李秀紅

(陽泉市中醫(yī)醫(yī)院，山西陽泉 045000)

蛇床苦參洗劑由蛇床子、大青葉、土茯苓、黃柏、烏梅等藥味組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功效，用于婦女濕熱帶下，癥見帶下量多、色黃白或黃綠、質(zhì)黏成泡沫狀、有異味、陰部癢痛等癥的治療。方中蛇床子為君藥，性辛溫，具有溫腎助陽、祛風(fēng)燥濕、殺蟲止癢的功效。其化學(xué)成分復(fù)雜，除含有揮發(fā)油外，主要為香豆素類成分，研究證明，香豆素類蛇床子素是有效的止癢成分[1];黃柏為方中臣藥，性苦寒，具有清熱、燥濕、瀉火、解毒之功。黃柏的主要成分為小檗堿，研究證明，黃柏的抗菌有效成分為小檗堿[2]。大青葉為方中佐藥，性苦寒，具有清熱、涼血、解毒的功效，靛苷類成分水解氧化而成的靛藍(lán)是其中的主要抗菌成分。據(jù)此，筆者根據(jù)本品的功能主治及藥味所含主要有效成分，選擇方中蛇床子、黃柏、大青葉中的蛇床子素、小檗堿和靛藍(lán)的薄層色譜，按照《中國藥典》2010版第一部附錄ⅥB的方法作為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

超聲處理器(LC-350A)、紫外分析儀UV-II型(北京賓達(dá)英創(chuàng)科技有限公司)、電熱恒溫水浴鍋(北京永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試藥

蛇床子素對照品(08229802)、小檗堿對照品(110713-200609)、靛藍(lán)對照品(071609403)、靛玉紅對照品(7179402)，以上對照品均購于中國藥品生物制品檢定所。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 蛇床子的薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備

取本品30mL，加水飽和的正丁醇萃取3次，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇2mL溶解作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備

取蛇床子素對照品，加乙醇制成1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 陰性對照品溶液的制備

按本品處方去除蛇床子，按制備工藝制成陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.1.4 TLC實(shí)驗(yàn)

按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取對照品溶液2 μL、供試品溶液5 μL、陰性樣品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯(30∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對照品在相應(yīng)位置上不顯斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 蛇床子薄層色譜Fig 1 Cnidium TLC

2.2 黃柏的薄層色譜鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備

取本品20mL，加甲醇40mL，加熱回流30min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備

取黃柏對照藥材50 mg，加甲醇5mL，同法制成對照藥材溶液;再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成0.5 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備

按本品處方去除黃柏，按制備工藝制成陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.2.4 TLC實(shí)驗(yàn)

按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)為展開劑，置氨蒸汽預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 mm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對照品在相應(yīng)位置上不顯斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 黃柏薄層色譜Fig 2 Golden Cypress TLC

2.3 大青葉的薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備

取本品20mL，加三氯甲烷20mL萃取3次，合并三氯甲烷溶液，作為供試品溶液。

2.3.2 對照品溶液的制備

取靛藍(lán)對照品、靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成1 mg/mL的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 陰性對照品溶液的制備

按本品處方去除大青葉，按制備工藝制成陰性樣品，并按供試品溶液制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3.4 TLC實(shí)驗(yàn)

按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)和淺紫紅色斑點(diǎn)。陰性對照品在相應(yīng)位置上不顯斑點(diǎn)。見圖3。

圖3 大青葉薄層色譜Fig 3 Herba TLC

3 討論

蛇床子的主要成分有香豆精類成分蛇床子素，其藥理作用研究表明，蛇床子素在體外對滴蟲有較強(qiáng)的抑制作用[1]。黃柏中含有小檗堿、藥根堿、黃柏堿等生物堿，其抗菌有效成分主要為小檗堿，體外實(shí)驗(yàn)對金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌等均有抑制作用。黃柏煎液或浸劑對若干常見致病性的真菌有不同程度的抑菌作用，在體外對陰道滴蟲也有較弱作用[2]。大青葉主要成分為黃酮類、靛苷類，研究表明，其水煎液對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型鏈球菌等都有較強(qiáng)的抑制作用[1]。靛苷水解生成吲哚酚，吲哚酚經(jīng)氧化即生成靛藍(lán)。

本品的薄層色譜鑒別，蛇床子素是有效成分，故薄層色譜鑒別以蛇床子素為對照品，在蛇床子素提取過程中，曾以乙醇直接提取，結(jié)果斑點(diǎn)不明顯，判斷是乙醇極性太大，后改為用水飽和的正丁醇萃取，降低提取試劑的極性，提高蛇床子的溶解性，分離效果重現(xiàn)性好，而且陰性無干擾，可作為方中蛇床子的定性鑒別。

本品薄層色譜鑒別中的黃柏有效成分為小檗堿，但是，小檗堿不是僅存在于黃柏中，所以分別以黃柏對照藥材和小檗堿對照品作為對照，以提高鑒別的專屬性。

在實(shí)驗(yàn)中曾把提取的供試品直接以乙酸乙酯-丁酮 -甲酸 -水(10∶6∶1∶1)為展開劑展開，結(jié)果拖尾顯現(xiàn)嚴(yán)重，斑點(diǎn)不明顯，后來以氨蒸汽預(yù)飽和展開劑展開，拖尾現(xiàn)象消失，斑點(diǎn)明顯可辨。

本品薄層色譜鑒別中的大青葉主要成分靛苷水解生成吲哚酚，吲哚酚氧化即生成靛藍(lán)，故在實(shí)驗(yàn)中以靛藍(lán)和靛玉紅為對照，以提高鑒別的專屬性。

[1] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1975.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社，1977.