楊亞麗 楊瑞瑞 陜西省食品藥品檢驗(yàn)所 (西安 710061)

我們針對有關(guān)檢測方法進(jìn)行探討,研究建立了離子色譜法測定丹參中二氧化硫殘留的檢測方法[1,2],該方法簡便、快速、靈敏度高、干擾少,能較準(zhǔn)確的測定丹參中二氧化硫殘留量。

1 儀器與試藥 1.1 儀 器 DIONEX ICS-1100型離子色譜儀;AS-11-HC(250mm×4mm)陰離子分析柱;AG-11-HC(50mm×4mm)保護(hù)柱;萬能粉碎機(jī);水蒸汽蒸餾裝置;超純水系統(tǒng)(TTL-10B)。

1.2 試藥 EDTA、硫代硫酸鈉 (Na2 S2O3)、碘(I2)、氫氧化鉀 (KOH)、亞硫酸鈉(Na2 SO3)、淀粉均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為去離子水;樣品為自制熏硫丹參和未熏硫的丹參;硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心 ,標(biāo)示值為 1000μg? m L-1。

2 試驗(yàn)方法 2.1 色譜條件 色譜柱:AS-11-HC(250mm×4mm)陰離子分析柱;淋洗液:20mmol/L氫氧化鉀溶液,等度淋洗;流速:1.0m L? m in-1;進(jìn)樣量:25μL;柱溫為 30℃。

2.2 對照品溶液的配制 將硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液用去離子水稀釋成濃度分別為 500μg? m L1、300μg?m L1、200μg? m L-1、150μg? m L-1、100μg? m L-1、50μg? m L-1、 30μg? m L-1、 20μg? m L-1、 10μg? m L-1、 5μg?m L-1、 3μg? m L-1、2μg?m L-1、1μg? m L-1、 0.5μg?m L-1、 0.3μg? m L-1、 0.2μg? m Ll-1、0.1μg? m L-1的溶液,作為對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 將自制熏硫的丹參樣品粉碎成粗粉[3],取 5g,精密稱定,置水蒸汽蒸餾裝置的樣品瓶中,加水 20m L,在 100m L量瓶中加入 3%的雙氧水20m L作為接收液,吸取鹽酸 5m L加入樣品瓶,立即密封,進(jìn)行水蒸汽蒸餾。至接收瓶中液體接近100m L時(shí),停止蒸餾,取下接收瓶。用去離子水稀釋至刻度,搖勻,作為樣品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 將前述不同濃度的對照品溶液,分別進(jìn)樣 25μL,以峰面積和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,見圖 1。

圖1 線性范圍試驗(yàn)結(jié)果

硫酸根進(jìn)樣量在 0.1μg～500μg之間線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù) r=0.999。

2.5 專屬性試驗(yàn) 用未熏硫的丹參作陰性對照,按樣品溶液的制備方法同法制成陰性對照溶液,以考察是否有假陽性峰干擾測定,測定結(jié)果見圖 2,沒有經(jīng)過硫磺薰制的丹參中未檢出二氧化硫。

圖2 對照品(A)、樣品(B)及陰性對照(C)色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn) 取已制備好的同一份樣品溶液,平行進(jìn)樣 6次,記錄峰面積分別為 4017.3、4112.1、4123.8、4171.9、 4038.3、 4145.9,計(jì)算 RSD為 1.09%,結(jié)果表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取已制備好的同一份樣品溶液 ,分別在 0、1、2、4、8、 12、24h進(jìn)樣 ,記錄峰面積分別為 4081.1、4123.8、4088.9、4186.1、4115.1、4105.7、4142.1,計(jì)算 RSD為 0.82%,結(jié)果表明樣品溶液 24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取自制熏硫丹參粗粉,按供試品溶液制備方法平行制備 6份,按上述測定方法測定,結(jié)果樣品中 SO2平均含量為 253.90μg? g-1,RSD為3.30%。見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱定無水亞硫酸鈉,以0.05%EDTA溶解,用碘量法標(biāo)定[4]。 以 SO2計(jì),對照品濃度為93.46μg? m L-1,用時(shí)用滴定管精密加入10m L。取熏硫丹參5g,按供試品溶液的制備與測定方法操作,平行檢測6份,分別計(jì)算加樣回收率及其均值和 RSD,結(jié)果見表2。

表2 熏硫丹參回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 市場丹參樣品的測定 抽取了十家藥店所售的丹參,以上述方法制備后檢測,結(jié)果見表3。

表3 市場丹參的測定結(jié)果

有部分丹參中 SO2殘留量相對比較高,值得引起關(guān)注。

4 不同檢測方法的比較 4.1 方法比較 本文嘗試采用酸蒸餾碘量法與離子色譜法做一比較,樣本處理和蒸餾儀器裝置部分相同,但連接導(dǎo)氣管的燒杯內(nèi)則改為水和數(shù)滴淀粉溶液,并滴加 0.01mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液使成藍(lán)色。二氧化硫在中藥材中多以亞硫酸、亞硫酸鈉或亞硫酸鉀形式存在,這些化合物與鹽酸反應(yīng)生成二氧化硫,經(jīng)蒸餾與燒杯內(nèi)的碘起還原作用,隨著溶液中碘濃度的減少,溶液有褪色現(xiàn)象,后滴加 0.01mol/L碘標(biāo)準(zhǔn)溶液補(bǔ)充耗用掉的碘,使溶液回復(fù)成藍(lán)色,如此反復(fù)至燒杯內(nèi)溶液于 1min內(nèi)不褪色。二氧化硫濃度可直接用所耗用的碘液量來計(jì)算。

4.2 樣品的含量測定 所抽取十家藥店所售的丹參,以上述方法制備后檢測,結(jié)果見表4。

表4 樣品丹參測定結(jié)果

結(jié)果顯示兩種方法測定丹參中二氧化硫的含量沒有顯著差異。

5 討 論 5.1 總體水平 丹參中二氧化硫的含量并不算太高,但由于它可能會(huì)對人體健康或丹參的質(zhì)量和臨床療效造成影響,所以有必要監(jiān)管二氧化硫在丹參中的殘留。

5.2 在離子色譜法中 當(dāng)進(jìn)行移除溶液中殘留雙氧水的時(shí)候,溶液必須呈陰性,否則會(huì)造成硫酸變成三氧化硫而揮發(fā)掉,導(dǎo)致定量結(jié)果的誤差。

5.3 注意事項(xiàng) 取樣時(shí)注意密封樣品,樣品粉碎后隨放置時(shí)間的延長,二氧化硫含量測定結(jié)果有下降的趨勢;計(jì)算公式為:二氧化硫含量(ppm)=濃度(μg/m L)× 100m L/取樣量 (g)× 0.6669;回收率試驗(yàn)時(shí)將硫酸根與亞硫酸根的量均折算成二氧化硫后計(jì)算。

5.4 實(shí)驗(yàn)證明 選擇水蒸氣蒸餾、離子色譜法作為檢測丹參中二氧化硫殘留量的方法,儀器設(shè)備簡單容易獲得、干擾少;具有快速、簡便、高分辨率、高靈敏度的特點(diǎn),可以考慮作為監(jiān)督丹參藥材中二氧化硫殘留量的標(biāo)準(zhǔn)測定方法。

[1] 中華人民共和國藥典委員會(huì).中國藥典 [S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:191.

[2] 中華人民共和國藥典委員會(huì).中國藥典 [S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:1186.

[3] 王兆基,關(guān)錫耀 ,汪 潔,等.中草藥中二氧化硫含量檢測 [J].中草藥,2000,31(3):23.

[4] 馮斌超,代 茹 ,盧家炯.離子色譜法檢測銀耳中亞硫酸鹽含量的研究[J].食品與藥品,2008,10(05):50-2.