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        銀杏外種皮黃酮類化合物的提取方法研究

        2011-07-25 12:36:08宋國斌席國萍
        化學(xué)與生物工程 2011年6期
        關(guān)鍵詞:種皮蘆丁黃酮類

        宋國斌,席國萍

        (山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院,山西 大同 037009)

        銀杏是地球上現(xiàn)存最古老的中生代孑遺植物之一[1],屬銀杏科銀杏屬落葉喬木,又稱白果樹、公孫樹,為我國特有樹種[2]。銀杏外種皮是銀杏果仁的皮層,即種子硬殼外面的肉質(zhì)皮層,俗稱白果衣胞[3]。銀杏外種皮的主要化學(xué)成分是黃酮類化合物、銀杏內(nèi)酯等,其中黃酮類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、防治心血管疾病、增強(qiáng)免疫能力等重要作用。我國有著豐富的銀杏資源,但銀杏外種皮的研究相對較少。在銀杏產(chǎn)區(qū),通常只取其仁,而將外種皮丟棄,既嚴(yán)重污染環(huán)境,又浪費了可觀的生物資源。作者在此分別以水、乙醇、丙酮作為提取溶劑,對銀杏外種皮黃酮類化合物的不同提取方法進(jìn)行比較研究,擬為銀杏外種皮資源的開發(fā)利用提供依據(jù)。

        1 實驗

        1.1 材料、試劑與儀器

        銀杏外種皮,采自貴州省貴陽市烏當(dāng)區(qū)楊昌鎮(zhèn)。

        蘆丁對照品,中國藥檢所;其它試劑均為分析純。

        UNICO UV-2000型紫外可見分光光度計,上海麗度電子科技發(fā)展有限公司;RE-25型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠;METTLER-AE240型電子天平,瑞士梅特勒公司;康氏電動振動儀,北京通縣醫(yī)療器械廠。

        1.2 方法

        1.2.1 銀杏外種皮的前處理

        將銀杏外種皮自然風(fēng)干后,置于50 ℃烘箱中烘至變脆,粉碎,置于冰箱中保存。

        1.2.2 銀杏外種皮總黃酮提取液的制備

        準(zhǔn)確稱取10 g銀杏外種皮,以甲醇為溶劑,用索氏提取器在70 ℃提取至提取液無色,濃縮至干,用70%乙醇溶解定容至50 mL,待測。

        1.2.3 銀杏外種皮黃酮類化合物提取液的制備

        (1)浸提法

        準(zhǔn)確稱取3份銀杏外種皮,每份10 g,在室溫下,分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑,浸提3次,每次1 h;合并提取液,于50 ℃減壓濃縮至干,用70%乙醇溶解定容至50 mL,待測。

        (2)振蕩提取法

        準(zhǔn)確稱取3份銀杏外種皮,每份10 g,在室溫下,分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑,振蕩提取3次,每次1 h;合并提取液,于50 ℃減壓濃縮至干,用70%乙醇溶解定容至50 mL,待測。

        (3)回流提取法

        準(zhǔn)確稱取3份銀杏外種皮,每份10 g,在70 ℃下,分別以5 BV的水、乙醇、丙酮作為提取溶劑,回流提取3次,每次1 h;合并提取液,于50 ℃減壓濃縮至干,用70%乙醇溶解定容至50 mL,待測。

        1.3 測定方法

        1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品、70%乙醇為溶劑,準(zhǔn)確配制0.13 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10 mL具塞試管中,加30%(體積分?jǐn)?shù))乙醇至5 mL;再加5%(質(zhì)量濃度)NaNO20.3 mL,搖勻,放置6 min;再加10%(質(zhì)量濃度)Al(NO3)30.3 mL,搖勻,放置6 min;再加4%(質(zhì)量濃度)NaOH 4 mL;用蒸餾水稀釋至10 mL,室溫放置15~20 min,以蒸餾水為空白。在波長510 nm處測定吸光度,由最小二乘法得濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,并據(jù)此計算黃酮類化合物含量[4]。

        1.3.2 銀杏外種皮總黃酮的含量測定

        準(zhǔn)確量取1 mL銀杏外種皮總黃酮提取液,置于具塞試管中,按1.3.1法測定吸光度,由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算黃酮類化合物的濃度,進(jìn)而計算銀杏外種皮總黃酮的含量。

        1.3.3 銀杏外種皮提取液黃酮類化合物的含量測定

        準(zhǔn)確量取1 mL銀杏外種皮提取液,置于具塞試管中,按1.3.1法測定吸光度,由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算黃酮類化合物的濃度,進(jìn)而計算銀杏外種皮提取液黃酮類化合物的含量。按下式計算黃酮類化合物的提取率(%):

        2 結(jié)果與討論

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

        用最小二乘法對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行線性回歸,得線性方程:

        Y=0.09894A+0.00180(R=0.9995)

        式中:Y為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,mg·mL-1,A為吸光度。

        2.2 銀杏外種皮總黃酮的含量

        按1.3.2方法,測得銀杏外種皮總黃酮的含量為30.78 mg·g-1。

        2.3 銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果比較(表1)

        表1 不同溶劑、不同方法銀杏外種皮黃酮類化合物的提取率比較/%

        由表1可以看出,從溶劑方面比較,乙醇的提取率最高;從提取方法比較,回流提取法提取率最高。因此,以乙醇作為溶劑、采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果最好,提取率超過84%。

        2.4 重復(fù)性實驗

        以乙醇為提取溶劑,采用回流提取法進(jìn)行3次平行實驗,提取率分別為84.60%、84.53%、84.71%,平均提取率為84.61%,標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0009,RSD為0.10%。表明所確定的最佳方法的重復(fù)性良好。

        3 結(jié)論

        比較了不同溶劑、不同方法對銀杏外種皮黃酮類化合物的提取效果。結(jié)果表明,以乙醇作為提取溶劑,采用回流提取法提取銀杏外種皮黃酮類化合物的效果最好,提取率超過84%,標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0009,RSD為0.10%。為銀杏外種皮資源的開發(fā)利用提供了依據(jù)。

        [1] 馮彤,于新,吳建生,等.不同處理方法對銀杏外種皮黃酮含量變化的影響[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2006,22(4):178-181.

        [2] 李春美,何靜仁,杜紅祥,等.銀杏果外種皮總黃酮提取工藝研究[J].食品科學(xué),2002,23(12):70-74.

        [3] 唐于平,樓鳳昌,王歡,等.銀杏外種皮的化學(xué)成分和藥理作用[J].藥學(xué)進(jìn)展,2000,24(3):152-155.

        [4] 盧錦花,胡小玲,岳紅,等.大孔吸附樹脂對銀杏葉黃酮類化合物吸附及解吸的研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2002,14(2):164-166.

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