熊維政 ，金燕飛 ，姜家書 ，石 磊 ，張春霞

(1.河南羚銳制藥股份有限公司，河南 信陽 465550;2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008)

槐枝為豆科植物中槐 Sophora japonica L.的干燥嫩枝，其葉為槐葉?；敝ψ钤缡蛰d于《名醫(yī)別錄》，槐葉最早收載于《食療本草》，二者在《本草綱目》等一些本草文獻中均有論述[1]。近年來民間用槐枝治療燒傷有較好的療效，也是治療燒傷藥紫槐燒傷膏的主要藥物組成之一;適量地食用槐葉及其制劑，對人體保健能起到積極的作用[2]?；敝?、槐葉均含有較多的黃酮類化合物，其中以蘆丁為主[3－4]。蘆丁又名蕓香苷，有鎮(zhèn)痛作用[5]，還具有抗癌、抗感染、抗過敏、抗菌、抗病毒、抗糖尿病、抗骨質(zhì)疏松、抗血栓、抗輻射、抑制增生、保護肝臟和心血管等多種生理活性，因而在藥品及食品的開發(fā)應(yīng)用中越來越受到關(guān)注。為獲得優(yōu)質(zhì)藥材，更好地開發(fā)和利用蘆丁資源，筆者對槐枝、槐葉中的蘆丁含量進行了考察，現(xiàn)報道如下。

1 儀器和材料

島津LC－2010AHT型高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元泵、在線真空脫氣機、自動進樣器柱溫箱、LC－Solution色譜工作站(日本Shimadzu公司);KQ－250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為100080－200707);甲醇為色譜純(天津市四友精細化學(xué)品有限公司)，冰醋酸為分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，水為娃哈哈純凈水?；敝椴杉谕恢仓辍⑼瑸榇杭?、不同生長年限的枝條，同一植株、嫩枝的枝條木質(zhì)部，同為春季、不同植株的嫩枝;槐葉，采集時間為槐葉中蘆丁含量高的五月[2]。將所采集的槐枝(切段)、槐葉低溫干燥，粉碎，過三號篩備用。采集地點為河南省信陽市新縣城郊，原植物經(jīng)河南省信陽市藥品檢驗所潘永峰教授鑒定均為豆科植物中槐 Sophora japonica L.。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent C18柱 (250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －1%冰醋酸(32 ∶68);檢測波長:257 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;進樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品10 mg，加甲醇100 mL，制成每1 mL含0.1 mg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取各樣品粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm 濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 2，4，6，8，10，14，16，20 μL，按擬訂的色譜條件測定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=4.010X－3.567，r=0.999(n=8)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在 0.2210～2.210 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件重復(fù)進樣6次，測定槐枝中蘆丁的峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為1.06%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取供試品溶液 10 μL，分別在 0，3，6，8，12，24 h時測定槐枝中蘆丁的峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為1.21%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取槐枝藥材粉末，按2.2項下方法同時制備6份供試品溶液，測定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為1.18%(n=6)，表明該方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的槐枝藥材粉末0.25 g，共9 份，分別精密加入對照品貯備液 2，2，2，3，3，3，5，5，5 mL，按照供試品溶液制備方法制備溶液并測定蘆丁峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 蘆丁加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

分別精密量取各供試品溶液 10 μL，按擬訂的色譜條件測定槐枝、槐葉中蘆丁的峰面積，計算蘆丁含量。結(jié)果見表2。

表2 槐枝與槐葉中蘆丁含量比較結(jié)果

3 討論

試驗結(jié)果顯示，同一植株、不同生長年限的槐枝中蘆丁的含量不同，嫩枝中蘆丁含量最高，2年生枝條次之，3年生枝條中蘆丁含量最低。說明槐枝中蘆丁的含量隨著其生長年限的增加而減少，這為尋找蘆丁含量高、優(yōu)質(zhì)的鎮(zhèn)痛藥物槐枝提供了依據(jù)。不同槐樹植株中嫩枝的蘆丁含量也不相同，這說明槐樹嫩枝中蘆丁含量的高低與槐樹生長環(huán)境、植株的大小有關(guān)，提示在尋找中藥材槐枝時要注意這一問題。而在同一植株嫩枝的不同部位中，槐枝枝皮中蘆丁的含量最高，木質(zhì)部中也含有蘆丁。雖然木質(zhì)部中蘆丁含量較低，但為了擴大蘆丁來源，提高槐枝各部位的利用率，木質(zhì)部也具有利用價值。

本試驗還對不同植株的槐葉中蘆丁含量進行了測定，有些植株的槐葉中蘆丁含量比枝條中含量還要高，說明槐葉也可作為蘆丁提取的一個重要來源，這為進一步擴大蘆丁的天然來源提供了參考，同時也為進一步開發(fā)槐葉制劑奠定了基礎(chǔ)。

[1]明·李時珍.本草綱目(校訂本)·下冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1982:2005－2006.

[2]王 憬，劉景東，勾凌燕，等.國槐槐葉中蘆丁含量與生長時間關(guān)系的研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐，2010，24(3):65.

[3]王春桃，唐于平，周 玲，等.槐枝皮中黃酮類成分研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2008，48(7):65.

[4]張治軍，饒偉文.槐枝不同部位中蘆丁含量的比較[J].海峽藥學(xué)，2009，21(9):69.

[5]宋必衛(wèi)，馬傳庚，田 薇，等.蘆丁的鎮(zhèn)痛作用[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1995，30(3):177.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國中醫(yī)藥科技出版社，2010:333－334.