李巧如 宋文惠 劉曉玲 陜西省人民醫(yī)院 (西安 71068)

中藥湯劑是中醫(yī)治病應(yīng)用最普通的劑型,已有幾千年的歷史。目前就中藥湯劑的方法改進(jìn)研究較多,但各種有關(guān)湯劑的制備方法均存在局限性。筆者以冠心湯為例,用改良豆?jié){機(jī)濕法粉碎制備其湯劑,對(duì)其所含藥材丹參、赤芍、川芎、紅花、降香的成分丹酚酸 B、丹參酮Ⅱ A、芍藥苷、阿魏酸、紅花黃色素 A進(jìn)行 HPLC測(cè)定,并與傳統(tǒng)煎煮法和煎藥機(jī)煎煮所得的湯劑進(jìn)行比較,為濕法粉碎能用于中藥湯劑的制備提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與儀器 1.1 材料 丹參、川芎、赤芍(均系陜西產(chǎn))、紅花(浙江產(chǎn))、降香(云南產(chǎn)),以上藥材均購(gòu)自陜西省藥材公司,經(jīng)西安市藥品檢驗(yàn)所鑒定為正品。對(duì)照品丹參酮Ⅱ A(批號(hào):110766-200416),丹酚酸 B(批號(hào):11562-200605),芍藥苷(0736-200014),阿魏酸(批號(hào):110715-200212),紅花黃色素 A(批號(hào):111637-200503),由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純,其余試劑為分析純。

1.2 儀器 島津 10A-vp高效液相色譜儀:包括SPD-M10Avp二極管陣列檢測(cè)器、Shimadzu CLASS VP色譜工作站。Inertsil ODS C18色譜柱(250 mm×4.6mm,5 μ m)(日本株式會(huì)社)。改良豆?jié){機(jī)(研制)。煎藥機(jī) NEW AUTOCOM 100韓國(guó)產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果 2.1 提取方法

2.1.1 濕法粉碎提取法:稱取藥材粗粉:丹參 27.36g,赤芍、川芎、紅花各 13.68g、降香 9.12g,共 77.52g,置改良豆?jié){機(jī)中,加水 600mL,按干豆?jié){制作鍵,程序完成后,過濾,即得提取液。再稱取上述相同量的各藥材粗粉,同上操作,即得各藥材提取液。

2.1.2 傳統(tǒng)煎煮法:稱取藥材飲片:丹參 27.36g,赤芍、川芎、紅花各 13.68g,降香 9.12g,共 77.52g,置砂鍋中,加水 600mL浸泡 20min,煎煮,第一次 45min,第二次 30min,過濾,合并二次煎煮液,即得。

2.1.3 煎藥機(jī)煎煮:稱取藥材飲片:丹參 91.2g,赤芍、川芎、紅花各 45.6g,降香 30.4g,共 258.4g,置煎機(jī)中,按常規(guī)量加水 1500mL,煎煮溫度 150～200℃,壓力 1.2kgf/cm2,煎 50min,即得。

2.2 含量測(cè)定 2.2.1 色譜條件:Inertsil ODS C18色譜柱;流動(dòng)相:A為乙腈,B為 0.05%磷酸溶液,進(jìn)行梯度洗脫,0～5 min,A:15%;5～ 60 min,A:15→ 30%;60～ 70 min,A:30→ 55%;70～ 90 min,A:55→ 65%;90～ 110 min,A:65→ 100%;110～ 115 min,A:100→15% 。檢測(cè)波長(zhǎng) 230nm;柱溫均 25℃;流速 1mL? min-1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取干燥的丹參酮Ⅱ A對(duì)照品適量,加甲醇制成 80 μ g? m L-1的溶液,即得;芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成 228 μ g? mL-1的溶液,即得;丹酚酸 B對(duì)照品適量,加 75%甲醇制成 200 μ g?m L-1的溶液,即得;阿魏酸對(duì)照品適量,加 70%甲醇制成90 μ g? mL-1的溶液,即得;紅花黃色素 A加 25%甲醇制成 200 μ g? mL-1的溶液 ,即得。

2.2.3 供試品溶液的制備:分別精密吸取上述 3種提取液各 10mL置 25mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。用 0.45 μ m微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察:精密吸取上述各對(duì)照品溶液1mL置 5mL量瓶中混合均勻,再分別精密及取 2,4,8,16和 20 μL,依次注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積積分值。以進(jìn)樣量(Y)為縱坐標(biāo),峰面積(X)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸分析,結(jié)果表明:丹參酮Ⅱ A在 0.032～0.32 μ g量之間線性關(guān)系良好,Y=1E-07X+0.0024,r=0.9995;丹酚酸 B在 0.08～ 0.80 μ g量之間線性關(guān)系良好,Y=4E-07X-0.0016,r=0.9994;芍藥苷在 0.0912～ 0.912 μ g量之間線性關(guān)系良好,Y=6E-07X+0.0008,r=1;阿魏酸在 0.036～0.36 μ g量之間線性關(guān)系良好,Y=2E-07X-0.0012,r=0.9992;紅花黃色素 A在 0.08～0.80 μ g量之間線性關(guān)系良好,Y=2E-07X-0.0042,r=0.9998。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn):取對(duì)照品溶液,精密吸取同一進(jìn)樣量,重復(fù)進(jìn)樣 6次,分別測(cè)定峰面積,結(jié)果紅花黃色素 A、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸 B、丹參酮Ⅱ A峰面積的RSD值分別為 0.9%、1.0%、1.8% 、1.3%、2.1%。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密吸取供試品溶液 3號(hào)樣10 μ l,分別于 0,2,4,6和 8 h進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,結(jié)果紅花黃色素 A、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸 B、丹參酮Ⅱ A峰面積的 RSD值分別為 2.2%、1.2%、2.4% 、1.4%、2.6% (n= 5)。

2.2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn):取 3號(hào)供試品溶液 5份,以上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果紅花黃色素 A、芍藥苷、阿魏酸、丹酚酸 B、丹參酮Ⅱ A峰面積的 RSD值分別為 1.9%、1.4%、1.6% 、1.6%、2.3%。

2.2.8 回收率實(shí)驗(yàn):采取加樣回收法。取 3號(hào)樣品5份,分別精密加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,測(cè)定,結(jié)果表明本方法具有良好的回收率。

2.2.9 測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液 10～20 μL,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,將所得值與藥材含量相比,計(jì)算提取轉(zhuǎn)移率(%),即得。結(jié)果見表 2。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 不同提取方法試驗(yàn)結(jié)果(mg/g)(%)(n=2)

試驗(yàn)結(jié)果顯示,冠心湯用豆?jié){機(jī)粉碎提取制得湯劑中丹參酮Ⅱ A、丹酚酸 B、阿魏酸、芍藥苷和紅花黃色素 A提出量最高,可將原藥材中各成分提取完全;傳統(tǒng)方法制得湯劑中丹參酮Ⅱ A不能檢出,阿魏酸提出量也僅為 37.5%,其他三種成分提出量也只有 50%～70%;煎藥機(jī)制得湯劑中丹參酮Ⅱ A和阿魏酸幾乎不能檢出,其他三種成分提出量只有不到藥材含量的 1/3。

3 討 論 3.1 梯度洗脫同時(shí)在 230nm、282nm、316nm、370nm四個(gè)波長(zhǎng)下檢測(cè) 結(jié)果發(fā)現(xiàn)230nm下丹參酮Ⅱ A、丹酚酸 B、阿魏酸、芍藥苷和紅花黃色素 A峰形較好,檢出峰最多;紅花黃色素 A在403nm下有最大吸收,但在 230nm下也有較強(qiáng)吸收,所得計(jì)算結(jié)果同 403nm下。因此,選擇 230nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定五種成分。對(duì)供試品溶劑進(jìn)行篩選后發(fā)現(xiàn)以10mL提取液加 15mL甲醇配制五種成份檢測(cè)效果最好。

3.2 為了克服湯劑的服用不便 近年出現(xiàn)了免煎中藥顆粒,但其在制備中有煎煮、濃縮、制顆、干燥等過程,使中藥許多熱敏性成分損失,且存在單煎和共煎的不同,影響原方藥效[1]。濕法粉碎提取法制備湯劑,使藥材粗粉在一邊煎煮,一邊高速粉碎,能使組織細(xì)胞迅速破碎,使有效成分快速溶解,經(jīng)過濾制得中藥湯劑。藥材受熱時(shí)間短,有效成分不易被破壞,具有提取完全的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,用煎藥機(jī)制得冠心湯劑中丹參酮Ⅱ A和阿魏酸幾乎不能檢出,其他三種成分提出量只有不到藥材含量的 1/3,可能是由于煎煮時(shí)高溫高壓引起化學(xué)成分破壞。傳統(tǒng)湯劑飲片提取不完全,且煎煮時(shí)間較長(zhǎng);用改良豆?jié){機(jī)粉碎提取制得湯劑中丹參酮Ⅱ A、丹酚酸 B、阿魏酸、芍藥苷和紅花黃色素 A提出量最高,可將原藥材中各成分提取完全,與傳統(tǒng)煎藥法和機(jī)煎藥機(jī)相比,能節(jié)約原藥材至少一半以上,而且提取時(shí)間僅用 15min。表明濕法粉碎提取法用于制備中藥湯劑具有高效、方便、快速、節(jié)約大量原藥材的優(yōu)點(diǎn),值得進(jìn)一步研究。

[1]孔 銘,錢大瑋,鞠建明.生化湯飲片湯劑和其免煎配方顆粒的指紋圖譜比較[J].中成藥,2007,29(12):1489-1491.