p65 mRNA levels in eyes of micetreated with LPS(±s,n=18)

        ##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs LPS group

        Group Dose/mg·kg-1 iNOS NF-κB p65 Control 0.000 ±0.000 0.133 ±0.016 LPS 0.193 ±0.026## 0.207 ±0.011##LPS+BE 50 0.194 ±0.029 0.193 ±0.013 LPS+BE 100 0.194 ±0.020 0.148 ±0.018**LPS+BE 200 0.169 ±0.019* 0.139 ±0.014**

        2.2 歐洲越桔提取物對注射LPS后小鼠眼組織NF-κB p65蛋白表達的影響 見Tab 2。

        Tab 2 Effects of bilberry extract(BE)on expression of NF-κB p65 protein levels in eyes of mice treated with LPS(±s,n=18)

        Tab 2 Effects of bilberry extract(BE)on expression of NF-κB p65 protein levels in eyes of mice treated with LPS(±s,n=18)

        ##P <0.01 vs control group;**P <0.01 vs LPS group

        Group Dose/mg·kg-1 NF-κB p65 Control 0.380 ±0.048 LPS 0.908 ±0.071##LPS+BE 50 0.817 ±0.063 LPS+BE 100 0.771 ±0.038**LPS+BE 200 0.674 ±0.046**

        3 討論

        我們的研究結(jié)果已經(jīng)發(fā)現(xiàn)NO水平在葡萄膜炎動物模型中明顯升高[5-6]。在本實驗中,與空白組相比,模型組iNOS mRNA表達的明顯增高,促使 iNOS酶活性提高,最終導(dǎo)致NO水平升高,而高劑量的 BE能明顯降低 iNOS mRNA的表達水平,從而降低 NO的水平。NF-κB p65是一種啟動iNOS等氧化應(yīng)激相關(guān)基因表達的核轉(zhuǎn)錄因子,氧化應(yīng)激可以誘導(dǎo)無活性的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB三聚體轉(zhuǎn)變成有活性的NF-κB二聚體進入細胞核內(nèi),發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[7],而且NF-κB 與葡萄膜炎的發(fā)病密切相關(guān)[8]。我們針對 NF-κB p65的半定量RT-PCR檢測和Western blot檢測的結(jié)果很相似:在LPS組中,NF-κB p65 mRNA和蛋白的表達都明顯升高,同時中劑量和高劑量的BE不僅明顯降低了其mRNA的表達水平,而且也降低了其蛋白表達水平,還表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。

        綜上所述,歐洲越桔提取物改善葡萄膜炎小鼠眼組織氧化應(yīng)激狀態(tài)可能與其降低NF-κB p65的表達有關(guān),其具體的機制有待深入研究。

        [1] 姚 楠,何蓉蓉,栗原博.內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎動物模型研究進展[J].眼科研究,2010,28(12):1187-90.

        [1] Yao N,He R R,Kurihara H.Progress of study on animal model of endotoxin-induced uveitis[J].Chin Ophthalmic Res,2010,28(12):1187-90.

        [2] Bosch-Morell F,Roma J,Puertas F J,et al.Efficacy of the antioxidant ebselen in experimental uveitis[J].Free Radic Biol Med,1999,27(3 -4):388 -91.

        [3] Bao L,Yao X S,Tsi D,et al.Protective effect of bilberry(Vaccinium myrtillus L.)extract on KBrO3-induced kidney damage in mice[J].J Agric Food Chem,2008,56(2):420 -5.

        [4] 姚 楠,何蓉蓉,栗原博.歐洲越桔提取物對小鼠眼內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2010,26(5):694-5.

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        [6] 蘭 芳,何蓉蓉,姚 楠,等.葉黃素對小鼠葡萄膜炎氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用[J].中國藥理學(xué)通報,2010,26(9):1257-8.

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        [8] Srivastava S K,Ramana K V.Focus on molecules:nuclear factorkappaB[J].Exp Eye Res,2009,88(1):2 -3.

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