王岳峰， 劉苡菡， 耿 耘， 馬超英

(西南交通大學(xué)峨眉校區(qū)，四川峨眉山614202)

峨?yún)閭阈慰贫雲(yún)僦参锒雲(yún)nthriscus sylvestris(L.)Hoffm.的根，與峨蕊、雪磨芋，歷來被人們認(rèn)為是峨眉山的三大特產(chǎn)而聞名遠(yuǎn)近。中醫(yī)認(rèn)為峨?yún)⒂醒a(bǔ)中益氣，祛瘀生新之功效［1］。性甘、味辛、微苦，入脾、胃、肺三經(jīng)。分布于峨眉山地區(qū)的神殿附近的峨山溝、九老洞、金頂，野生于灌木林緣、草坡。峨?yún)⒅兄饕卸雲(yún)?nèi)酯，具有殺蟲、抑制癌細(xì)胞增殖，抗病毒、抗癌和抗有絲分裂的作用［2］。峨?yún)僦参锷L迅速，資源豐富。峨?yún)⒃谖覈米髯萄a(bǔ)強(qiáng)壯藥，沿用歷史悠久。國外學(xué)者對峨?yún)?、刺果峨?yún)ⅰ|北峨?yún)⒌戎参镒隽瞬糠盅芯?，研究部位主要包括根，葉，花和種子等，從峨?yún)⒅蟹蛛x出殺蟲、抗癌、抗有絲分裂、抗病毒的有效物質(zhì)。峨?yún)⒌幕瘜W(xué)成分主要有峨?yún)?nèi)酯、異峨?yún)?nèi)酯、水芹酮以及紫花前胡苷、東莨宕苷等。文獻(xiàn)《Volatile components from Anthriscus sylvestris(L.)Hoffm.》是關(guān)于峨?yún)⒒瘜W(xué)成分研究的最新(2002年)的一篇報(bào)道，從峨?yún)⒅杏盟魵庹麴s法分離得到數(shù)十種揮發(fā)性成分。國內(nèi)有關(guān)峨?yún)⒌难芯?，多是從生態(tài)學(xué)［3-4］、栽培學(xué)［5-6］等方面進(jìn)行的。關(guān)于峨?yún)⒒瘜W(xué)成分方面的研究，國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道微乎其微。目前，對峨?yún)⒅卸雲(yún)?nèi)酯的定量測定報(bào)道尚無研究。本實(shí)驗(yàn)旨在利用高效液相色譜法測定10個不同批次的峨?yún)⒅卸雲(yún)?nèi)酯，計(jì)算出其質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍，為峨?yún)⒌馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供基礎(chǔ)性研究資料。

1 儀器、藥品試劑及藥材

1.1 儀器 島津LC-20AT高效液相色譜儀，大連中匯達(dá) VP-ODS C18柱(4.6 mm ×200 mm，5 μm)。

1.2 藥品試劑 峨?yún)?nèi)酯對照品(實(shí)驗(yàn)室自制);甲醇為色譜純(科密歐);水為超純水;其他試劑均為分析純，使用前均經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。

1.3 藥材 藥材均由西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院宋良科教授鑒定。來源見表1。

表1 藥材來源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 大連中匯達(dá) VP-ODS C18柱(4.6 mm ×200 mm，5 μm)，檢測波長 293 nm，流動相甲醇-水(52∶48)為流動相，柱溫35℃，體積流量1.0 mL/min。進(jìn)樣量 10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取峨?yún)?nèi)酯對照品0.0075 g，用甲醇溶解并定容于100 mL量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為0.075 mg/mL的溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取峨?yún)⒎勰?.0 g，置錐形瓶中，稱定質(zhì)量。樣品瓶中直接加入48 mL規(guī)定濃度的甲醇溶液，回流3次，每次60 min，每次回流后，補(bǔ)足質(zhì)量，過濾，沖洗濾渣和錐形瓶，合并3次濾液與洗液，減壓蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并定容?0 mL量瓶中。微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 取峨?yún)?nèi)酯對照品溶液，分別精密吸取 2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL 進(jìn)入液相色譜儀，測定峰面積。試驗(yàn)結(jié)果表明:峨?yún)?nèi)酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線為 Y=570852.60X － 24604.56，r=0.9998(n=6)，峨?yún)?nèi)酯在0.1875 ～1.1250 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積成良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取質(zhì)量濃度為0.075 mg/mL的溶液，精密量取10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，考察峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.2088%。試驗(yàn)結(jié)果表明，精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取同一峨?yún)悠? g，按2.3 項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別在 0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣10 μL，計(jì)算各色譜峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，峰面積的RSD=1.12%(n=6)，表明樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品5份，依法制備成供試品溶液，精密吸取10 μL測定相對峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為1.9337%(n=6)，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知量(0.0416%)的9 號樣品 4.0 g，置錐形瓶中，稱定質(zhì)量。樣品瓶中直接加入50 mL規(guī)定濃度的甲醇溶液，回流3次，每次60 min，每次回流后，補(bǔ)足質(zhì)量，過濾，沖洗濾渣和錐形瓶，合并3次濾液與洗液，并用甲醇定容于25 mL量瓶中。精密吸取1 mL提取液，置100 mL量瓶中，再分別加入峨?yún)?nèi)酯對照品0.0800 mg/mL的對照品溶液10 mL，用甲醇定容至刻度。平均操作5次，精密吸取10 μL在293 nm處測定吸光度，計(jì)算得回收率，結(jié)果表明平均回收率為100.3%，RSD=0.52%，回收試驗(yàn)良好。具體見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 測定結(jié)果 取10個批次的樣品，依次精密稱定峨?yún)⒎勰?.0 g，分別加入95%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，各提取1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用95%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過并減壓蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ萦?0 mL量瓶中。平行操作兩次。測定峰面積，計(jì)算峨?yún)?nèi)酯的量。結(jié)果見表3。

表3 測定結(jié)果

3 討論

本研究是建立在考察了峨?yún)?nèi)酯的提取工藝的基礎(chǔ)上，通過HPLC測定方法的探索和方法學(xué)考察，根據(jù)對10批峨?yún)⒅卸雲(yún)?nèi)酯測定的結(jié)果，提出了在190～700 nm的波長范圍對峨?yún)?nèi)酯對照品進(jìn)行紫外掃描，確定293 nm作為檢測波長，峨?yún)⑺幉闹卸雲(yún)?nèi)酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不應(yīng)低于0.040%的建議。當(dāng)然，是否有更能反映峨?yún)①|(zhì)量的活性成分作為指標(biāo)，還有待于進(jìn)一步深入研究。

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