覃業(yè)語

（海南省人民醫(yī)院藥學部，海南 海口 570311）

頭孢他啶（Ceftazidime）又名頭孢噻甲羧肟，是第三代頭孢菌素，抗菌譜廣，抗菌活性強，并對多種β-內酰胺酶高度穩(wěn)定，其最大特點是對綠膿桿菌的抗菌活性特別強，優(yōu)于目前臨床使用的所有頭孢菌素和廣譜青霉素類抗生素，在臨床應用十分廣泛。

頭孢他啶本身為酸性物質，pH值3.0～4.0，且具有一定的疏水性，難溶于酸性溶液，pH近中性條件下溶解度高。而臨床上常用作溶解、稀釋劑的生理鹽水、5%葡萄糖液的pH值分別為4.5～7.0、3.2～5.5，均偏酸性，所以以往都采用在頭孢他啶制劑中加入碳酸鈉作為助溶劑，調節(jié)pH值利于頭孢他啶溶解。經(jīng)過長期臨床使用發(fā)現(xiàn)碳酸鈉作為助溶劑有很多缺點[1]，如使用以碳酸鈉作為助溶劑的頭孢他啶會增加心臟病、高血壓、腎病、肝腹水等需要限制鈉離子攝入的患者用藥風險性，另外以碳酸鈉作為助溶劑的頭孢他啶在稀釋時會產(chǎn)生CO2氣體，如果排氣操作不當可能會污染藥液，在輸液過程中CO2溶出產(chǎn)生氣泡使氣體進入患者血液內可能形成氣體栓塞，如阻塞出現(xiàn)在心、腦主要血管對患者會造成很大危險。用有機化合物精氨酸代替碳酸鈉作為頭孢他啶助溶劑，用藥安全性和穩(wěn)定性都有很大的提高。

中國藥典2005年版二部采用高效液相色普法(HPLC)測定頭孢他啶和碳酸鈉的含量[2]。本文建立了HPLC外標法，對注射用頭孢他啶(含精氨酸)可同時測定頭孢他啶、精氨酸的含量，被測組分能較好地分離，線性關系良好，回收率滿意。該法專屬性好、快速、準確，適用于原料合成及制劑分裝前生產(chǎn)過程的質量監(jiān)控。

1 儀器、藥品及試劑

Agilent 1100 series高效液相色譜儀(包括G1314A VWD檢測器，G1311A Quat Pump泵，G1329A自動進樣器，G1314A可變紫外線分光光度檢測器，真空脫氣機和Agilent化學工作站)，注射用頭孢他啶樣品(規(guī)格1.5 g，批號為050601 050602 050603，由深圳制藥廠提供；頭孢他啶對照品(批號0484-9901)(含量為84.9%)、精氨酸含量對照品（批號140685-200401）均由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈，色譜純；其余試劑均為分析純。

2 色譜條件選擇

2.1 檢測波長的選擇 取頭孢他啶和精氨酸對照品適量，加流動相溶解，制成每1 ml含約10 μg的溶液，在200～400 nm處掃描其紫外吸收。結果顯示：頭孢他啶在256 nm和209 nm波長處有最大吸收，精氨酸在206 nm有最大吸收，故選擇206 nm作為本品有關物質的檢測波長。

2.2 柱子的選擇 根據(jù)柱子的極性不同我們試驗了C18＞C8＞苯基柱PH-3＞苯基柱PH-2（①依利特Hypersil C18 10 μm 4.6 mm ×250 mm；②Agilent Eclipse DB-C8 4.6 mm×150 mm ；③Shimadzu vp-ODS150L×4.6mm 5012136；④Inertsil 1LI05521 pH-3 5 μm4.6 mm×250 mm；⑤PLenomen 250 mm×4.6 mm；⑥Thermo Hypersil pHenyl 2 Column 250 mm×4.6 mm5 μm），結果表明苯基柱2的分離效果優(yōu)于其他柱。

2.3 流動相組分和組分比例的選擇[3-5]（1）以磷酸鹽緩沖液-乙腈88：12為流動相,流速1.0 ml/min，取對照溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明：磷酸鹽緩沖液-乙腈僅能檢測到一個峰（精氨酸），另一個峰（頭孢他啶）未被檢出。（2）以醋酸鹽緩沖液-甲醇88：12為流動相，流速1.0 ml/min，取對照溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明：磷酸鹽緩沖液-乙腈僅能檢測到一個峰（頭孢他啶），另一個峰（精氨酸）未被檢出。（3）以醋酸鹽緩沖液-乙腈88：12為流動相，流速1.0 ml/min，取對照溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明：醋酸鹽緩沖液-乙腈能檢測到二個峰。但精氨酸的保留時間過短與溶劑峰分離不好，故減小流動相有機相的比例，選擇醋酸鹽緩沖液-乙腈（95：5）溶液作為本品含量檢測的流動相，分離度較好。

2.4 流動相pH的選擇 以醋酸鹽緩沖液-乙腈（95：5）溶液作為流動相，用稀醋酸或1 mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH值，分別選擇pH值為5.0、7.0和8.5的流動相，流速1.0 ml/min，取對照溶液20 μl注入色譜儀，記錄色譜圖，考察三者的保留時間T和分離度R。結果表明：以醋酸鹽緩沖液-乙腈（95：5）溶液為流動相，隨著pH值的增加，pH 5.0時兩種物質峰保留時間較為理想，而醋酸鹽緩沖液-乙腈（95：5）溶液的pH值約為7.0或8.5時，只檢測到頭孢他啶峰，而精氨酸的峰未檢測到。選擇醋酸鹽緩沖液-乙腈（95：5）溶液pH為5.0時作流動相作為本品含量的流動相。

2.5 通過以上實驗確定色譜條件 色譜柱：ThermoHypersilPhenyl-2column(250mm×4.6mm 5μm)；流動相：乙腈-醋酸鹽緩沖液(稱取醋酸鈉0.7 g和冰醋酸0.15 g加水稀釋到1 000 ml，用0.1 mol/L稀冰醋酸或1 mol/L氫氧化鈉調節(jié)pH值到（5.0±0.1)(5：95)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：206 nm；柱溫30℃。

3 系統(tǒng)適用性實驗

3.1 對照溶液的配制 在本實驗流動相系統(tǒng)下，精密稱取頭孢他啶對照品0.027 08 g、精氨酸對照品0.012 17 g，置25 ml容量瓶中，用流動相超聲溶解，混勻，稀釋到刻度，取其溶液20 μl，進樣，色譜圖見圖1。在該色譜條件下，對照品頭孢他啶與精氨酸的混合溶液兩者的分離度大于1.5，保留時間相對滿意，頭孢他啶與助溶劑精氨酸能較好地分離，系統(tǒng)適應性良好，見表1。

圖1 對照混合溶液色譜圖

表1 系統(tǒng)適應性結果

3.2 樣品溶液的制備 取頭孢他啶樣品，精密稱取0.019 64 g，置于25 ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，取其溶液20 μl，進樣，色譜圖見圖2。

圖2 樣品溶液色譜圖

4 方法學考察

4.1 線性關系考察 分別精密稱取頭孢他啶對照品和精氨酸含量對照品適量，用流動相分別制成含頭孢拉定0.09196、0.229 9、0.459 8、0.6897、0.919 6 mg/ml，含精氨酸0.04868、0.121 7、0.243 4、0.365 1、0.486 8 mg/ml的混合溶液，精密量取上述混合溶液20 μl，進樣，以各樣品濃度對峰面積回歸，得頭孢他啶和精氨酸回歸方程分別為：

結果表明頭孢拉定、精氨酸分別在0.091 96～0.919 6 mg/ml和0.04868～0.486 8 mg/ml范圍內線性關系良好。

4.2 精密度試驗 取頭孢他啶和精氨酸對照品混合溶液，分別連續(xù)進樣6次，以峰面積計算，相對標準偏差(RSD)分別為0.05%和0.74%。日內和日間精密度RSD分別為0.08%～0.15%和0.29%～0.82%。

4.3 重復性實驗 取同一批樣品，按含量測定方法平行配制5份，分別測定，頭孢他啶和精氨酸測定結果的RSD分別為0.47%和0.90%。不同時間測試，頭孢他啶和精氨酸的測定結果的RSD分別為0.71%(n=5)、1.21%(n=5)。

4.4 穩(wěn)定性實驗 在本實驗條件下樣品溶液室溫放置，分別于0 h、1 h、2 h 、4 h、15 h進樣，測定峰面積，頭孢他啶RSD為0.64%(n=5)，精氨酸RSD為0.87%(n=5)。

4.5 加樣回收試驗 采用加樣回收法，取已知含量的樣品溶液，分別精密加入頭孢他啶對照品1.5 mg、2.5 mg、3.5 mg，精氨酸對照品 0.75 mg、1.25 mg、2.75 mg，按樣品測定法測定，計算加樣回收率及RSD(見表 2)。

表2 加樣回收試驗（%）

5 樣品測定

分別精密稱取不同批號頭孢他啶樣品約37 mg，置于50 ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻做為樣品溶液，取20μl進樣，結果見表3。

表3 樣品測定（%）

6 討論

頭孢他啶分別在256 nm和209 nm附近有吸收，同時精氨酸在206 nm附近有最大吸收，故實驗波長選擇206 nm。但是所選的波長吸收為紫外檢測器的邊緣吸收，實驗過程中應注意基線的穩(wěn)定性。

流動相采用極性較大的乙腈，本文試驗了不同配比的乙腈-醋酸鹽緩沖液組成的流動相分離效果，隨著乙腈的比例不斷減少，各組份保留時間相應提高，我們選擇乙腈-醋酸鹽緩沖液配比為5：95時為實驗流動相的配比，保留時間也相對滿意，且各組分間分離度均大于1.5，頭孢他啶與助溶劑精氨酸能較好地分離。

[1]詹少錦,劉蓉惠,卞益民.頭孢他啶不同助溶劑之比較[J].廣東藥學雜志,2005,15(3)：68-69.

[2]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[S].2005年版,二部附錄.北京：化學工業(yè)出版社,2005：234.

[3]胡昌勤.高效液相色譜法在抗生素質控分析中的應用(下冊)[M].北京：氣象出版社,2001：48.

[4]方娟娟,余衛(wèi)平,邢艷霞,等.高效液相色譜法測定人血清中頭孢他啶的濃度[J].東南大學學報（醫(yī)學版）,2004,23(6)：388-390.

[5]彭 軍,任 耘,孫 悅.高效液相色譜法測定頭孢他啶注射劑的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2001,21(10)：601-602.