張群芳

斂肺止咳丸是以罌粟殼為主藥制成的醫(yī)院制劑，具斂肺、降氣、止咳功效，臨床用于急慢性支氣管炎，療效確切。因標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，故參閱2010年版《中國(guó)藥典(一部)》中高效液相色譜法測(cè)定罌粟殼中嗎啡的含量[1]346，筆者建立了高效液相色譜法測(cè)定樣品中嗎啡的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000泵，Dionex UltiMate 3000二極管陣列檢測(cè)器。嗎啡對(duì)照品(批號(hào)為171201－200822，105℃干燥1 h后使用，含量為99.8%，中國(guó)藥品生物制品檢定所);斂肺止咳丸(批號(hào)分別為100610，100915，100828，荊門(mén)市第一人民醫(yī)院);水為純化水，乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸鈉(24∶38 ∶38);檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取嗎啡對(duì)照品12.64 mg，置100 mL棕色量瓶中，加甲醇約30 mL，超聲15 min，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為嗎啡貯備溶液;精密吸取貯備溶液3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品(批號(hào)為100610)適量，研細(xì)，精密稱(chēng)取供試品2.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。按處方制備工藝制得不含罌粟殼的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，未出現(xiàn)與嗎啡對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，表明陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:取 2.2 項(xiàng)下嗎啡貯備溶液 1，2，3，5 mL，置 10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液1，2，3，4。取對(duì)照品溶液 1，2，3，4和嗎啡貯備溶液各 10μL，進(jìn)樣。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、嗎啡對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程 Y=45.107X －0.339 5，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，嗎啡進(jìn)樣量在0.126 1～1.261μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果嗎啡峰面積的 RSD為 0.4%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，避光放置，分別在0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD為1.0%(n=9)，表明供試品溶液避光條件下在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果嗎啡含量的 RSD為 1.6%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量(1.40 mg/g，批號(hào)為100610)的樣品適量，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，共9份，分別精密加入2.2項(xiàng)下嗎啡貯備溶液 3.0，3.0，3.0，4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0 mL，按供試品溶液制備方法處理，并依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，按擬訂的方法分別制備供試品溶液。取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μL，在擬訂的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)分別為100610，100915，100828的斂肺止咳丸中，嗎啡的含量分別為 1.40，1.65，1.07 mg/g。

表1 嗎啡加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

3 討論

斂肺止咳丸是醫(yī)院制劑，臨床試驗(yàn)證明其安全、有效。方中罌粟殼斂肺、澀腸、止痛，為君藥。筆者以罌粟殼中嗎啡為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中嗎啡含量。曾比較了樣品分別超聲處理20，30，40 min，結(jié)果30 min與40 min超聲處理結(jié)果無(wú)明顯差異，故選用超聲處理30 min;分別試驗(yàn)了采用C18柱，以0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液 － 乙腈(90 ∶10)[2]，乙腈 －0.1%磷酸溶液(15∶85，每100 mL中加庚烷磺酸鈉0.1 g)[1]411為流動(dòng)相，結(jié)果不對(duì)稱(chēng)因子較大。而采用C8柱，乙腈－0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液－0.005 mol/L庚烷磺酸鈉(24∶38∶38)為流動(dòng)相，分離效果良好且保留時(shí)間也相宜，可用于控制斂肺止咳丸的質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]WS3－393(Z－049)－2004(Z)，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)·新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第63冊(cè)[S].