王曉梅，趙衛(wèi)星，王永參

(寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工系 陜西省植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 寶雞 721013)

朱砂七為蓼科植物毛脈蓼[Polygonumcillinerve(Nakai) Ohwi]的干燥塊根。主產(chǎn)于陜西秦嶺，是“太白七藥”之一，為我國民間傳統(tǒng)常用草藥。具有清熱解毒、涼血利咽、止血止瀉、祛風(fēng)濕、強(qiáng)腰膝、抗腫瘤的功效，廣泛用于治療多種急慢性疾病，臨床效果顯著[1，2]。鞣質(zhì)又稱單寧，是一類水溶性多酚類化合物，廣泛存在于植物界，也是朱砂七所含的活性成分之一。鞣質(zhì)的藥理作用[3，4]包括抑菌作用、抑制脂質(zhì)過氧化、降低膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度、降低多種誘變劑的誘變性及抗腫瘤作用等。

超聲提取技術(shù)利用超聲波的機(jī)械效應(yīng)、空化效應(yīng)和熱效應(yīng)，增大了介質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)速度和介質(zhì)的穿透力，在用于中草藥的活性成分提取時(shí)，耗時(shí)短、效率高、能耗省[5]，且設(shè)備簡單、重現(xiàn)性好、不產(chǎn)生噪音及污染，與傳統(tǒng)煎煮法相比，克服了原料細(xì)粉易凝聚、易焦化的弊端。作者在此通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)，對超聲波輔助法提取朱砂七中鞣質(zhì)的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑及儀器

朱砂七購自太白山區(qū)，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院胡本祥教授鑒定。

單寧酸，上海華壹生物科技有限公司；去離子水，自制；其余試劑均為市售分析純。

KQ5200E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；BS-244-SS型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；R-1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州長城科工貿(mào)股份有限公司；UV-2550型紫外可見分光光度計(jì)，日本島津。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[6，7]

F-D試劑的配制：取100 g鎢酸鈉、20 g磷鉬酸、50 mL磷酸加入到750 mL蒸餾水中，回流2 h，冷卻至室溫，稀釋至1 L。

精密稱取50 mg單寧酸對照品于50 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并定容至刻度，再用蒸餾水稀釋10倍，即得0.1 mg·mL-1單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密吸取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液置于盛有30 mL蒸餾水的50 mL容量瓶中，加2.5 mL F-D試劑及5 mL飽和碳酸鈉溶液，混勻，加蒸餾水至刻度，充分混勻。靜置30 min后在650 nm處測定吸光度值。以吸光度A對單寧酸濃度(mg·mL-1)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。擬合得線性回歸方程為：A=0.1379c+0.0077，R2=0.9995(n=7)。線性范圍為0～0.35 mg·mL-1。

圖1 單寧酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

稱取粉碎的朱砂七5 g，用70%(體積分?jǐn)?shù)，下同)的乙醇按料液比(質(zhì)量體積比g∶mL，下同)1∶20于50℃超聲提取2次，每次40 min，合并兩次濾液，抽濾，棄去殘?jiān)?，將濾液減壓蒸餾，回收乙醇，餾分即為鞣質(zhì)粗液，加入等體積乙醚萃取，分出水液層，再用等體積乙酸乙酯萃取，棄去沉淀，水液層和乙酸乙酯層分別經(jīng)減壓濃縮、干燥得鞣質(zhì)。

固定其它條件不變，依次改變提取溶劑乙醇的體積分?jǐn)?shù)(40%、50%、60%、70%、80%)、提取時(shí)間(20 min、30 min、40 min、50 min、60 min)、提取溫度(30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)、料液比(1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30)，考察各因素對鞣質(zhì)提取率的影響。

1.2.3 正交實(shí)驗(yàn)

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)。正交實(shí)驗(yàn)的因素和水平見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)的因素和水平

1.3 分析測試

將提取的產(chǎn)品用水溶解定容至100 mL。吸取0.5 mL于50 mL容量瓶中，按照1.2.1方法，測定吸光度，據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到提取樣品中單寧酸的含量，鞣質(zhì)提取率依下式計(jì)算：

式中：m為朱砂七的質(zhì)量，mg；V1為提取液總體積，mL；V2為比色時(shí)吸取提取液體積，mL；P為從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的提取液中鞣質(zhì)含量，mg。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)

圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)(a)、提取時(shí)間(b)、提取溫度(c)和料液比(d)對朱砂七鞣質(zhì)提取率的影響

由圖1可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，鞣質(zhì)提取率最大，為1.79%；提取時(shí)間為40 min時(shí)，鞣質(zhì)提取率最大，為1.75%；提取溫度為60℃，鞣質(zhì)提取率最大，為1.74%；料液比為1∶20時(shí)，鞣質(zhì)提取率最大，為1.84%。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析(表2)

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

由表2可知，各因素對鞣質(zhì)提取率的影響大小依次為：B>A>C>D，即提取溫度對提取率影響最大，其次為乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間，料液比影響最小。最優(yōu)提取條件為A1B3C3D3，即乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比1∶15(g∶mL)、提取溫度70℃、提取時(shí)間50 min，在此條件下提取2次，朱砂七鞣質(zhì)提取率為2.00%。

3 結(jié)論

采用超聲波輔助法提取朱砂七中鞣質(zhì)，通過單因素實(shí)驗(yàn)及正交實(shí)驗(yàn)確定最佳提取條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、提取溫度70℃、料液比1∶15(g∶mL)、提取時(shí)間50 min。在此條件下提取2次，朱砂七鞣質(zhì)提取率為2.00%。為朱砂七的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了參考。

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