苑記清

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院代謝病科，天津300052）

鈉泵控制細(xì)胞許多重要功能，血管平滑肌細(xì)胞膜鈉泵受抑制后，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加，血管平滑肌收縮力增強(qiáng)，血壓增高。有報(bào)道證實(shí)腎功能不全時(shí)Na+-K+-ATP酶活性下降，低蛋白飲食可恢復(fù)部分鈉泵活性。有關(guān)血透對(duì)鈉泵活性影響的報(bào)道限于一次血透前后鈉泵活性的變化，為此筆者檢測(cè)了血透、非血透腎功能不全患者紅細(xì)胞膜鈉泵活性，了解血透對(duì)鈉泵活性的影響及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 慢性腎功能不全患者共52例，其中慢性腎小球腎炎44例，梗阻性腎病、糖尿病腎病各2例，慢性腎盂腎炎、尿酸性腎病、多囊性腎病、狼瘡性腎病各1例。按是否行血液透析治療分2組，非血透組29例（男21例），平均年齡（40.8±15.2）歲，血肌酐（906.93±284.35）μmol/L；血透組 23例（男 15例），平均年齡(39.4±7.7)歲，血肌酐（432.45±197.36）μmol/L，血透時(shí)間（8.3±2.9）月；對(duì)照組為健康查體者 26例（男14例），平均年齡(42.7±18.6)歲。

1.2 方法

1.2.1 紅細(xì)胞膜蛋白的制備 清晨空腹靜脈取血6 mL，置于含 625U肝素的抗凝管中，搖勻，以2500r/min離心10min，分離血漿，用滴管吸出血細(xì)胞上的白細(xì)胞層。剩下的紅細(xì)胞用生理鹽水在同樣的條件下洗滌3次。將洗凈的紅細(xì)胞置于8mL10mmol/L Tris-HCl緩沖液（pH:7.4）中溶血，放置 0.5 h后于16000 r/min下離心20 min，可見管底乳白色紅細(xì)胞膜沉淀，棄去上清的血紅蛋白液和管底的硬結(jié)，再用同樣的緩沖液如此反復(fù)洗3次，可得乳白色紅細(xì)胞膜。將膜懸浮于10 mmol/L Tris-HCl緩沖液中（pH:7.4），使其濃度在1 mg/mL左右。

1.2.2 Na+-K+-ATP酶活性的測(cè)定用孔雀綠定磷法測(cè)定酶活力，反應(yīng)自加入ATP開始，于37℃保溫10 min后加入定磷顯色液1 mL終止酶反應(yīng)。置于室溫30 min后測(cè)定吸光度。

1.2.3 酶活力單位 在37℃下每小時(shí)每毫克膜蛋白催化ATP水解產(chǎn)生1個(gè)nmol無機(jī)磷為1個(gè)活力單位。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用q檢驗(yàn)，兩因素的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 血透組、非血透組Na+-K+-ATP酶活性測(cè)定結(jié)果 兩組酶活性均低于正常對(duì)照組，但血透組酶活力高于非血透組（P<0.005），見表1。

表1 各組Na+-K+-ATP酶活性測(cè)定結(jié)果（±s）

表1 各組Na+-K+-ATP酶活性測(cè)定結(jié)果（±s）

與對(duì)照組相比:*P<0.005；與血透組相比:#P<0.005

組別非血透組血透組對(duì)照組Na+-K+-ATP 酶活性（nmol/mg·h）63.13±22.73*#122.47±58.47*179.75±60.21例數(shù)292326

2.2 非血透組Na+-K+-ATP酶活力與肌酐的相關(guān)分析 二者呈負(fù)相關(guān)，回歸方程：y贊=106.16-0.052x,r=-0.532，P<0.002。

2.3 血透組Na+-K+-ATP酶活力與血透時(shí)間（月）的相關(guān)分析 二者呈正相關(guān)，回歸方程：y=92.64+6.55x，r=0.617，P<0.001。

3 討論

尿毒癥患者紅細(xì)胞的鉀內(nèi)流減少[1]，并被認(rèn)為參與血清鉀的調(diào)節(jié)，可引發(fā)高血鉀。血鉀內(nèi)流減少可能與鈉泵活力減低有關(guān)，并導(dǎo)致一系列細(xì)胞功能失調(diào)，包括鈉外流下降，細(xì)胞水腫等。腎功不全非血透組Na+-K+-ATP酶活力下降，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]，并與血肌酐負(fù)相關(guān)，說明酶的活力可反映腎衰的嚴(yán)重程度。低蛋白飲食可使鈉泵活性上升，本文提示血透組鈉泵活性較非血透組有所上升，但未至正常。本文結(jié)果說明血透治療確能提高鈉泵活性。有報(bào)道尿毒癥患者體內(nèi)有鈉泵抑制因子，推測(cè)尿毒癥鈉泵活性降低與此有關(guān)，并從尿毒癥患者的腹透液中提取了這一因子[3-4]，血透能將這一因子清除可能與血透者鈉泵活性升高有關(guān)。國(guó)外資料顯示血透病人鈉泵活性與正常人無差異[5]，但國(guó)外報(bào)道僅為長(zhǎng)期血透者一次血透后鈉泵的活力結(jié)果。本文結(jié)果還顯示血透組鈉泵活性與血透時(shí)間正相關(guān)，說明鈉泵的活性與血透的充分性有關(guān)。國(guó)外透析器僅使用一次，而國(guó)內(nèi)透析器復(fù)用，這可能導(dǎo)致了本試驗(yàn)與國(guó)外有差異。鈉泵是細(xì)胞膜上的一個(gè)重要的酶，它的活性恢復(fù)利于細(xì)胞基本功能的恢復(fù)，緩解尿毒癥的一系列癥狀，如血管平滑肌細(xì)胞膜鈉泵活性恢復(fù)后，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度由高轉(zhuǎn)低，血管平滑肌收縮力降低，血壓下降，紅細(xì)胞膜鈉泵恢復(fù)，血鉀內(nèi)流增加，血鉀下降等。因此鈉泵的活性還可作為血透充分性的又一指標(biāo)。

［1］Montinaro V,Iaffaldano GP,Granata S,et al.Emotional symptoms,quality of life and cytokine profile in hemodialysis patient[J].Clin Nephrol,2010,73(1):36

［2］Kedzierska K,Bober J,Kwiatkowska E,et al.Oxidative stress and trace elements affect the activity of sodium transporting systems in a cellular membrane of a erythrocyte[J].Ann Acad Med Stetin,2008,54(3):105

［3］Balzan S,Durso G,Nicolini G,et al.Erythrocyte sodium pump stimulation by ouabain and an endogenous ouabain-like factor[J].Cell Biochem Funct,2007,25(3):297

［4］Alves M,Martins MA,Rodrigues N,et al.Modulation of the cationic amino acid transport system y+L by surface potential,ouabain and thrombin in human platelets:effects of uremia[J].Nephron Exp Nephrol,2007,107(4):132

［5］Khundmiri SJ,Amin V,Henson J,et al.Ouabain stimulates protein kinase B(Akt)phosphorylation in opossum kidney proximal tubule cells through an ERK-dependent pathway[J].Am J Physiol Cell Physiol,2007,293(3):1171

［6］Kooman JP,van der Sande FM,Leunissen KM.Role of sodium and volume in the pathogenesis of hypertension in dialysis patients.Reflections on pathophysiological mechanisms[J].Blood Purif,2004,22(1):55